灯盏益肾颗粒对糖尿病肾病大鼠TGF-Smad转导通路的影响

发布时间：2020-08-02 12:10

【摘要】：研究目的:观察灯盏益肾颗粒(原“云南灯盏花胶囊”)对糖尿病肾病大鼠TGF-Smad转导通路的影响,从分子和蛋白水平探讨灯盏益肾颗粒对糖尿病肾病可能的作用靶点和机制,为临床用药治疗糖尿病肾病提供实验依据。研究方法:1、动物分组:清洁健康的成年雄性SD大鼠90只,体重(230±20)g,8周龄。将90只大鼠随机分正常组15只(A组)和链脲佐菌素模型组75只。将造模成功后的大鼠随机分成模型组(B组)、盐酸贝那普利组(C组)、灯盏益肾低剂量组(D组)、灯盏益肾中剂量组(E组)和灯盏益肾高剂量组(F组)各15只。2、模型制备:B组、C组、D组、E组和F组使用1%柠檬酸盐缓冲液溶解链脲佐菌素(STZ,Streptozotocin),按55mg/kg一次性在大鼠左侧腹腔注射,A组用等量生理盐水腹腔注射。造模处理72小时后连续3天尾静脉测血糖值≥16.7mmol/L为糖尿病模型制备成功。糖尿病模型大鼠喂养1周后随机血糖≥16.7mmol/L、尿量大于对照组50%、尿糖呈强阳性、24h尿白蛋白大于对照组50%为糖尿病肾病模型制备成功。3、分组给药:A组、B组均予生理盐水10ml/(kg.d),灌胃;C组予盐酸贝那普利1.05mg/(kg.d),灌胃;D组、E组、F组:分别予灯盏益肾颗粒1.89g/(kg.d)、9.45g/(kg.d)、18.9g/(kg.d),灌胃,连续灌胃6周。4、指标观察:各组大鼠每周称重一次;于灌胃第6周末处死大鼠的前一天取各组大鼠尿液待检;第2天,称体重,腹主动脉取血,离心待检。用全自动多功能生化仪检测胱抑素C(Cystatin C Cys C)、血肌酐(Serum Creatinine Scr)、血尿素氮(Blood uria nitrogen BUN)、尿蛋白/尿肌酐(Urine protein/Urine creatinine Up/Ucr)等生化指标;取肾脏,称重,运用免疫组化法测定大鼠肾组织TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的表达情况。采用美国MediaCybernetics公司生产的Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行图像分析。任选5个视野,检测肾组织TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型胶原、FN阳性着色的阳性率,分别取其平均值进行统计学分析。5、结果:5.1、生化指标检测:(1)空腹血糖、肾系数(肾重/体重)、尿蛋白/尿肌酐(Up/Ucr)、胱抑素C、尿素氮,A组和B组相比,差异有统计学意义(P0.01)。(2)肾系数、Up/Ucr、Cys C:与B组相比,C组、D组Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05),E组、F组明显降低(P0.01);与C组相比,E组、F组Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05);与D组相比,E组、F组Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05)。(3)BUN:与B组相比,C组、D组、F组BUN含量降低(P0.05),E组明显降低(P0.01);与C组相比,E组BUN含量降低(P0.05);E组BUN含量比D组降低(P0.05)。与E组相比,F组BUN含量增多(P0.05)。(4)Scr:各组之间两两比较差异无统计学意义(P0.05)。5.2、免疫组化TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型胶原、FN检测:(1)A组和B组相比,差异有统计学意义(P0.01)。与B组相比,C组、D组肾组织TGF-β1、Smad2、Ⅳ型胶原、FN蛋白表达降低(P0.05);E组、F组明显降低(P0.01);与C组相比,E组、F组肾组织TGF-β1、Smad2、Ⅳ型胶原、FN蛋白表达降低(P0.05)。(2)Smad7:A组和B组相比,差异有统计学意义(P0.01)。与B组相比,C组、D组肾组织Smad7蛋白表达增多(P0.05),E组、F组明显增多(P0.01);与C组相比,E组、F组肾组织Smad7蛋白表达增多(P0.05)。结论:灯盏益肾颗粒和盐酸贝那普利都可改善DN大鼠的基本状况;两者均可减轻尿微量白蛋白排泄和肾损伤。灯盏益肾颗粒3个剂量组中,中剂量组和高剂量组效果较优,灯盏益肾颗粒中高剂量组优于盐酸贝那普利组;免疫组化结果分析显示,灯盏益肾颗粒和盐酸贝那普利均可抑制TGF-Smad信号通路激活,减轻肾组织纤维化表达。灯盏益肾颗粒中、高剂量组效应优于低剂量组和盐酸贝那普利组;上述治疗作用呈现一定的量效关系趋势。
【学位授予单位】：云南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】