雷公藤红素对胃癌细胞增殖及有氧糖酵解的影响
发布时间：2020-07-17 12:15
【摘要】：目的本研究目的在于探索雷公藤红素对胃癌细胞BGC-823增殖及有氧糖酵解的影响,探究雷公藤红素能否调节有氧糖酵解从而抑制胃癌细胞BGC-823的增殖。方法用雷公藤红素处理胃癌细胞BGC-823细胞后,MTT实验检测细胞活性,克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率与周期分布,并于光镜下观察细胞生长及形态;分光光度计法检测细胞的葡萄糖消耗量、乳酸生成量以及己糖激酶(HK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性。蛋白电泳检测正常胃上皮细胞GES与BGC-823细胞内葡萄糖转运体1(GLUT1)、己糖激酶Ⅱ亚型(HKⅡ)、丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达差异,并用实验浓度的雷公藤红素处理BGC-823细胞后检测细胞内部上述蛋白分子的表达情况。结果1、BGC-823细胞经梯度浓度的雷公藤红素分别处理24 h、48 h、72 h后,MTT实验测得加药组细胞活力较对照组下降,雷公藤红素处理BGC-823细胞24 h、48 h、72 h后其IC50值分别为(1.66±0.05)μmol/L、(1.49±0.07)μmol/L、(1.32±0.10)μmol/L(N=3,(?)±SD)。2、BGC-823细胞经实验浓度的雷公藤红素处理10天后,平板克隆形成实验显示,各加药组细胞克隆形成率依次为(57.63±5.78)%、(32.64±3.27)%、(0.38±0.27)%,均明显低于对照组的克隆形成率(77.60±6.41)%(P0.01),且具有浓度依赖性。3、BGC-823细胞经实验浓度的雷公藤红素作用后,倒置显微镜下观察细胞,随药物浓度增加,培养皿中活细胞数量减少,脱壁悬浮细胞增多,细胞密度下降,细胞形态由椭圆形变为梭形。4、BGC-823细胞经实验浓度的雷公藤红素作用后,对照组与各实验组细胞凋亡率依次为(14.90±0.87)%、(18.12±0.50)%、(19.15±0.04)%、(24.15±1.76)%,加药后细胞凋亡增加(P0.05),且具有浓度依赖性。5、BGC-823细胞经实验浓度的雷公藤红素作用后,细胞有丝分裂受阻,滞于G2/M期。6、雷公藤红素抑制BGC-823细胞有氧糖酵解中葡萄糖的利用(P0.05)及乳酸的生成(P0.01),具有浓度依赖性。7、与胃上皮细胞相比,胃癌细胞中GLUT1、HKⅡ、LDHA的蛋白表达升高(P0.05),PKM2的表达下降(P0.05);在BGC-823细胞中,雷公藤红素可抑制有氧糖酵解过程中关键因子GLUT1、HKⅡ、LDHA的蛋白表达(P0.05),但并不影响PKM2的表达(P0.05)。8、雷公藤红素对BGC-823细胞有氧糖酵解过程中HK和LDH活性的抑制作用不显著,在浓度达到1.5μmol/L时才可抑制HK活性(P0.05),浓度达到1.5μmol/L才可抑制LDH活性(P0.05)。结论雷公藤红素可直接抑制胃癌细胞BGC-823中GLUT1及有氧糖酵途径中关键酶HKⅡ、LDHA,并在高浓度时抑制HK与LDH酶活性,从而阻碍BGC-823对葡萄糖的摄取利用与乳酸生成,抑制BGC-823细胞的有氧糖酵解,削减了细胞能量及生物大分子合成所需原料的供应,阻碍细胞周期进展并促进细胞凋亡,使胃癌细胞生长增殖受到抑制。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：
±SD)形式表示。多组间结果的差异用单因素方差分析异用独立样本 t 检验分析，P<0.05 表示差异具有统结 果红素对 BGC-823 细胞活性的影响 BGC-823 经梯度浓度（0.75 μmol/L、1.0 μmol/L、1.75 μmol/L 、2.0 μmol/L）的雷公藤红素分别处理 T 实验检测细胞活性并绘制细胞活性曲线，如图 1 所浓度及作用时间的增加 BGC-823 细胞活性逐渐下降23 细胞 24 h、48 h、72 h 后半数抑制率（Iμmol/L、（1.49 0.07）μmol/L、（1.32 0.10）μmol/L（5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L 的雷公藤红素处进一步的探究。
图 2 雷公藤红素对 BGC-823 细胞克隆形成的影响注：A 对照组；B celastrol 0.75 μmol/L; C celastrol 1.0 μmol/L; D celastrol 1.5 μmol/L表 3 雷公藤红素对 BGC-823 细胞克隆形成率的影响（N=3, X SD）组别 克隆形成数（个） 接种细胞数（个） 克隆形成率（%）Control 1171 93 1509 14 77.60 6.41Celastrol 0.75 827 91 1512 12 57.63 5.78 **Celastrol 1.0 492 52 1508 15 32.64 3.27 **Celastrol 1.5 006 04 1512 10 0.38 0.27 **注：与对照组相比：** P<0.01三、雷公藤红素对 BGC-823 细胞生长及形态的影响BGC-823 细胞经 0.75 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L 的雷公藤红素处理48h 后，倒置显微镜下观察细胞形态及细胞生长情况，结果如图 3 所示。对照组
随药物浓度增加，BGC-823 细胞脱壁的悬浮细胞逐渐增多，如图3（B）、（C）、（D）中红色箭头所示，活细胞减少，细胞密度下降，且 BGC-823细胞形态逐渐发生变化，细胞由椭圆形变为梭形，如下图中黑色箭头所示。
本文编号：2759427
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：
±SD)形式表示。多组间结果的差异用单因素方差分析异用独立样本 t 检验分析，P<0.05 表示差异具有统结 果红素对 BGC-823 细胞活性的影响 BGC-823 经梯度浓度（0.75 μmol/L、1.0 μmol/L、1.75 μmol/L 、2.0 μmol/L）的雷公藤红素分别处理 T 实验检测细胞活性并绘制细胞活性曲线，如图 1 所浓度及作用时间的增加 BGC-823 细胞活性逐渐下降23 细胞 24 h、48 h、72 h 后半数抑制率（Iμmol/L、（1.49 0.07）μmol/L、（1.32 0.10）μmol/L（5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L 的雷公藤红素处进一步的探究。
图 2 雷公藤红素对 BGC-823 细胞克隆形成的影响注：A 对照组；B celastrol 0.75 μmol/L; C celastrol 1.0 μmol/L; D celastrol 1.5 μmol/L表 3 雷公藤红素对 BGC-823 细胞克隆形成率的影响（N=3, X SD）组别 克隆形成数（个） 接种细胞数（个） 克隆形成率（%）Control 1171 93 1509 14 77.60 6.41Celastrol 0.75 827 91 1512 12 57.63 5.78 **Celastrol 1.0 492 52 1508 15 32.64 3.27 **Celastrol 1.5 006 04 1512 10 0.38 0.27 **注：与对照组相比：** P<0.01三、雷公藤红素对 BGC-823 细胞生长及形态的影响BGC-823 细胞经 0.75 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L 的雷公藤红素处理48h 后，倒置显微镜下观察细胞形态及细胞生长情况，结果如图 3 所示。对照组
随药物浓度增加，BGC-823 细胞脱壁的悬浮细胞逐渐增多，如图3（B）、（C）、（D）中红色箭头所示，活细胞减少，细胞密度下降，且 BGC-823细胞形态逐渐发生变化，细胞由椭圆形变为梭形，如下图中黑色箭头所示。
【参考文献】
相关期刊论文 前5条
1 王芳;柳江;罗健;;晚期胃癌化疗及分子靶向治疗研究进展[J];中国医师杂志;2016年01期
2 宋书中;伍春莲;;雷公藤红素诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展[J];中成药;2015年07期
3 巴一;;胃癌辅助治疗现状和进展[J];中国肿瘤临床;2013年15期
4 孙敏;王海洋;徐瑾;阿基业;施瑞华;邱洪清;于莲珍;;基于代谢组学的胃癌组织和血浆的糖代谢研究[J];胃肠病学;2011年10期
5 谢勇;闫燕艳;尉杰忠;纪宁;马存根;;雷公藤红素诱导胃癌细胞株MGC803凋亡作用研究[J];中药药理与临床;2010年05期
本文编号：2759427
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