黄芪甲苷Ⅳ诱导SAMR1小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的实验研究

发布时间：2020-07-02 11:35

【摘要】：骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)治疗各种神经退行性疾病在基础研究中已经得到证实。黄芪是我国传统补气中药的一种,其可以诱导BMSCs分化为神经细胞已经得到证实。黄芪甲苷Ⅳ是黄芪的主要有效成分中的一种,其是否可以促进BMSCs向神经细胞分化目前没有实验证明。SAMR1小鼠是正常衰老小鼠,作为阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠SAMP8小鼠的对照小鼠。SAMR1小鼠BMSCs培养以及诱导分化研究较少,其是否可以体外诱导分化为神经细胞没有相关的报道。本实验将探讨黄芪甲苷Ⅳ诱导SAMR1小鼠的骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的效果,以及作用机制。首先使用全骨髓贴壁培养法培养SAMR1小鼠的BMSCs,培养至3代备用。接着采用流式细胞技术检测培养细胞表面CD29,CD34,CD90的表达。我们以0,20,40,80,160mg/ml浓度黄芪甲苷Ⅳ对BMSCs进行诱导,分别在0h,1h,6h,12h,24h,48h,72h免疫荧光检测其NSE和Nestin的表达。之后采用Western blot检测诱导过程中Notch-1和β-catenin蛋白的表达。最后使用RT-qPCR检测诱导后Nestin、NSE、Notch-1、β-catenin mRNA的表达。结果显示,SAMR1小鼠BMSCs培养至第3代,细胞基本呈长梭形,细胞体积增大,基本纯化。流式细胞技术检测CD29(+),CD34(-),CD90(+),证实其为BMSCs。通过对不同浓度诱导效果统计分析得出,20,40,80mg/ml黄芪甲苷Ⅳ诱导组(T1,T2,T3)诱导后NSE和Nestin免疫荧光表达显著高于对照组(C)(P0.01),160mg/ml(T4)浓度组细胞出现死亡现象,诱导后1h细胞开始表达NSE和Nestin,48h后诱导效果明显下降,6h,12h,24h诱导效果好,没有明显差异(P0.05),40mg/ml组诱导12h神经细胞表达量最高。经40mg/ml诱导12h后RT-qPCR结果显示,诱导后Nestin、NSE mRNA显著高于对照组(P0.05)。诱导组Notch-1 mRNA表达低于对照组(P0.05),诱导组β-catenin mRNA表达显著高于对照组(P0.01)。经40mg/ml诱导12h后Western blot检测结果显示,诱导组Notch-1蛋白表达低于对照组(P0.01),诱导组β-catenin蛋白表达显著高于对照组(P0.01)。通过实验我们证明黄芪甲苷Ⅳ可有诱导SAMR1小鼠BMSCs体外分化为神经细胞,40mg/ml浓度诱导12h效果好。黄芪甲苷Ⅳ诱导分化过程中,通过提高β-catenin蛋白和mRNA的表达,抑制Notch1蛋白和mRNA的表达,促进了BMSCs分化为神经细胞。
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2738150