5味山姜属中药不同提取部位对胃溃疡寒证大鼠药效及作用机制研究

发布时间：2020-07-19 16:23

【摘要】：目的:用冰乙酸和冰知母灌胃,同时给予寒冷因素复制大鼠胃溃疡寒证模型,分别对5味山姜属中药四个不同极性部位(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位)进行药效及作用机制研究。观测5味山姜属中药不同极性部位对胃溃疡寒证大鼠的胃组织病理变化、胃蛋白酶活力,测定胃组织cAMP、cGMP值,并计算cAMP/cGMP比值,阐释此5味山姜属中药有效部位对胃溃疡寒证大鼠的作用;同时,检测胃组织EGF、PGE_2、TGF-α值,测定血清中PAF、NO、ET、IL-8、TNF-α、NT、VEGF、bFGF值,初步探索5味山姜属中药有效部位治疗胃溃疡寒证的作用机理。并阐释“亲缘关系-中药功效-药理效应”之间的关联规律,为进一步探知5味山姜属中药共性功效的物质基础提供依据。方法:SD雄性大鼠450只,随机取10只为空白组,其余采用15%的冰乙酸加4℃知母水煎液复制胃溃疡寒证模型,模型复制成功后,设置病证模型组、2个阳性对照组、40个受试药物组,每组10只。空白组、模型组灌服0.5%羧甲基纤维素钠水溶液,其余各组分别灌服各受试药物。HE染色观察胃组织病理变化情况;测定胃蛋白酶活力;采用ELISA测定大鼠血清中PAF、NO、ET、IL-8、TNF-α、NT、VEGF、bFGF值,及胃组织中PGE_2、EGF、TGF-α、cAMP、cGMP值,计算cAMP/cGMP比值。采用SPSS 20.0进行统计学处理,以P0.05认为有统计学意义。结果:1.5味山姜属中药对胃溃疡寒证大鼠的药效学研究:(1)对胃溃疡寒证大鼠胃组织病理学改变的影响与模型组比较,5味受试药石油醚和乙酸乙酯部位组大鼠胃组织病理评分显著降低(P0.01或P0.05);3味受试药正丁醇部位(高良姜、红豆蔻、草豆蔻)、3味受试药水部位组(大高良姜、草豆蔻、益智)大鼠胃组织病理评分降低(P0.01或P0.05),其余各组大鼠胃组织病理评分降低不明显。(2)对胃蛋白酶活力的影响与模型组比较,5味受试药各石油醚部位与乙酸乙酯部位高、低剂量组、3味受试药正丁醇部位高剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻)、3味受试药水部位高剂量组(高良姜、大高良姜、益智)、高良姜水部位低剂量组均明显降低胃蛋白酶活力值(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠胃蛋白酶活力变化不明显。(3)对胃溃疡寒证大鼠胃组织cAMP、cGMP值的影响与模型组比较,5味受试药石油醚与乙酸乙酯部位高剂量组、3味受试药正丁醇部位高剂量组(红豆蔻、草豆蔻、益智)大鼠胃组织cAMP值显著升高(P0.01或P0.05);各组大鼠胃组织cGMP值差异不明显,无统计学意义(P0.05);5味受试药石油醚部位高剂量组、乙酸乙酯部位高剂量组、红豆蔻及益智正丁醇部位高剂量组cAMP/cGMP比值均明显升高(P0.05)。2.5味山姜属中药对胃溃疡寒证大鼠作用机制研究:(1)5味山姜属中药不同极性部位对胃溃疡寒证大鼠胃组织TGF-α、PGE_2、EGF值的影响在TGF-α方面,与模型组比较,5味受试药4个不同极性部位高剂量组、4味受试药石油醚部位低剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻、益智)、3味受试药乙酸乙酯部位低剂量组(高良姜、红豆蔻、草豆蔻)、3味受试药正丁醇部位低剂量组(高良姜、大高良姜、益智)、3味受试药水部位低剂量组(大高良姜、草豆蔻、益智)均能明显升高胃组织TGF-α值(P0.01或P0.05)。其余各极性部位各剂量组大鼠胃组织TGF-α值变化不明显。在PGE_2方面,与模型组比较,5味受试药2个极性部位高剂量组(石油醚与乙酸乙酯部位)、3味受试药石油醚部位低剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻)、5味受试药乙酸乙酯部位低剂量组、4味受试药正丁醇部位高剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻、草豆蔻)、红豆蔻正丁醇部位低剂量组、3味受试药水部位高剂量组(红豆蔻、草豆蔻、益智)大鼠胃组织PGE_2值均明显升高(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠胃组织PGE_2值变化不明显。在EGF方面,与模型组比较,5味受试药组4个不同极性部位高剂量组、草豆蔻石油醚部位低剂量组、大高良姜、红豆蔻乙酸乙酯部位低剂量组、大高良姜正丁醇部位、水部位低剂量组大鼠胃组织EGF值均明显升高(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠胃组织EGF值变化不明显。(2)5味山姜属中药不同极性部位对胃溃疡寒证大鼠血清ET、NO、IL-8、TNF-α、VEGF、bFGF、PAF、NT值的影响在ET方面,与模型组比较,5味受试药3个极性部位高剂量组(石油醚、乙酸乙酯、水部位)、大高良姜、红豆蔻石油醚部位低剂量组、4味受试药乙酸乙酯部位低剂量组(大高良姜、红豆蔻、草豆蔻、益智)、4味受试药正丁醇部位高剂量组与水部位低剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻、草豆蔻)、红豆蔻正丁醇部位低剂量组大鼠血清ET值均显著降低(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠血清ET值变化不明显。在NO方面,与模型组比较,5味受试药2个极性部位高剂量组(石油醚与水部位)、4味药石油醚部位低剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻、草豆蔻)、5味受试药组乙酸乙酯部位高、低剂量组、4味受试药正丁醇部位高剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻、益智)、大高良姜正丁醇部位低剂量组、红豆蔻与大高良姜水部位低剂量组大鼠血清NO值均明显升高(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠血清NO值变化不明显。在IL-8方面,与模型组比较,除红豆蔻石油醚部位低剂量组外,其余给药组石油醚部位高、低剂量组大鼠血清IL-8值明显降低(P0.01或P0.05);5味受试药组乙酸乙酯部位与正丁醇部位高、低剂量组大鼠血清IL-8值明显降低(P0.01或P0.05);5味受试药组水部位高剂量组大鼠血清IL-8值均明显降低(P0.01);其余各极性部位各剂量组大鼠血清IL-8值变化均不明显。在TNF-α方面,与模型组比较,5味受试药2个极性部位高剂量组(石油醚与乙酸乙酯部位)、高良姜乙酸乙酯部位低剂量组、3味受试药正丁醇部位高剂量组(大高良姜、草豆蔻、红豆蔻)、益智水部位高剂量组大鼠血清TNF-α值均明显降低(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠血清TNF-α值变化均无差异。在VEGF方面,与模型组比较,5味受试药2个极性部位高剂量组(石油醚与乙酸乙酯部位)、5味受试药石油醚与乙酸乙酯部位低剂量组、4味受试药正丁醇部位高剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻、草豆蔻)、4味受试药水部位高剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻、益智)大鼠血清VEGF值均显著降低(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠血清VEGF值变化均无差异。在bFGF方面,与模型组比较,5味受试药石油醚部位与正丁醇部位高剂量组、大高良姜和红豆蔻石油醚部位低剂量组、4味受试药组乙酸乙酯部位与水部位高剂量组(高良姜、大高良姜、红豆蔻、益智)、2味受试药乙酸乙酯部位与水部位低剂量组(大高良姜、红豆蔻)、2味受试药正丁醇部位低剂量组(高良姜、红豆蔻)大鼠血清bFGF值均明显降低(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠血清bFGF值变化均无差异。在PAF方面,与模型组比较,5味受试药石油醚部位与乙酸乙酯部位高低剂量组、5味受试药正丁醇部位与水部位高剂量组、3味受试药正丁醇部位低剂量组(大高良姜、红豆蔻、益智)、4味受试药水部位低剂量组大鼠血清PAF值均显著降低(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠血清PAF值变化均无差异。在NT方面,与模型组比较,5味受试药4个极性部位高剂量组、5味受试药石油醚部位低剂量组、益智与高良姜乙酸乙酯部位低剂量组大鼠血清NT值均显著降低(P0.01或P0.05);其余各极性部位各剂量组大鼠血清NT值变化均无差异。结论:1.5味山姜属中药治疗胃溃疡寒证大鼠的有效物质主要富集于石油醚部位和乙酸乙酯部位,极少数部分集中在正丁醇部位和水部位。2.胃溃疡寒证大鼠与cAMP、PGE_2、EGF、TGF-α、NT、NO值降低有关;与IL-8、ET、TNF-α、bFGF、VEGF、PAF值升高有关;推测5味山姜属中药有效部位治疗冰乙酸型胃溃疡寒证大鼠的作用机理可能是通过降低胃蛋白酶活力,升高cAMP值,提高PGE_2、EGF、TGF-α、NT、NO的合成和释放,抑制炎性因子IL-8、TNF-α产生,降低ET、b FGF、VEGF、PAF值,来发挥温胃散寒的功效,从而修复受损的胃粘膜,以达到治疗胃溃疡寒证的作用。说明存在亲缘关系越接近的中药,其药效就越近似,作用的有效部位和药理效应近相似,其药性药效与化学成分之间存在相关性。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

寒证,胃溃疡,大鼠胃,组织病理

红豆蔻正丁醇高 0.32 5.32±0.52*草豆蔻正丁醇高 0.8 4.47±0.47**益智正丁醇高 1.2 6.0±0.80高良姜水部位高 0.56 6.34±0.46大高良姜水部位高 0.128 5.32±0.43*红豆蔻水部位高 0.112 6.31±0.42草豆蔻水部位高 0.2 5.67±0.48*益智水部位高 0.35 4.0±0.42**注：与空白组比较#表示 P＜0.05，##表示 P＜0.01，与模型组比较*表示 P＜0.05，**表示 P＜0.01以下各表同。

寒证,大鼠胃,胃溃疡,胃蛋白酶活力

图 2 对胃溃疡寒证大鼠胃蛋白酶活力变化的影响表 5、图 2 结果显示：与空白组比较，模型组大鼠的胃蛋白酶活力明显增强（P＜0.01）。与模型组比较，西咪替丁组、附子理中丸组、5 味受试药组石油醚部位高、低剂量组胃蛋白酶活力值显著降低（P＜0.01）；5 味受试药组乙酸乙酯部位高、低剂量组胃蛋白酶活力值显著降低（P＜0.01）；高良姜、大高良姜、红豆蔻 3 味受试药正丁醇部位高剂量组胃蛋白酶活力值降低（P＜0.05）；高良姜水部位高低剂量组、大高良姜和益智水部位高剂量组胃蛋白酶活力值显著降低（P＜0.01 或 P＜0.05）；其余各极性部位各剂量组大鼠胃蛋白酶活力变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）。

大鼠胃,寒证,胃溃疡,部位

24图 3 对胃溃疡寒证大鼠胃组织 TGF-α 值的影响（ ±s，n=10）表 7、图 3 结果表明：与空白对照组比较，模型组大鼠胃组织 TGF-α值明显降低（P＜0.01）。与模型组比较，西咪替丁组、附子理中丸组、5味受试药石油醚部位高剂量组大鼠胃组织 TGF-α 值明显升高（P＜0.01），除草豆蔻石油醚部位低剂量组外，其余给药组石油醚部位低剂量组大鼠胃组织 TGF-α 值升高（P＜0.01 或 P＜0.05）；5 味受试药乙酸乙酯部位高剂量组大鼠胃组织 TGF-α 含量明显升高（P＜0.01），高良姜、红豆蔻、草豆蔻

【参考文献】