复方南星止痛膏体外透皮吸收及质量标准提升研究

发布时间：2020-07-13 10:48

【摘要】：复方南星止痛膏处方由生天南星、生川乌、丁香、肉桂、白芷、细辛、川芎、徐长卿、乳香、没药、樟脑、冰片等12味药材组成,具有散寒除湿、活血止痛之功效,临床主要用于治疗寒湿瘀阻所引起的骨性关节炎及类风湿性关节炎,包括关节疼痛、肌肉肿胀等,疗效确切,应用广泛。产品上市20余年来,逐渐发展成骨性关节炎及类风湿关节炎的临床一线用药,由于其较好的疗效,在临床上受到医生和患者的广泛认可,为国家基本药物目录甲类品种,具有较好的临床优势和市场前景。目前,复方南星止痛膏的研究主要集中在质量控制、药理作用、临床疗效等方面,关于其药效物质基础的研究甚少。随着现代分析技术的发展,该制剂的质量控制标准已不能满足全面可控、绿色环保、科学合理的质控技术要求。因此,有必要采用更先进的技术和更合适的评价指标对复方南星止痛膏进行质量标准提升研究,以更好地控制产品质量的均一、稳定。本论文采用超高效液相-四级杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TQF-MS/MS)和气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对制剂的化学成分谱及体外透皮吸收成分谱进行分析,在此基础上建立基于主要透皮吸收成分的质量控制方法,使指标性成分的选择更科学合理,进而提高产品的质量控制水平。本论文具体研究内容包括以下几个方面:1.复方南星止痛膏化学成分谱及透皮吸收成分谱研究采用UPLC-Q-TQF-MS/MS技术和GC-MS技术对复方南星止痛膏的化学成分进行定性分析,共鉴定出115个化合物。其中UPLC-Q-TQF-MS/MS技术鉴定出60个化合物,包括6个氨基酸类,10个酚酸类,17个生物碱类,8个黄酮类,4个川芎内酯类,7个香豆素类,2个苯丙素类及6个其他类化合物,其中12个化合物已经过对照品比对确认。采用GC-MS技术鉴定出55个化合物,包括单萜类及其含氧衍生物7个,倍半萜类及其含氧衍生物24个,芳香族类16个,有机烷、醇、酯类8个,其中7个化合物已经过对照品比对确认。该研究从非挥发性成分和挥发性成分两个方面完善了制剂的化学成分谱信息,为其质量控制及药效物质基础研究提供依据。采用体外透皮吸收模型,考察复方南星止痛膏可能的透皮吸收成分。实验首先考察并确定了透皮接收液的组成及样品前处理方式,然后采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对制剂体外透皮吸收实验的接收液进行定性分析,通过与空白基质、制剂化学成分谱的对比分析,共鉴定出22个透皮成分,包括11个挥发性成分,4个内酯类成分,4个香豆素类成分及3个双酯型乌头生物碱类成分。22个透皮成分均包含在制剂化学成分谱中,且全为化学成分谱研究中的原型成分,未曾找到发生代谢的成分。2.复方南星止痛膏质量标准提升研究.基于化学成分谱及体外透皮吸收研究结果,从定性鉴别、含量测定、常规检查等方面对制剂的质量标准进行提升研究。试验首先增加了白芷、川芎2味药材的薄层鉴别、挥发性成分的多指标含量测定和马兜铃酸Ⅰ的限量检查,优化了挥发性成分的气相鉴别、次乌头碱的含量测定以及制剂的常规检查方法,为有效控制产品质量、保证批间一致性提供技术支持。同时,为了进一步提升产品的质量控制水平,重点针对制剂中的有效成分,即三个双酯型乌头生物碱(新乌头碱、乌头碱、次乌头碱),建立了多成分同时测定的在线中心切割的超高效二维液相色谱法(2D-UPLC),并经系统的方法学验证,证明方法的可行性。该方法对中药复杂体系中微量成分的质量控制提供了有益借鉴。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R286.0
【图文】：

裂解途径,准分子离子,离子,碎片离子

，出准分子离子峰［Ｍ－Ｈ］－。ＭＳ２中黄酮苷元Ｃ环易发生ＲＤＡ（Ｒｅｔｒｏ－Ｄｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒ）裂解反应，逡逑即断裂主要发生在（＾与。位和（：３与（：４位，产生Ａ环和Ｂ环两个碎片离子，易丢失中性逡逑碎片ＣＯ、Ｃ０２、Ｃ２Ｈ２０等离子，该裂解方式可能和分子的结构和抗氧化活性相关ｔ＇而黄逡逑酮苷类化合物在ＭＳ２中多脱去糖链形成苷元离子，而且糖链均以均裂方式脱去，脱去糖基逡逑的黄酮苷元离子，同相对应的黄酮类化合物裂解规律一致｜３５ｉ。以峰４２为例，负离子模式逡逑下可见准分子离子峰［Ｍ－Ｈ］＿Ｗ／ｚ邋２８５．０４２７，首先从准分子离子峰上脱去中性分子Ｃ０生成逡逑ｗ／ｚ２５７．１３９４离子，进而再分别脱去ＣＯ与Ｈ２０生成ｗ／ｚ２２９．丨３４６与ｗ／ｚ邋２３９．０７８７的碎片逡逑离子。同时，准分子离子峰［Ｍ－Ｈ］－ｗ／ｚ邋２８５．０４２７发生ＲＤＡ反应，Ｃ环裂解掉Ｃ４Ｈ４Ｏ３生成逡逑ｗ／ｚ邋１８５．１３２４离子。经山奈酚标准品比对确认，保留时间和质谱裂解的碎片离子一致，因逡逑此峰４２确定为山奈酚，结合文献推测其可能的裂解途径如图２－２所示。峰２４和峰５７逡逑在负离子模式下有准分子离子峰ｗ／ｚ邋４６３．０９２７和ｗ／ｚ邋２９９．０５７３，结合文献｜２；＞＇３：＞３；｜及二级碎逡逑片离子，推测峰２４和峰５７分别为异槲皮苷和山奈素。峰３０、４９和５２在正离子模式下有逡逑准分子离子峰ｗ／ｚ４７９．１１８８、ｗ／ｚ３１７．０６４７和ｍ／＿？５２Ｌ１２９５，且均符合黄酮类化合物裂解规逡逑律，再结合文献［２５，４３，４４１及二级碎片离子，推测峰３０、４９和５２分别为异鼠李素－３－０－葡萄糖逡逑昔、鼠李素（或异鼠李素）和邋ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ－３－０－ｐ

欧前胡素,裂解途径

ＣＯ形成碎片离子１７５．０３３３和１４７．０４５４。经欧前胡素标准品比对确认，保留时间和逡逑质谱裂解的碎片离子一致，因此峰５５鉴定为欧前胡素，结合文献推测其可能的裂解途逡逑径如图２－３所不。峰４５和４６在正离子模式下有准分子离子峰ａｍ／ｚ３１７．１０１６、ｏｔ／ｚ２８７．０２９１，逡逑且各个峰的二级碎片离子均符合呋喃香豆素类化合物裂解规律，再结合文献报道，推测逡逑可能为新比克白芷内酯和氧化前胡素。峰４１和６０在正离子模式下有准分子离子峰ｍ／ｚ逡逑２１７．０４９３和ｗ／ｚ邋３０１．１０７０，可能的分子式为Ｃ１２Ｈ８0４和Ｃ１７Ｈ１６０５，根据建立好的数据库和逡逑二级碎片离子比对，推测峰４１可能为佛手柑内酯或异佛手柑内酯，峰６０可能为珊瑚菜素逡逑或异珊瑚菜素。逡逑0逦、逦ｍｚ邋１７５．０３３３逡逑＿＿／／逦ｗｚ邋２０３．０３４１逦＼逡逑＼逦＼－２（Ｃ０）逡逑ｍ／ｚ邋２７１．０９６５逦－Ｃ００Ｈ逦－ＣＯ逡逑翁逡逑ｍ２邋１５８．００２１逦ｍ邋ｚ邋１４７．０４５４逡逑图２－３欧前胡素可能的裂解途径逡逑Ｆｉｇ．２－３邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｐｏｓｅｄ邋ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ邋ｐａｔｈｗａｙ邋ｏｆ邋ｉｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ逡逑３．３酚酸类化合物分析逡逑该类化合物主要来源于天南星和川芎，它们的基本结构是酚羟基取代的芳香环、丙烯逡逑酸、脂类和萜类氨基酸等成分，主要分为羟基苯甲酸类和羟基肉桂酸类。该类化合物易丢逡逑失Ｈ２０和ＣＯＯＨ，且在负离子模式下响应较高。峰１０的在一级质谱中可见准分子离子峰逡逑［Ｍ－Ｈ］？为ｗ／ｚ邋１４７．０４５１，在保留时间８．３７５邋ｍｉｎ色谱峰处用Ｍａｓｓ邋Ｈｕｎｔｅｒ软件设定好相应参逡逑数

裂解途径,阿魏酸,生物碱

逡逑对，确认峰２３为阿魏酸，结合文献和特征离子碎片推测其可能的裂解途径如图２－４所逡逑示。参考峰１０和２３的裂解规律，结合二级质谱碎片离子及相关参考文献推测８、逡逑９、１７、１９和２２可能为没食子酸、２－甲基柠檬酸、绿原酸、卜咖啡酰奎宁酸和３－０－阿魏酰逡逑基奎宁酸，其中峰１７经标准品比对确认为绿原酸。逡逑ＨＯ逦＿邋Ｈ＾Ｈ少，ｏｍ0２７７。逡逑0人人＾0Ｈ邋＼逦）＿0又义＾逡逑0邋－ＣＯＯ邋入逦＂－ＣＨ３逦ｎｔｚ邋１３４．０３８０逡逑默邋＿５逦Ｈ0Ｙ＾逦｜Ｈ．逡逑ｍ＇ｚ邋１４９．０５８９逡逑图２－４阿魏酸可能的裂解途径逡逑Ｆｉｇ．２－４邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｐｏｓｅｄ邋ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ邋ｐａｔｈｗａｙ邋ｏｆ邋ｆｅｒｕｌｉｃ邋ａｃｉｄ逡逑３．４生物碱类化合物分析逡逑制剂中鉴别出的生物碱绝大部分出自于生川乌，其类型主要为二萜类生物碱，包括双逡逑酯型生物碱、单酯型生物碱和醇胺型生物碱［４ＷＩ１。二萜类生物碱母环结构相对稳定，主要逡逑区别在于Ｃ３、Ｃ８和Ｃ１４位取代基的种类不同。该类成分为川乌中的毒效成分，其中的双酯逡逑型生物碱毒性最大，但对热不稳定，容易发生水解反应，失去一个酯键，转化成单酯型生逡逑物碱

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