灯盏乙素介导线粒体膜通透性转换对抗β-淀粉样蛋白毒性的体外实验研究

发布时间：2020-07-30 15:07

【摘要】：目的:观察灯盏乙素(scutellarin,Scu)对β淀粉样蛋白(amyloid-beta,Aβ)_(1-42)诱导的细胞模型中线粒体膜通透性转换的几个病理因素的影响,探讨其对抗Aβ毒性损害的作用机制。方法:选用神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞分为对照组、Scu处理组、Aβ处理组和Scu+Aβ处理组,用CCK-8法检测细胞存活率筛选药物浓度;用激光共聚焦显微镜观察各组细胞的Ca~(2+)浓度和线粒体膜电位的变化;用荧光定量法测定各组细胞的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;用化学发光法测定各组细胞的三磷酸腺苷(adenosine tripahosphate,ATP)含量;用蛋白印迹法检测各组细胞中腺嘌呤核苷酸转位酶2(adenine nucleotide translocase 2,ANT2)的表达;用流式细胞仪测定各组细胞的总凋亡率。结果:与对照组相比,Scu处理组各指标均无显著性差异。(1)选取1.0μmol/L的Aβ_(1-42)和10μmol/L的Scu为后续实验药物浓度。(2)与对照组(1.05±0.24)和Scu处理组细胞的Ca~(2+)平均光密度值(1.16±0.24)相比,Aβ处理组细胞的Ca~(2+)平均光密度值(2.33±0.10)升高(P0.05);Scu干预后,经Aβ处理的细胞Ca~(2+)平均光密度值(1.77±0.06)有所降低(P0.05)。(3)与对照组(8.87±0.33)和Scu处理组细胞中的ROS含量(9.27±1.46)相比,Aβ处理组细胞的ROS含量(17.04±0.27)明显升高(P0.05);Scu干预后,经Aβ处理的细胞中的ROS含量(9.34±1.61)降低(P0.05)。(4)与对照组(0.85±0.07)和Scu处理组细胞中的ANT2蛋白相对表达量(0.93±0.05)相比,Aβ处理组细胞中ANT2蛋白相对表达量(0.19±0.04)明显降低(P0.05);Scu干预后,经Aβ处理的细胞内ANT2表达量(0.69±0.14)有所升高(P0.05)。(5)与对照组(10.23±1.67)nmol/mg和Scu处理组细胞的ATP含量(10.85±1.82)nmol/mg相比,Aβ处理组细胞中的ATP含量(7.74±1.20)nmol/mg减少(P0.05);Scu干预后,经Aβ处理的细胞ATP含量(9.42±1.84)nmol/mg有所增加(P0.05)。(6)与对照组(13.79±2.19)和Scu处理组细胞中线粒体内JC-1绿红荧光比值(14.44±1.45)相比,Aβ处理组细胞的荧光比值(51.23±0.58)增加(P0.05);Scu干预后,经Aβ处理的细胞中线粒体内JC-1荧光比值(37.72±0.75)降低(P0.05)。(7)与对照组(0.95±0.05)%相比和Scu处理组细胞的总凋亡率(1.44±0.08)%相比,Aβ处理组细胞的总凋亡率(26.20±2.32)%增加(P0.05);Scu干预后,经Aβ处理的细胞总凋亡率(11.60±0.63)%降低(P0.05)。结论:Scu能够改善ATP代谢和钙超载,调节细胞内ROS水平和线粒体膜电位异常,上调ANT2的蛋白表达,可能通过介导线粒体膜通透性转换孔的开放来抑制凋亡的发生,减轻Aβ毒性所致的细胞损伤。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285
【图文】：

图1）表 3 不同浓度 Aβ1-42对 SH-SY5Y 细胞存活率的影响Tab.3 The effect of different concentrations of Aβ1-42on the survival rate of SH-SY5Y cellsAβ1-42浓度（μmol/L） 细胞存活率（%）0 100.000.1 99.25±3.060.2 100.45±8.350.5 75.76±4.11*1.0 59.83±3.21△1.5 44.00±3.16△2.0 29.71±3.20△注：*与空白组相比，P<0.05；△与空白组相比，P<0.01。注：*与空白组相比，P<0.05；△与空白组相比，P<0.01。图 1 不同浓度 Aβ1-42对 SH-SY5Y 细胞存活率的影响Fig. 1 The effect of different concentrations of Aβ1-42on the survival rate of SH-SY5Y cells

细胞存活率分别为（99.62±3.04）%、（108.65±1.95±2.72）%、（82.18±3.08）%和（65.28±3.51）%。选用 10μmol/L实验的加药浓度。（表 4，图 2）表 4 不同浓度 Scu 对 SH-SY5Y 细胞存活率的影响Tab.4 The effect of different concentrations of Scuon the survival rate of SH-SY5Y cellsScu 浓度（μmol/L） 细胞存活率（%）0 1005 99.62±3.0410 108.65±1.9520 94.91±2.7250 82.18±3.08*100 65.28±3.51△白组相比，P<0.05；△与空白组相比，P<0.01。

贵州医科大学 2019 届科学学位硕士研究生学位论文2.3 激光共聚焦检测各组细胞内 Ca2+浓度各组细胞内 Ca2+浓度变化：与对照组 Ca2+平均光密度（1.05±0.24）相比，Scu 处理组细胞的平均光密度值（1.16±0.24）未见明显变化（P>0.05）；与对照组和 Scu 处理组相比，Aβ 处理组细胞 Ca2+平均光密度值（2.33±0.10）升高（P<0.05）；Scu 干预后，经 Aβ 处理的 Ca2+平均光密度值（1.77±0.06）有所降低（P<0.05）。（图 3，4）

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本文编号：2775715