羟基红花黄色素A和乳香酸对脑缺血再灌注损伤神经与血瘀证血管的保护作用及机制研究

发布时间：2020-07-15 23:31

【摘要】：背景和目的在公元1665年(清康熙年间)的《外科大成》中,记载的方剂“活血定痛汤”就是以红花-乳香作为药对(各三钱),治血出作痛,红花长于活血化瘀,消散ve瘕;乳香有活血行气止痛,消肿生肌之功效,两药“相须”“相使”。前期课题组研究显示乳香的药效物质11-羰基-β-乳香酸(11-keto-β-boswellic acid,KBA)能改善脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI),β-乳香酸(β-boswellic acid,β-BA)能改善大鼠血瘀证。红花活血化瘀作用的主要药效成分羟基红花黄色素A(hydroxy safflor yellow A,HSYA),在临床上用于治疗血液循环障碍性疾病,也有改善脑缺血再灌注损伤作用,但两药联合使用的作用很少研究。因此,本课题拟从两方面研究红花-乳香的的协同作用,一方面研究HSYA联合KBA保护脑缺血再灌注损伤引起的神经损伤作用机制,另一方面研究HSYA联合β-BA对血瘀证引起的血管内皮损伤的改善作用及机制。以揭示HSYA-KBA和HSYA-β-BA的配伍机制。第一部分HSYA和KBA改善脑缺血再灌注引起的神经损伤目的:1.探讨HSYA和KBA对药配伍是否能改善脑缺血再灌注引起的神经损伤及协同作用机制。2.明确HSYA和KBA对药配伍是否有协同减少体外氧糖剥夺PC12细胞的氧化应激作用。方法:体内研究中,我们选择了线栓法来建立大鼠脑缺血再灌注模型,以进行缺血性脑梗死大鼠的相关研究。观察给予HSYA和KBA后大鼠脑梗死面积的改变。体外研究选用了氧糖剥夺(OGD)诱导PC12细胞损伤模型,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的等抗氧化指标含量变化。结果:1.HSYA(100 mg/kg)和KBA(25 mg/kg)均分别能改善脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死面积和神经行为学评分,且合用组HSYA(50 mg/kg)+KBA(12.5 mg/kg)改善效果更好(P0.05)。2.MTT检测结果显示HSYA(10μM)、KBA(50μM)、合用组HSYA(5μM)、KBA(25μM)对OGD诱导损伤的PC12细胞均有抗凋亡作用(P0.05),且合用组HSYA(5μM)和KBA(25μM)作用更强(P0.05)。3.HSYA(10μM)、KBA(50μM)和合用组HSYA(5μM)、KBA(25μM)对OGD诱导的PC12细胞有抗氧化应激损伤作用。HSYA(10μM)和KBA(50μM)能改善PC12细胞中氧化还原标志物SOD活力和MDA水平(P0.05),且合用组HSYA(5μM)和KBA(25μM)作用更强(P0.05)。结论:证实了HSYA和KBA对药配伍在改善脑缺血再灌注引起的神经损伤方面有协同增效的作用,且对OGD诱导的PC12细胞有协同抗凋亡和协同抗氧化应激损伤作用。第二部分HSYA和β-BA改善血瘀证诱导的血管损伤目的:1.研究HSYA和β-乳香酸(β-BA)配伍是否能改善血瘀证所致的大鼠血液流变学异常、保护血管内皮功能,两者改善作用是否有协同性。2.探讨HSYA和β-BA对OGD损伤的HUVEC细胞的保护作用以及对其NO生成的影响,探讨其保护作用是否呈现协同性。方法:体内研究采用血瘀证大鼠模型,给予HSYA和β-BA后,检测全血粘度和凝血功能,以及血浆中ET-1和NO浓度,观察其对大鼠血液流变学的影响以及血管内皮功能的变化,并取颈动脉观察病理变化。体外研究采用OGD损伤的HUVEC细胞,给予HSYA和β-BA后检测其对细胞活性和细胞生成NO功能的影响。结果:1.对比空白对照组,血瘀证模型组的各项血流变学指标有明显变化,全血粘度显著升高,活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)明显缩短,纤维蛋白原(FIB)含量增加,血浆ET-1水平升高,血浆NO含量降低。对比模型组,HSYA(100 mg/kg)组、β-BA(100 mg/kg)、合用组HSYA(50 mg/kg)+β-BA(50mg/kg)全血粘度明显降低,TT、APTT、PT显著延长(P0.05),纤维蛋白原含量减少(P0.05),血浆ET-1水平降低,血浆NO水平升高(P0.05)。且合用组HSYA(50mg/kg)+β-BA(50 mg/kg)变化更显著(P0.05)。2.MTT检测结果显示HSYA(10μM)、β-BA(50μM)、合用组HSYA(5μM)+β-BA(25μM)对OGD诱导损伤的HUVEC有抗凋亡作用,且合用组HSYA(5μM)和β-BA(25μM)作用更强(P0.05)。3.与OGD组相比HSYA(10μM)、β-BA(50μM)、合用组HSYA(5μM)+β-BA(25μM)能增加HUVEC细胞NO的生成(P0.05),且合用组HSYA(5μM)和β-BA(25μM)作用更强(P0.05)。结论:证实了HSYA和β-BA对药配伍在改善血瘀证引起的血流变学异常方面有“相须”作用,两药联用也能增强保护血管内皮细胞的功能,且对OGD诱导的HUVEC细胞有协同抗凋亡和协同增强NO生成作用。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

- 23 -SYA 对脑梗死面积的影响（*P<0.05 用药组与 MCAO组比较，#P<0.05BA组比较，n=6）能缺损评分评估理组大鼠在实验后进行改良神经功能缺损评分评估（m NSS大鼠未出现神经功能损伤症状，m NSS 评分为 0 分；大脑组神经功能缺损症状严重，m NSS 评分为（14.59 1.21）分同给药组大鼠神经功能缺损减轻（P < 0.05），且联合给药组。KBA 组 m NSS 评分为（12.72 0.56）分，HSYA 组 m .78）分，合用组 m NSS 评分为（11.26 0.45）分。对比两个低，有统计学意义（#P<0.05，n=6）。见图 3

sham MCAO KBA HSYA KBA+HSYA图 1 各组大鼠脑组织 TTC 染色Fig.1 Representative TTC staining of the cerebral infarct in the rat brain图 2 KBA-HSYA 对脑梗死面积的影响（*P<0.05 用药组与 MCAO组比较，#P<0.05 合用组与

SY 对大鼠改良神经功能缺损评分（m NSS）的影响（*P<0.05 用药组与 合用组与 HSY 或者 KB 组比较，n=6） 和 KBA 对 PC12 细胞活性的影响 4 所示，OGD 损伤后 PC12细胞存活率与 Control 组相比明显、 HSYA、HSYA联合 KBA 预处理组，与 OGD 组相比 PC12 细（P < 0.05），HSYA联合 KBA 组与单用组相比效应更强（P <

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本文编号：2757164