绝经后骨质疏松症肾阴虚证的病理机制及补肾滋阴法干预研究

发布时间：2020-06-21 09:47

【摘要】：目的基于前期临床研究证素辨证成果,PMOP的主要病位在肾,主要病性为阴虚,本课题以二至丸为探针,以骨代谢紊乱及Sirt1/Runx2信号通路为切入点,从分子机制出发探讨补肾滋阴法治疗PMOP的作用机理,以期为补肾滋阴法防治绝经后骨质疏松症的基础研究提供新的思路。方法3月龄雌性SD大鼠60只,随机数字表法分为假手术组20只与手术组40只。假手术组,在双侧卵巢周围切除少许脂肪组织;手术组摘除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症大鼠模型,术后2周,随机数字表法分为模型组和二至丸组,每组20只。假手术组,以等量生理盐水灌胃;模型组,以等量生理盐水灌胃;二至丸组,以0.3g/ml二至丸(3ml/kg)灌胃,连续灌胃12周,每日1次。每两周记录体重变化,Micro-CT检测第五腰椎骨密度(Bone Mineral Density,BMD),HE染色观察第五腰椎骨小梁形态学变化,三点弯曲试验检测股骨胫骨的生物力学特性,ELISA检测大鼠血清中骨代谢标记物骨碱性磷酸酶(Bone Alkaline Phosphatase,BALP)、骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、雌二醇(Estradiol,E2)、性激素结合球蛋白(Sex Hormone Binding Globulin,SHBG)和核因子-κB受体活化因子配体(Receptor Activator ofNF-κB Ligand,RANKL)表达变化,qPCR 及 Western-blot 检测骨组织 Sirt1、Foxo1、Foxo3a、PPAR-γ和 Runx2 基因及蛋白表达变化,探针试剂盒检测骨组织miR-132基因表达变化。结果1.影像学检测:L5腰椎骨密度(BMD)、松质骨与皮质骨体积分数(BV/TV)、骨小梁宽度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)检测结果显示,假手术组、二至丸组BMD、BV/TV、Tb.Th明显下降,Tb.Sp明显升高,与模型组相比差异具有统计学意义(P0.01,P0.05)。2.组织学检测:假手术组L5腰椎骨小梁致密,分布均匀,排列规则,表面光滑,交织成网状,骨小梁间隙均匀。模型组腰椎骨小梁变细、分布稀疏、散乱、不连续,表面粗糙,完整性差,出现碎片、断裂等。二至丸组腰椎骨小梁变细,数量减少,分布稀疏,排列较规则。3.生物力学检测:股骨干及胫骨干生物力学检测结果显示,模型组的股骨断裂点和胫骨断裂点均低于假手术组(P0.01)。二至丸组股骨断裂点和胫骨断裂点都高于模型组(P0.05)。4.骨代谢标记物血清含量检测:模型组血清E2水平低于假手术组,而血清SHBG水平高于假手术组(P0.01,P0.01)。模型组血清BALP、OPG、OPG/RANKL水平均低于假手术组(P0.01),而血清RANKL水平高于假手术组(P0.01)。二至丸组血清E氐和SHBG水平与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。然而,二至丸组BALP、OPG、OPG/RANKL的表达均高于模型组(P0.05),同时二至丸组血清RANKL的表达低于模型组(P0.01)。5.Sirt1/Runx2信号通路相关生物标志物mRNA和蛋白表达检测:Sirt1、Runx2、Foxo1、Foxo3a的表达mRNA和蛋白的结果都显示出相同的趋势,模型组低于假手术组(P0.01,P0.05),PPAR-γ的mRNA和蛋白的表达结果模型组均高于假手术组(P0.01,P0.05)。二至丸组 Sirt1、Runx2、Foxo1、Foxo3a 的表达 mRNA 和蛋白的结果均高于模型组(P0.01,P0.05),PPAR-γ的mRNA和蛋白的表达结果均低于模型组(P0.01,P0.05)。6.骨组织miR-132基因表达的变化:模型组miR-132的表达显著高于假手术组(P0.01),二至丸组miR-132的表达低于模型组(P0.05)。结论1.二至丸改善绝经后骨质疏松症模型大鼠的骨密度和骨小梁数量,增强生物力学特性。2.二至丸通过激活Sirt1/Runx2信号通路,抑制破骨细胞的分化,降低骨吸收水平,减少骨量丢失,从而抑制PMOP大鼠骨质疏松的病理进程。
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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本文编号：2723891