淫羊藿苷对大鼠退变髓核细胞炎性因子影响的实验研究

发布时间：2020-06-21 23:25

【摘要】：1.目的:通过体内实验,建立大鼠椎间盘退变模型,予高中低浓度淫羊藿苷口服,按照实验时间点,通过Western blot和Real-time PCR法检测炎性因子IL-1β,IL-6的表达情况,并利用MRI观察椎间盘退变程度、HE染色观察椎间盘形态及免疫组化染色法检测椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)内细胞外基质Agg,coⅢ表达情况。体外实验检测淫羊藿苷对大鼠退变髓核细胞分泌炎性因子IL-6、IL-lp以及髓核细胞增殖、细胞外基质Agg,coⅢ的影响。通过体内、体外实验明确淫羊藿苷是否影响大鼠退变髓核细胞分泌炎性因子,进而延缓椎间盘退变。2.方法:2.1体内实验将60只SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、椎间盘退变组(IDD)及低中高浓度淫羊藿苷(ICA)组(ICAL,ICAM,ICAH),每组12只。采用穿刺大鼠尾椎间盘法制备IDD模型。术后对各组大鼠灌胃。ICA组分别灌胃ICA(25,50,100 mg/kg.d),Sham及IDD组给予等量生理盐水灌胃。术后2w及6w将大鼠麻醉进行MRI检查。术后2w及6w进行取材,用Western blot和Real-time PCR法检测炎性因子IL-1β,IL-6的表达情况;HE染色观察椎间盘形态;免疫组化染色观察NP内细胞外基质Agg,coⅢ表达情况。2.2体外实验将Sham提取的NP细胞标记为对照组(Control),IDD组提取的NP随机均分为4组(IDD、ICAL、ICAM及ICAH),ICA组用不同浓度ICA(10,20,40μM)处理24h,Control与IDD组则加入等量培养基。采用CCK-8测定NP细胞的增值能力。细胞免疫荧光,通过成像系统观察采集图像。收集各组NP细胞用于Western blot和Real-time PCR检测IL-1β,IL-6表达量,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测收集上清液中IL-1β,IL-6水平。3.结果3.1 ICA可以抑制IL-1β,IL-6表达,促进Aggrecan,CollagenⅡ表达术后2w及6w两个时间点,Western blot和Real-time PCR结果均显示IDD组NP组织中IL-1β,IL-6表达量高于Sham及各浓度ICA组,而免疫组化显示IDD组Aggrecan,CollagenⅡ的表达量则低于其它组,表明IDD过程中炎症因子IL-1β,IL-6表达上调及胞外基质AggrecaⅡ,CollagenⅡ表达下调;ICA可以抑制IL--1β,IL-6表达,促进Aggrecan,CollgenⅡ表达。3.2 ICA可减轻大鼠椎间盘穿刺引起的退变7.0T MRR图像所示,比较IDD组与ICAM组穿刺椎间盘的T2加权信号强度:术后2w,,ICAM组信号强于IDD组;术后6w,IDD组信号消失,ICAM组则无明显改变。ICAM组Pfirrmann MRI等级评分(表明椎间盘退变程度)明显低于IDD组。术后6w的的E染色显示,与Shhm组相比,IDD组椎间盘退变严重,纤维环破裂呈断层状,层间空隙增宽,椎间盘内NP组织体积较小,形态不规则排列无序,NP细胞数量大量较少,形态呈类软骨样细胞样改变;;而ICAA组在细胞外基质含量、纤维环及NP细胞形态方面均优于IDD组。3.3 ICA促进退变NP细胞增殖据文献报道分别给予不同浓度ICA(10,20及44μM)处理ICA组NP细胞。采用CK-8法测定NP细胞的增殖活性。结果显示IDD组NP细胞增殖力明显低于control及ICA组,表明ICA促进退变NP细胞增殖。3.4.ICA抑制NP细胞IL-1β,IL-6表达体外实验中,Real-time PCR及ELSIA结果显示:与Control组相比,IDD组NP细胞IL-1β,IL-6表达显著上调。ICA处理后与IDD组比较,NP细胞L--1,,L-6表达显著下调(P0.05)。免疫荧光显示:与IDD组相比,,ICA组NP细胞核及细胞质上聚集的的IL-1β、IL-6荧光强度更弱。3.5.ICA抑制胞外基质Aggrecan,Collagen Ⅱ降解根据Western blot及Real-time PCR结果所示,与与control组相比,IDD组NP细胞外质Aggrecan和和collagenⅡ表达水平显著降低,,而ICA处理后可以提高Aggrecan和和collagenⅡ表达水平。4.结论:淫羊藿苷可以减轻体内大鼠椎间盘退变,促进退变髓核细胞增殖,并抑制炎症因子表达以及细胞外基质降解,因此可能成为治疗椎间盘退变的药物。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

图１注：术后２ｗ时，ＩＣＡ对ＩＤＤ大鼠ＮＰ组织中ＩＬ－ｉｐ与ＩＬ－６表达的影响。（Ａ－Ｃ）ＮＰ中ＩＬ－ｉｐ逡逑与ＩＬ－６蛋白相对表达量。（Ｄ－Ｅ）ＮＰ中ＩＬ－ｉｐ与ＩＬ－６ｍＲＮＡ相对表达量。与ＩＤＤ组相比，＊Ｐ＜０．０５，逡逑ｎ＝６。与邋Ｓｈａｍ邋组相比，＃Ｐ邋＜邋０．０５，ｎ＝６。逡逑３．２术后６ｗ邋ＩＬ－ｉｐ，邋ＩＬ－６在ＮＰ组织中的表达逡逑术后６ｗ时，根据Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ和Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ结果，所得结论与术后２ｗ相同，再逡逑次表明高中低剂量ＩＣＡ均可以抑制ＮＰ组织中ＩＬ－ｌｐ，邋ＩＬ－６的表达。（图２）逡逑泰逡逑

３．２术后６ｗ邋ＩＬ－ｉｐ，邋ＩＬ－６在ＮＰ组织中的表达逡逑术后６ｗ时，根据Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ和Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ结果，所得结论与术后２ｗ相同，再逡逑次表明高中低剂量ＩＣＡ均可以抑制ＮＰ组织中ＩＬ－ｌｐ，邋ＩＬ－６的表达。（图２）逡逑泰逡逑１２逡逑

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 邓爱平;方文韬;周青罡;杨洪军;王凌;南铁贵;康利平;郭兰萍;黄璐琦;詹志来;;淫羊藿质量影响因素及质控对策分析[J];中国中药杂志;2018年05期

2 赵金玲;;补肾强身片中淫羊藿苷的含量测定[J];黑龙江科技信息;2013年02期

3 关宇强;杨国林;梁纪兰;严作廷;谢家声;李世宏;王东升;;HPLC法测定催情助孕液中淫羊藿苷含量的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2009年11期

4 孔少仪,陈刚梅,周月兰;反相高效液相色谱法测定金蚧片中淫羊藿苷的含量[J];中国药业;2003年10期

5 王欣;王婷婷;王海军;翁代群;阳勇;李青;罗维早;;淫羊藿中淫羊藿苷提取工艺研究[J];重庆中草药研究;2010年01期

6 黄耀广;陈秀英;;RP-HPLC法测定回春胶囊中淫羊藿苷的含量[J];中国药事;2008年01期

7 杨丽红;肖波;侯丽霞;姚冬;;淫羊藿苷调节细胞增殖作用的研究进展[J];医学信息;2019年01期

8 张素琴;周建华;胡蓉;;淫羊藿苷对人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的干预作用研究[J];老年医学与保健;2019年01期

9 谷春秀;于燕;王璐;葛喜珍;;黑曲霉固态发酵对淫羊藿苷含量的影响及检测[J];生命科学仪器;2012年02期

10 谢香菊;杨清林;王贤英;赵健权;;HPLC测定参仙片中淫羊藿苷的含量[J];重庆中草药研究;2011年01期

相关会议论文 前10条

1 唐望;焦锋;;淫羊藿苷在体内外促进兔骨髓间充质干细胞迁移及其机制探讨[A];第二十四届中国中西医结合骨伤科学术年会论文汇编[C];2017年

2 徐双双;王尉;乐胜锋;林楠;杜宁;张经华;;淫羊藿苷标准样品的研制[A];中国化学会第十一届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会（大会特邀报告及墙报）论文摘要集[C];2016年

3 张士更;吕伯东;黄晓军;杨克冰;马寅锋;傅俊;钱乐;耿强;;淫羊藿苷复合物治疗早泄的疗效观察[A];2009年浙江省男科、泌尿外科学术年会论文汇编[C];2009年

4 孟华;王广基;孙建国;吴晓兰;郑媛婷;;体外及在体方法研究淫羊藿苷吸收特性和机制[A];中国药理学会制药工业专业委员会第十一届学术会议论文摘要汇编[C];2004年

5 王琳;李琰;徐运;;淫羊藿苷对脑缺血再灌损伤的保护作用及机制研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

6 吴涛;金丹;南开辉;裴国献;;淫羊藿苷可促进羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年

7 王鑫;徐运;;淫羊藿苷调控中枢神经系统乙酰化内稳态改善卒中后痴呆[A];2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议论文汇编[C];2013年

8 农以宁;张桂勇;周惠兰;;HPLC法测定蚁神护宝液中淫羊藿苷含量的研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（下册）[C];2001年

9 马晟利;;淫羊藿苷对高糖培养条件下大鼠骨髓基质细胞Shh通路的影响[A];中华口腔医学会第九次全科口腔医学学术会议论文汇编[C];2018年

10 王强松;李昊;李瑞欣;韩标;张新昌;李煜;李东;苏卫华;安慰宁;张西正;;力学刺激与淫羊藿苷在骨重建耦合作用机制的研究[A];第十一届全国生物力学学术会议暨第十三届全国生物流变学学术会议会议论文摘要汇编[C];2015年

相关重要报纸文章 前3条

1 组稿：何建昆;淫羊藿苷芍药苷药效药理简述[N];科技日报;2001年

2 殷晓雪 陈仲强 党耕町;北京大学——淫羊藿苷可促进人成骨细胞增殖与分化[N];中国医药报;2006年

3 王雪飞;动物实验证实 淫羊藿苷可促胚胎干细胞定向分化[N];健康报;2007年

相关博士学位论文 前10条

1 田龙;淫羊藿苷对勃起功能的作用机制研究[D];武汉大学;2004年

2 李梨;淫羊藿苷对缺血再灌致脑损伤保护作用的实验研究[D];重庆医科大学;2005年

3 肖强兵;淫羊藿甙对人工关节假体松动的作用及其分子机制[D];华中科技大学;2006年

4 王耀;水蛭酶解提取物和淫羊藿苷抑制动脉粥样硬化进展的药理学机制研究[D];山东大学;2017年

5 郝福良;淫羊藿苷促进兔颅骨缺损修复愈合的影响和机制的探讨[D];河北医科大学;2013年

6 蒋平平;基于代谢组学探讨高果糖对幼年大鼠生殖及子代的影响与淫羊藿苷的干预作用[D];南方医科大学;2017年

7 陈学杰;淫羊藿苷对精索静脉曲张模型大鼠附睾病变的影响[D];武汉大学;2012年

8 高毅;淫羊藿苷对成骨细胞增殖分化的影响及机制探讨[D];河北医科大学;2013年

9 刘宝君;淫羊藿苷对皮质酮诱导的原代培养海马神经元损伤的保护作用及其机制探讨[D];复旦大学;2009年

10 曾丽;淫羊藿苷抑制骨关节炎基质金属蛋白酶的机制研究[D];重庆医科大学;2014年

相关硕士学位论文 前10条

1 李莹;淫羊藿苷/素对AD样SH-SY5Y细胞p-Tau、GSK-3β及PP2A表达水平影响的研究[D];遵义医科大学;2019年

2 张莹;淫羊藿苷通过改善脑糖代谢功能紊乱对APP/PS1/Tau三转基因AD模式小鼠的神经保护作用[D];遵义医科大学;2019年

3 董晤讯;淫羊藿苷对大鼠退变髓核细胞炎性因子影响的实验研究[D];南京中医药大学;2019年

4 侯震坤;淫羊藿苷对关中黑猪精液常温保存效果的研究[D];西北农林科技大学;2018年

5 冯蓬勃;淫羊藿苷干预OB-OC耦联对干细胞成脂分化的影响及临床标本研究[D];广州中医药大学;2016年

6 刘迎节;力学过载与淫羊藿苷耦合作用对成骨细增殖、分化的影响[D];天津医科大学;2018年

7 姜晓野;高产淫羊藿苷酶的菌种的筛选及其酶反应条件[D];大连工业大学;2008年

8 黄俊明;淫羊藿苷经Wnt/β-catenin信号通路调控骨髓间充质干细胞的成骨—成脂双向分化[D];华中科技大学;2017年

9 王丹;淫羊藿苷诱导小鼠黑色素瘤B16细胞分化及周期阻滞的分子机制研究[D];滨州医学院;2018年

10 陈东英;淫羊藿苷对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响[D];兰州大学;2018年

本文编号：2724810