CQ复方在大鼠体内药代动力学特征研究

发布时间：2020-06-26 17:00

【摘要】：本课题旨在药效学研究的基础上,采用RP-HPLC法同时测定指标性成分盐酸青藤碱与盐酸川芎嗪的血药浓度,研究CQ复方主要成分盐酸青藤碱和盐酸川芎嗪的药代动力学特征;并通过考察CQ复方在正常大鼠及骨癌痛模型大鼠血浆中的药代动力学过程,比较正常和疼痛病理状态下的药代动力学特征差异,为临床应用CQ复方治疗癌痛提供更多有价值的借鉴信息;明确CQ复方中主要成分盐酸青藤碱和盐酸川芎嗪的体内相互作用关系,为揭示CQ复方作用机制和临床给药方案提供依据。建立盐酸青藤碱与盐酸川芎嗪在大鼠血浆中含量测定的RP-HPLC分析方法。本实验选用内标法,以茶碱作为内标。色谱条件为:色谱柱Extend-C_(18)(4.6mm×250 mm,5μm,Agilent,USA)。流动相:A:B为PBS缓冲液(0.1%三乙胺调pH9.4~9.5):甲醇;梯度洗脱(0min,40%B;4min,45%B;12min,55%B;15min,40%B);流速0.8mL·min~(-1);柱温30℃;265nm、280nm紫外双波长检测。经方法学验证,该方法精密度、准确度、稳定性和回收率等均符合相关规定。血浆中盐酸青藤碱在0.05~10μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好,线性回归方程为y=0.2914x-0.0099(R~2=0.9978),取(10μg·mL~(-1)、1.25μg·mL~(-1)、0.625μg·mL~(-1))三个浓度测提取回收率为100.08%、99.51%、104.94%,日内精密度为3.25%、3.59%、3.92%,日间精密度分别为3.98%、6.74%、5.72%,室内8h稳定性分别为9.98%、7.72%、4.46%;盐酸川芎嗪在0.025~10μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好,线性回归方程为y=0.8615x+0.169(R~2=0.9985),取(10μg·mL~(-1)、1.25μg·mL~(-1)、0.625μg·mL~(-1))三个浓度测提取回收率为99.67%、100.43%、97.85%,日内精密度为3.66%、3.83%、6.49%,日间精密度分别为4.13%、5.08%、5.23%,室温8h稳定性分别为10.27%、7.27%、5.01%。本文建立的RP-HPLC方法简便、灵敏、准确,适用于盐酸青藤碱和盐酸川芎嗪在生理和病理状态下大鼠体内血浆药物浓度测定和药代动力学的研究。建立骨癌痛大鼠模型。将适应性刺激筛选合格的大鼠分为假手术组和模型组,取5uL 4.7*10~4个/uL的Walker 256腹水癌细胞注入大鼠胫骨骨髓腔内,Von Frey hairs评价大鼠机械痛阈值。成模大鼠腹腔注射CQ复方高剂量(40mg·kg~(-1)),记录给药前后0min、30min、60min、90min、120min、180min、240min、360min时间点的机械痛阈值,评价CQ复方在大鼠体内药效学行为。造模后第9~11天刺激大鼠患侧足肢评价机械痛阈值,连续三天机械痛阈值≤8g视为造模成功。骨癌痛模型大鼠机械痛阈值由术前(22.85±5.36)g降至术后(6.57±2.22)g,术后9~12天维持在(6.57±2.22)g~(6.85±1.57)g,假手术组手术前后无明显变化;给药后30min模型组大鼠机械痛阈值显著上升,在30min~180min镇痛作用显著。结果表明,CQ复方对骨癌痛具有干预作用,给药后骨癌痛大鼠药效学行为与体内药代动力学具有相似性。因此,本文对CQ复方在正常和骨癌痛模型大鼠体内的药代动力学特征进行探讨,并分析CQ复方主要成分盐酸青藤碱和盐酸川芎嗪配伍的合理性及可能原因,了解血药浓度-时间变化规律,为揭示CQ复方作用机制和临床用药方案提供依据。以建立的RP-HPLC法为基础,比较CQ复方在正常大鼠及骨癌痛大鼠模型血浆中药代动力学特征的差异,为其配伍合理性提供依据。正常大鼠经适应性喂养后水合氯醛麻醉,颈静脉、股静脉插入采血管,术后穿好马甲固定,禁食12h,第二天清晨通过股静脉管按体重给药CQ复方高剂量组(40mg·kg~(-1))、CQ复方中剂量组(20mg·kg~(-1))、CQ复方低剂量组(10mg·kg~(-1)),盐酸青藤碱组(40mg·kg~(-1))和盐酸川芎嗪组(40mg·kg~(-1)),给药体积1mg·mL~(-1);骨癌痛模型大鼠按造模方法造模成功后,颈静脉插管,术后马甲固定,于第二天清晨腹腔注射给药,给药体积1mg·mL~(-1)。应用全自动采血仪在动物清醒状态下0min、5min、15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min、720min、1440min时间点内完成连续取血。给药CQ复方高剂量(40mg·kg~(-1)),与正常大鼠相比,模型组大鼠血浆中CQ复方内盐酸青藤碱和盐酸川芎嗪的血浆浓度-时间曲线下面积(AUC_((0-t)))均显著上升,分别为(1320.462±354.313~1843.749±545.568)、(3811.300±2889.793~8406.780±2995.543);达峰浓度(C_(max))显著升高,分别为(10.278±2.655~11.822±2.293)、(22.481±1.253~36.570±4.039),血浆清除率(CL_z/F)下降(0.031±0.009~0.023±0.006)、(0.014±0.006~0.005±0.002),说明CQ复方在骨癌痛病理条件下吸收程度加快,体内清除率降低,血浆药物达峰浓度升高。CQ复方在骨癌痛大鼠和正常大鼠体内药代动力学方面具有一定差异,骨癌痛病理条件可能改变其在体内的药代动力学过程。给药CQ复方不同剂量和盐酸青藤碱、盐酸川芎嗪,观察CQ复方在正常大鼠体内的代谢情况,探究CQ复方配伍依据。结果表明,盐酸青藤碱在CQ复方高中低剂量下各时间点的AUC_((0-t))分别为(1320.462±354.313)、(1460.592±815.747)、(55.036±92.344),C_(max)分别为(10.278±2.655)、(7.609±5.654)、(1.884±0.492);盐酸川芎嗪在CQ复方高中低剂量下各时间点的AUC_((0-t))分别为(3811.300±2889.793)、(3911.579±776.192)、(83.248±713.548),C_(max)分别为(22.481±1.253)、(11.395±1.544)、(5.091±1.182),说明CQ复方的血药浓度呈剂量依赖性,随给药剂量的减少和时间的延长而下降。比较盐酸青藤碱单独给药和同剂量下CQ复方给药,盐酸青藤碱组和CQ复方高剂量组内盐酸青藤碱的体内滞留时间(MRT_((0-t)))分别为(109.782±24.886)、(264.480±104.511),体内半衰期(t_(1/2z))分别为(84.103±28.204)、(212.037±49.991),表观分布容积(V_z/F)分别为(3.950±1.173)、(9.164±2.341),达峰时间(T_(max))分别为(5±0)、(9±5.477),说明盐酸川芎嗪和盐酸青藤碱配伍能延长盐酸青藤碱在体内的滞留时间,增大表观容积分布,使其能迅速分布在体内,减少暴露量,延长盐酸青藤碱的半衰期和其在体内的达峰时间;两个给药组内盐酸青藤碱的C_(max)分别为(13.071±1.091)、(10.278±2.655),AUC_((0-t))分别为(1207.511±170.577)、(1320.462±354.313),CL_z/F分别为(0.034±0.005)、(0.031±0.009),盐酸川芎嗪在延长盐酸青藤碱在体内的滞留时间,且对吸收程度和清除率不产生太大影响。比较盐酸川芎嗪单独给药和同剂量下CQ复方给药,盐酸川芎嗪组和CQ复方高剂量组内盐酸川芎嗪的AUC_((0-t))分别为(2100.059±313.204)、(3811.300±2889.793),C_(max)分别为(10.053±1.396)、(22.481±1.253),T_(max)分别为(12±10.954)、(9±5.477),MRT_((0-t))分别为(191.250±48.867)、(111.248±133.563),说明盐酸青藤碱配伍盐酸川芎嗪能增强盐酸川芎嗪在体内的吸收,增加达峰浓度、缩短达峰时间,而对其体内滞留时间无影响。V_z/F分别为(3.264±1.440)、(1.556±0.468),CL_z/F分别为(0.019±0.003)、(0.014±0.006),说明盐酸青藤碱能在不影响体内滞留时间的情况下降低盐酸川芎嗪的表观容积分布和血浆清除率,减缓其扩散的时长和被清除的速率,使其作用更长效、持久。实验结果表明,CQ复方在体内代谢过程复杂,若要反映药物的真实代谢情况,则不能只考察其在正常大鼠体内的药代动力学过程,因此本文分别研究了CQ复方在正常和骨癌痛模型大鼠体内药代动力学特征,及复方配伍的合理性,为指导临床用药提供依据。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

血浆,空白,内标,加盐

10图 1-1 HPLC 图谱 A：空白血浆 B：空白血浆加内标 C：空白血浆加内标加盐酸青藤碱D：空白血浆加内标加盐酸川芎嗪 E：QC 样品Fig. 1-1 HPLC Chromatograms A:blank plamsa B: Blank plasma plus internal standard C:The blank plasma plus internal standard and the Sinomenine HCLD: Blank plasma plus internal standard and the Ligustrazine HCL E: QC sample1.2.6 线性范围按照 1.2.2 方法，配制系列 QC 样品，使血浆中盐酸青藤碱和盐酸川芎嗪分别为 10，5，2.5，1.25，0.625，0.3125，0.15625，0.075，0.05，0.025μg·mL-1，

标准曲线,盐酸青藤碱,标准曲线,盐酸川芎嗪

进行 HPLC 分析，并根据分析结果建立标准曲线。盐酸青藤碱线性关系：以盐酸青藤碱血浆中浓度为横坐标，对照品峰面积与内标峰面积比为纵坐标，做回归方程，见图 1-2。结果显示，盐酸青藤碱在 0.05~10μg·mL-1浓度范围内,线性关系良好，y=0.2914x-0.0099（R2=0.9978），最低定量限为 0.05μg·mL-1。川芎嗪线性关系：以盐酸川芎嗪血浆中浓度为横坐标，盐酸川芎嗪峰面积与内标峰面积比为纵坐标，做回归方程，见图 1-3。结果显示，盐酸川芎嗪在0.025~10μg·mL-1浓度范围内，线性关系良好，y=0.8615x+0.169（R2=0.9985），最低定量限为 0.025μg·mL-1。

【参考文献】