炮制对决明子生物利用度的影响和炮制过程化学研究

发布时间：2020-07-18 13:14

【摘要】：决明子(SemenCassiae)为豆科植物决明CassiaobtusefoliaL.或小决明Cassia toraL.的干燥成熟种子。始载于《神农本草经》,列为上品,以明目之功而名,有清热明目,润肠通便的功效。性甘、苦、咸,微寒,归肝、肾、大肠经,主要用于目赤涩痛,羞目多泪,头痛眩晕,目暗不明,大便秘结等症状。现代研究表明决明子中的主要化学成分为蒽醌类和萘并吡喃酮类,有泻下、明目、降压、降血脂、保肝、抗氧化、抑菌等作用。决明子在临床上主要有生用和制用两种用法。其炮制方法一般为清炒法。生决明子长于清肝热,润肠燥。炒决明子寒泻之性缓和,有清肝养肾功效。决明子为什么要炒?明代罗周彦《医宗粹言》在诸药制法项下记载:“决明子,萝卜子,芥子,苏子,韭子,青葙子,凡药中用子者,俱要炒过研碎入煎,方得味出,若不碎,如米之在壳,虽煮之终日,米味岂能出哉。”可见,古人认为炒的目的是利于“药效成分”煎出。现代认为炒后能够增加有效成分的溶出率,提高生物利用度。但迄今为止,还未见有此方面的研究报道。本文在决明子小极性化学成分研究的基础上,对决明子炮制前后生物利用度的变化进行了研究,并对其炮制过程化学进行了探索,进一步揭示了决明子的炮制机理。本论文主要分为以下几部分:一、文献综述。通过查阅药代动力学相关书籍和中药药代动力学研究的相关文献,对中药多成分药代动力学研究进行了综述。中药药代动力学的实验对象主要为大鼠,样品主要为血浆样品,样品前处理方法主要有蛋白沉淀法、液液萃取法和固相萃取法,检测方法现主要为UPLC-MS。中药多成分药代动力学现多研究单味中药或中药复方中多成分药代动力学过程,对中药多种成分的体内药代过程有了初步的认识。此外,中药多成分药代动力学也应用于中药炮制机理的研究,多表明炮制可以提高中药的生物利用度,一定程度上揭示了中药的炮制机理。二、决明子小极性部位化学成分研究。用石油醚对决明子细粉进行回流提取,浸膏经硅胶色谱柱分离得到13个苷元成分,经波谱学方法进行了鉴定,包括10个蒽醌苷元,2个萘并吡喃酮苷元和1个二蒽酮苷元。10个蒽醌苷元为:1,6,8-trihydroxy-2,7-dimethoxy-3-methylanthraquinone(1),大黄酚(2),大黄素甲醚(3),钝叶素(5),chrysophanol8-methylether(6),obtusin(7),甲基钝叶决明素(8),橙黄决明素(9),奎司丁(12),2-acetylphyscion(13);2个萘并吡喃酮苷元为:红镰霉素(10),决明内酷(11);1个二惠酮苷元为:crisofanol-10.10-biantrona(4)。其中化合物1为新化合物,化合物13为首次从该植物中分离得到。三、炮制对决明子的生物利用度影响研究。采用UPLC-MS对决明子中的27个成分进行筛选,选取可入血检测并适用于定量分析的化合物,结果显示有7个醌苷元类成分可在血液内检测到,且含量适合定量分析;检测的所有蒽醌苷、萘并吡喃酮苷及萘苷均无法在血液中检测到原型,或含量过低难以进行定量分析。以尼泊金丁酯为内标,通过乙腈沉淀蛋白,口服给予相同生药量的生、炒决明子后,以UPLC-MS/MS检测不同取血时间的7个蒽醌苷元(橙黄决明素、大黄酸、大黄素、钝叶素、奎司丁、2-hydroxyemodin-1-methyl-ether、1,2,7-三甲氧基-6,8-二羟基-3-甲基蒽醌)的血药浓度,并用DAS3.0.5软件计算相关药代动力学参数,SPSS 21.0进行统计学分析。结果表明炮制品组的Cmax值显著增高,其中,橙黄决明素、钝叶素、奎司丁、2-hydroxyemodin-1-methyl-ether、大黄酸这5个成分在两组之间有显著性差异(p0.05)。炮制品组各成分AUC值在一定程度上增大,但均无显著性差异。7个蒽醌苷元成分的Tmax值均较小(均15min),且在炒品组数值更小,其中,橙黄决明素和2-hydroxyemodin-1-methyl-ether的Tmax值在生、炒品组间有显著性差异(p0.05)。因而认为炒制可以增大所测成分的血药浓度,加快达峰时间,提高生物利用度。四、决明子炮制过程化学研究。课题前期研究发现决明子中含有糖苷酶,在适宜的条件下,能快速将其中的苷类成分水解为相应的苷元。决明子经炮制后也有苷类成分含量降低,苷元成分含量升高的现象。推测炮制前后含量变化可能由糖苷酶在少量水分作用下引起,也可能是炮制过程中高温引起。通过HPLC对这两种假设进行验证。结果表明炮制过程中造成苷类成分含量降低,苷元成分含量升高这种现象的原因不是酶,而是炮制过程中高温作用使苷类成分的苷键断裂产生对应苷元。
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R283
【图文】：

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素（６．０９邋ｍｉｎ），奎司丁（５．３４邋ｍｉｎ），ＳＣ－１邋（４．９６邋ｍｉｎ），大黄酸（５．３４邋ｍｉｎ），大逡逑黄素（６．３７ｍｉｎ），ＳＣ－２邋（６．２２邋ｍｉｎ），尼泊金丁酯（５．４６ｍｉｎ）。结果显示空白基逡逑质中的成分不影响目标成分的检测。结果见图３－２。逡逑３．５．２标准曲线逡逑精密称取尼泊金丁酯５．２０邋ｍｇ，用甲醇溶解，定容至５邋ｍＬ容量瓶里，配置逡逑成１．０４ｍｇ／ｍＬ的母液。通过逐级稀释，得到１０４ｎｇ／ｍＬ的内标溶液，置于冰箱逡逑中４邋°Ｃ保存。分别称取７个蒽醌苷元对照品适量，用甲醇溶解，逐级稀释至适逡逑宜浓度。分别取每个浓度的溶液１００邋ＨＬ置于干净的离心管中，４０。（：下氮气吹逡逑干，备用。然后分别加入１００邋ｇＬ空白血浆，按３．４项“血浆样品前处理”方法逡逑３６逡逑

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逦ｉ邋臀？逦Ｉ：：：：：：：：：：：：：：：：：：：！逡逑图３－１在线自动采血仪采血操作过程及软件平台逡逑３．４血浆样品前处理逡逑分别向每只离心管中加入１００吣内标溶液（尼泊金丁醋：１０４邋ｎｇ／ｍＬ），涡逡逑旋２ｍｉｎ，再加入４００邋ｐＬ乙腈进行沉淀蛋白，祸旋２ｍｉｎ，离心（１２０００ｒｐｍ，５逡逑ｍｉｎ）取５００吣上清液置１．５ｍＬ离心管中，４０°Ｃ下氮气吹干，力ｎｉＯＯｐＬ甲醇复逡逑溶，离心（１２０００邋ｒｐｍ，邋５邋ｍｉｎ），取上清液进样。逡逑３．５方法学考察逡逑３．５．１专属性考察逡逑取空白血浆经沉淀蛋白处理后，进液质检测，查看空白基质中成分是否会逡逑影响目标成分的检测。各成分保留时间分别为：橙黄决明素（５．０４邋ｍｉｎ），钝叶逡逑素（６．０９邋ｍｉｎ），奎司丁（５．３４邋ｍｉｎ），ＳＣ－１邋（４．９６邋ｍｉｎ），大黄酸（５．３４邋ｍｉｎ），大逡逑黄素（６．３７ｍｉｎ）

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ＡＵＣｏ－ｏｃ）和平均滞留时间（ＭＲＴｏ－ｔ）。各参数均以均值±邋ＳＤ进行表示。逡逑用ＳＰＳＳ邋２１．０对数据进行正态性检验，结果显示各组数据均符合正态性分布，逡逑之后进行检验。结果见图３－３和表３－８。逡逑６００逦３００逡逑５０（｜邋．｜邋Ａｕｒａｎｔｉｏ－ｏｂｔｕｓｉｎ逦＋ｒａ、、逦￣２５０邋｜邋Ｏｂｔｕｓｉｆｕｌｉｎ逦＋ｒａＭ逡逑Ｉ＇邋丨逦ｐｒｏｃｔｓｓｔｄ邋｜ｆＪ逦ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ逡逑Ｍｍ邋Ｉｔ逦ｉ２００逦ｍＩｔ逡逑＝３００邋Ｊｒｒ逦Ｊ１５０逦丨冰逡逑１邋２００邋！ｒｉｌｆ邋Ｉ逦１１00逦ＩＩｔ邋Ｉ逡逑｜，0°逦逦－邋＇一一逦，邋Ｉｗ逡逑Ｃ邋？邋—邋＊邋’邋２逦■逦「／／￣￣－邋ｆ邋、邋邋逦邋Ｃ邋0邋逦■逦＊逦■逦广／／邋■——ｓ——ｉ——逡逑0邋０－５逦１逦１．５逦２逦４逦６逦８逦１０逦１２逦０逦０．５逦１逦１．５逦２逦４逦６逦８逦１０逦１２逡逑ｔｉｎｕ．⑷逦ｔｉｍｅ邋（ｈ）逡逑４０逡逑＿６０邋ｒ逦？逦ｒａｎ逦二邋３５邋ｔ逦１逦－？－ｒａｗ逡逑Ｓ邋５０邋■邋－邋ＱｌｌＣＳｔｉｎ逦ｐｒｏｃｅｓｓ

【参考文献】