山银花活性成分检测方法及其质量评价研究

发布时间：2020-07-31 17:50

【摘要】：山银花为忍冬属灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬、黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花,具有清热解毒、疏散风热的功效。收录在药典及药食同源产品目录中,应用广泛且年消耗量巨大。本文以山银花及其相关产品为研究对象,分析了其中的多酚酸、黄酮、皂苷三类物质;然后根据其生长习性、采收季节建立了检测其中潜在风险物质黄曲霉毒素的分析方法,并对其裂解规律以及特征碎片离子进行分析,为此类物质的无目标筛查奠定基础;最后,采用电感耦合等离子体质谱法对山银花药材中重金属及微量元素进行分析,对山银花的质量与安全方面进行初步探索与研究。主要研究内容如下:(1)建立了超声辅助提取及超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法同时定性定量检测山银花药材中三类活性成分的方法。十四种目标物的提取参数利用Box-Behnken design法优化,提取参数如下:62%甲醇为提取溶剂,液固比为106mL/g,超声功率为450 W。采用Extend C18(100 mm×2.1 mm,i.d.1.7μm)色谱柱及梯度洗脱。另外,研究了多酚酸及黄酮的裂解规律并对特征碎片离子进行讨论,首次提出了多酚酸同分异构体之间裂解差异及其机理。方法验证结果显示,各目标物在各线性范围内线性关系良好(r20.9924),日内精密度及日间精密度相对标准偏差均在10%以内,回收率为84.94%~116.42%。该方法操作简单、灵敏度高,可用于山银花样品的检测。(2)建立了山银花药材中4种真菌毒素的超高效液相色谱-串联质谱定性定量方法,并对4种黄曲霉毒素的裂解规律进行了分析讨论。样品加60%乙腈提取溶剂后超声,加0.2 g N-丙基乙二胺净化以除去山银花中高含量的多酚酸,提取液吹至近干后复溶。色谱条件为:Agilent SB C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,i.d.1.7μm);定量方法采用内标法,以黄曲霉毒素G2的13C同位素内标物为内标。对4个化合物的裂解规律进行分析和总结,并分析了共同裂解途径以及特征碎片离子。4种真菌毒素线性关系良好,r2不低于0.9964,空白样品的加标回收率为78.29%~92.51%。定量限能够符合检测要求。该方法操作简单、灵敏度高、重现性好,可用于山银花药材中黄曲霉毒素的检测。(3)利用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)检测山银花中Li、Cr、V、Mn、Co、Ni等12种无机元素。样品加硝酸和过氧化氢,经微波消解后定容,以Ge、In、Sc等六种元素为内标,过滤后上机检测。12种元素在各自线性范围内线性关系良好(R0.999),灵敏度高,可用于分析山银花中的元素组成及含量。
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1
【图文】：

皂苷类,物质化,酸类,黄酮类

河北大学理学硕士学位论文标准溶液的配制新绿原酸（A1）、绿原酸（A2）、隐绿原酸（A3）、异绿原酸 A（原酸 B（A5）、异绿原酸 C（A6）购于德国 Dr Ehrenstorfer 有限公司A7）、阿魏酸（A8）、木犀草素(F1)、槲皮素(F2)、苜蓿素(F3)、芦丁毛忍冬皂苷乙(S1)、川续断皂苷乙(S2)购于 Toronto Research Chemica纯度均高于 98%，各化合物结构见图 2-1。标准品储备液配制方法如下：精密称取标准品10 mg，加入10 mL甲醇溶成质量浓度为 1000 mg/L 标准溶液，于-40 ℃避光保存，保质期两个准溶液质量浓度为 10 mg/L，置于棕色试剂瓶中，于-40 ℃避光保存，一个月。

示意图,绿原酸,质谱裂解,奎宁酸

目标物质谱图通过碰撞诱导解离于产物离子模式采集得到。三个物质的质谱图如图2-2（A、B、C）所示，裂解途径示意图以 A3 为代表（2-2-D）。新绿原酸（5-咖啡酰奎宁酸，A1）、绿原酸（3-咖啡酰奎宁酸，A2）及隐绿原酸（4-咖啡酰奎宁酸，A3）三个化合物为一组同分异构体，分别是奎宁酸 3、5、4 位羟基的咖啡酸酯化产物，是位置异构体。如图 2-2 所示，三个物质有不同的基峰（base peak）和离子比

液相色谱,质谱裂解,质谱图,途径

F1、F2、F3、F4的质谱图（A-D）与F1-F3质谱裂解途径（E-G）

【参考文献】