复方血栓通胶囊三七皂苷类成分的快速鉴定及整合药代动力学研究

发布时间：2020-07-31 11:55

【摘要】：目的:复方血栓通胶囊是中山眼科中心与广东众生药业股份有限公司联合研制的纯中药复方制剂,用于治疗糖尿病眼病和糖尿病肾病。目前复方血栓通胶囊的物质基础研究较薄弱,本课题主要快速鉴定复方血栓通胶囊体内外三七皂苷类成分,研究复方血栓通胶囊在比格犬体内的代谢和组织分布情况;并探索其整合药代动力学。为复方血栓通胶囊的物质基础及临床应用提供一定的依据。方法:1.根据三七皂苷的结构特点,拟定HPLC-LTQ-Orbitrap联合多重数据快速挖掘技术(MDF和CIF)快速筛选鉴定三七皂苷类成分策略;2.复方血栓通胶囊连续灌胃给药比格犬三天后,收集不同时间点的血浆,12h内的尿液和粪便以及2h的眼球和肾脏,采用拟定的多重数据挖掘策略,快速鉴定复方血栓通胶囊体内外三七皂苷类成分,研究复方血栓通胶囊在比格犬体内的代谢和组织分布情况。3.建立HPLC-QqQ同时测定血浆中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd五种有效成分的定量分析方法;比格犬灌胃高(30粒/10kg)、中(15粒/kg)、低(8粒/kg)三个剂量的复方血栓通胶囊,分别在不同时间点于前肢静脉取血,测定血浆中各待测成分的浓度,绘制药时曲线和采用DAS软件计算药代动力学参数;根据各待测成分结构特点和药代动力学参数差异,对其进行三醇型和二醇型分类,利用各成分曲线下面积(AUC0-∞)百分率作为自定义权重系数,分类整合复方血栓通胶囊中三醇型和二醇型皂苷在比格犬体内综合血药浓度,绘制各类整合药时曲线,DAS软件计算各类整合药代动力学参数。结果:1.建立了基于HPLC-LTQ-Orbitrap联合多重数据挖掘技术(MDF和CIF)快速筛选鉴定三七皂苷类成分策略。2.利用多重数据技术快速挖掘策略,鉴定出复方血栓通胶囊提取液中48个三七皂苷成分,复方血栓通胶囊灌胃给予比格犬后,在给药后血浆、粪便和尿液中分别鉴定出18、48和15个三七皂苷类成分;复方血栓通胶囊灌胃给予比格犬2h后,在比格犬眼球和肾脏中分别鉴定出13、18个三七皂苷类成分。3.三醇型皂苷三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的药代动力学参数相似,Tmax在1-2.5h之间,t1/2在 3.5-12h 之间,MRT0-∞在 6-16h 之间,CLz/F在 1.5-10L/h/kg 之间,AUC0-∞在200-2800ng/mL*h之间,Cmax在30-400 ng/mL之间;二醇型皂苷人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd药动学参数相似,Tmax在5-12h之间,t1/2在40-65h之间,MRT0-∞在65-90h之间,CLz/F 在 0.05-1 L/h/kg 之间,AUC0-∞在 2000-400000ng/mL*h 之间,Cmax 在 30-4500 ng/mL之间。结果显示,三醇型皂苷和二醇型皂苷的药动学特征具有显著性差异,在吸收、体内滞留、消除等方面,三醇型皂苷较二醇型皂苷吸收快、滞留时间短、消除快。通过三醇型和二醇型皂苷的自定义权重系数整合,在不同给药剂量下,三醇型皂苷整合药代动力学参数Tmax在1-1.5之间,t1/2在3-11之间,MRT0-∞在6-14之间,CLz/F在5-8 L/h/kg 之间,AUC0-∞在 600-2000 ng/mL*h 之间,Cmax 在 80-320 ng/mL 之间;二醇型皂苷整合药代动力学参数Tmax在5-8h之间,t1/2在50-60h之间,MRT0-∞在73-90h之间,CLz/F 在 0.05-0.15L/h/kg 之间,AUC0-∞在 39000-400000 ng/mL*h 之间,Cmax 在520-4100 ng/mL之间。分类整合后的药代动力学参数兼顾了同类别中不同单体皂苷的药代动力学参数。结论:1.课题建立了基于HPLC-LTQ-Orbitrap联合多重数据挖掘技术快速筛选鉴定三七皂苷类成分的策略,可快速鉴定复方血栓通胶囊在比格犬体内外三七皂苷类成分,为化合物的快速筛选鉴定提供了一种新的思路。2.探索了复方血栓通胶囊在比格犬体内三七皂苷的代谢情况。给药血浆和尿液中的三七皂苷类成分较粪便中少,表明三七皂苷类成分生物利用度低,大部分未被吸收入血直接经粪便排出体外。给药血浆和尿液中鉴定出的三七皂苷类成分种类相似,主要为糖基取代个数较少的皂苷,以糖基取代个数为3-4个皂苷居多,这可能由于糖基取代个数少,分子量相对小,易透膜吸收入血。探索了复方血栓通胶囊在比格犬眼球和肾脏组织中的分布情况。进入眼球中的三七皂苷类成分相对肾脏中种类较少,可能由于血眼屏障的原因,进入眼球组织中的三七皂苷糖基取代个数少,糖基取代个数主要为1-3个,进入肾脏中的三七皂苷类成分糖基个数主要为3-5个。研究结果为复方血栓通胶囊在治疗糖尿病视网膜变病以及肾脏疾病药效物质基础的研究提供了一定的依据。3.复方血栓通胶囊三七皂苷的分类整合药动学特征充分兼顾了同类别中不同单体皂苷的药动学特征,能反映同类别化合物整体在体内的存留特性和体内药代动力学过程,为中药多组分、整体观的药代动力学研究提供了一种解决方案,为复方血栓通胶囊临床用药方案的设计提供了依据。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R286.0;R285.5

【参考文献】