参芍口服液对糖尿病肾病PERK通路介导的细胞凋亡的影响

发布时间：2020-07-20 10:19

【摘要】：目的通过观察糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)大鼠的生化指标的变化和肾组织形态结构改变以及肾组织中内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)相关因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP的表达变化和肾脏细胞凋亡情况。探讨参芍口服液(Shenshao oral liquid,SS)对糖尿病肾病大鼠肾组织ERS介导的细胞凋亡的影响及对糖尿病肾病保护作用的可能机制。方法将50只健康雄性SPF级Wistar大鼠在实验动物房适应性喂养1周后,将大鼠随机分为正常对照组(Nomal control,NC组)、模型组(Diabetic nephropathy,DN组)、低剂量参芍口服液组(Low dose Shenshao oral liquid,LSS组)、中剂量参芍口服液组(Medium dose Shenshao oral liquid,MSS组)和高剂量参芍口服液组(High dose Shenshao oral liquid,HSS组),每组10只。NC组以普通饲料喂养,DN组和SS不同剂量组采用高脂饲料喂养,饲养1个月后。DN组和SS不同剂量组禁食12 h后,予以链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)25mg/kg一次性腹腔注射,制备DN模型,分别于第3、7、14天连续3次监测血糖(GLU)≥16.7 mmol/L,收集尿液测尿糖为3+至4+(强阳性),24h尿蛋白量(24h UA)30 mg/24 h,为DN大鼠模型构建成功。造模成功后进行药物干预,LSS组、MSS组、HSS组分别给予参芍口服液4ml/kg.d、8ml/kg.d、12ml/kg.d灌胃,NC组和DN组每日1次给予1ml的蒸馏水灌胃。药物灌胃干预12周后采集大鼠24 h尿液,腹主动脉取血,检测各组血糖、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)及24h尿蛋白定量(24h UA);HE染色及Masson染色光镜下观察大鼠肾组织病理形态学改变和肾组织纤维化情况;免疫组化染色检测大鼠肾组织ERS相关因子GRP78、CHOP表达情况;Western blot检测大鼠肾组织ERS相关因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP表达情况;原位末端细胞凋亡法(Td T-mediated d UTP Nick-End labeling,TUNEL)检测大鼠肾组织细胞凋亡的情况。结果1一般状况:NC组大鼠血糖水平正常,神态、进水食正常,反应灵敏好动;与Sham组相比,DN组大鼠血糖明显升高(P0.05),被毛暗淡无泽且并伴部分脱落,进食及饮水量明显增加,排尿增多,精神倦怠;SS不同剂量物组与DN组相比较大鼠进食水及精神、活动状况明显改善,血糖水平下降(P0.05)。2肾功能指标检测:与NC组相比,DN组BUN、Scr及24h UA均显著增高(P0.05);与DN组相比,SS不同剂量组BUN、Scr及24h UA均显著降低(P0.05)。3 HE观察肾组织病理情况:与NC组相比,DN组可见肾小球体积明显肥大,肾小管毛细血管腔受挤压变窄,肾小球系膜区变宽及系膜基质显著增多,肾小管基底膜变厚,部分肾小球体积缩小并硬化,部分肾小管上皮细胞肥大且胞浆出现空泡变性;SS不同剂量组与DN组相比上述病变均明显减轻。4 Masson观察肾组织纤维化情况:与NC组相比,DN组可见肾小球及肾小管间质内胶原组织大量沉积,蓝色胶原纤维粗大排列杂乱,并相互连接形成呈网状结构分布;SS不同剂量组与DN组相比肾组织纤维化均明显改善。5免疫组化检测结果:与NC相比较,DN组肾脏组织大鼠的GRP78、CHOP蛋白表达显著增多(P0.05);SS不同剂量组GRP78、CHOP蛋白表达均明显减少(P0.05),其中HSS组表达减少程度最明显。6 Western blot检测结果:与NC组相比,DN组肾脏组织GRP78、PERK、e IF2α、CHOP蛋白表达均显著升高(P0.05);SS不同剂量组与DN组相比肾组织GRP78、PERK、e IF2α、CHOP蛋白表达均明显降低(P0.05);其中HSS组表达减少程度最明显。7 TUNEL检测结果:NC组可见少量的细胞凋亡;与NC相比,DN组肾脏组织可见大量细胞凋亡;SS不同剂量组较DN组细胞凋亡均显著减少,其中HSS组细胞凋亡的情况较接近NC组。结论1糖尿病肾病大鼠肾组织内质网应激相关因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP高度表达,肾脏细胞大量凋亡,提示糖尿病肾组织存在ERS的激活,PERK-e IF2α-CHOP通路诱导的细胞凋亡的发生。2参芍口服液可减轻糖尿病肾病大鼠肾脏病理损害,延缓肾功能减退,具有肾保护作用,其机制可能与降低内质网应激相关因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP的表达,减少PERK-e IF2α-CHOP通路诱导的肾脏细胞凋亡有关。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

组图,HE染色

- 14 -注：A: NC 组; B: DN 组; C: LSS 组; D: MSS 组; E: HSS 组图 1 各组大鼠肾组织 HE 染色比较（400×）Figure 1 Comparison of HE staining in kidneys of each group（400×）

免疫组化检测,组图,细胞浆,免疫组化染色

注：A: NC 组; B: DN 组; C: LSS 组; D: MSS 组; E: HSS 组图 2 各组大鼠肾脏组织 Masson 染色（400×）Figure 2 Masson staining of kidney tissue in each group （400×）1.2.4 免疫组化检测 GRP78、CHOP 蛋的表达情况免疫组化染色显示 GRP78、CHOP 阳性细胞表达细胞浆呈棕黄色，其表达部

免疫组化染色,组图

注：A: NC 组; B: DN 组; C: LSS 组; D: MSS 组; E: HSS 组图 3 各组大鼠肾脏组织 GRP78 免疫组化染色结果（400×）Figure 3 he results of GRP78 immunohistochemical staining of kidney tissue in each group (400×)

【参考文献】