N~6-取代腺苷衍生物YZG-331的镇静催眠作用与机制

发布时间：2020-08-03 12:24

【摘要】：NHBA是我所植化室石建功教授从天麻中分离得到的腺苷类似物,我们实验室已经发现其具有很强的镇静催眠作用,以此为先导化合物,经结构修饰得到了差向异构体YZG-330(R型)和YZG-331(S型)。本实验旨在研究YZG-331的镇静催眠作用及其机制。Figure 1 Chemical structure ofYZG-330 and YZG-331.在开场实验中,YZG-331可以剂量依赖性的抑制动物的自主活动。与溶剂对照组相比,YZG-331(10和50mg·kg-1,i.g.)对动物自主活动的抑制率分别为81.0%(P0.001)和89.2%(P0.001)。在阂上剂量戊巴比妥钠睡眠延长实验中,YZG-331(5,10和20mg·kg-1,i.g.)对小鼠的睡眠时间延长率分别为35.3%(P0.01),71.2%(P0.001)和 101.7%(P0.01)。YZG-331(1,5 和 25 mg kg-1,i.g.)协同阂下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠入睡率分别为0%,75%(P0.01)和100%(P0.01)。已知GABAA受体门控Cl-通道的开启与睡眠直接相关,该受体有五个已知的结合位点,其中氟马西尼是BZ位点的拮抗剂,荷包牡丹碱是GABA位点的拮抗剂。而氟马西尼和荷包牡丹碱均不能拮抗YZG-331的镇静作用,推测YZG-331的作用靶点不在GABAA受体的这两个位点上。GABA是脑内主要的抑制性神经递质,Glu是脑内重要的兴奋性神经递质,Glu是GABA的前体物质,可以在酶的催化作用下生成GABA,二者与睡眠-觉醒关系密切。因此,我们首先运用HPLC-ECD法,OPA柱前衍生化后测定了YZG-331对ICR小鼠的下丘脑和皮层中GABA和Glu含量的影响。结果表明,与溶剂对照组相比,YZG-331(40mg·kg-1,i.g.)使小鼠下丘脑和皮层中GABA含量有显著的升高,升高率分别为10.3%和11.6%。我们采用微透析法取样HPLC-ECD法测定小鼠TMN区细胞间隙的GABA水平,结果表明,给小鼠灌胃YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)20 min时,小鼠TMN区细胞外液的GABA水平显著升高至给药前的2.3倍。GAD催化GABA的合成,GABA-T催化GABA的水解,小鼠脑内GABA含量主要这两个酶的调控。检测结果表明,YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)给药组小鼠大脑皮层GAD酶的活性提高了 106.8%(P0.05),合并给予SCZ和YZG-331组与单独给予YZG-331组相比GAD酶活性降低了 25%;单独给予YZG-331组下丘脑GAD酶活性提高了 58.6%,合并给予SCZ和YZG-331与单独给予YZG-331相比,GAD酶活性降低58.8%(P0.05)。YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)对GABA-T酶的活性无显著影响。对阂上剂量戊巴比妥钠(38 mg·kg-1,i.g.)诱导的小鼠,在提前5 h腹腔注射GAD酶抑制剂盐酸氨基脲(semicarbazldehydrochloride,SCZ)100mg·kg-1 后,溶剂对照组小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间均无显著变化,YZG-331(5,10和20mg·kg-1,i.g.)组小鼠的睡眠延长作用被显著抑制。脑电图记录分析结果表明,单独给予SCZ(100mg·kg-1,i.p.)对ICR小鼠的睡眠成分无显著影响;与对照组相比,灌胃给予小鼠YZG-331(40mg·kg-1)后,NREM睡眠比例显著增加54.0%(P0.01),REM睡眠比例显著下降45.2%(P0.05),清醒时间显著降低27.5%(P0.001);合并给予SCZ(100 mg·kg-1,i.p.)和 YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)后,SCZ 可以拮抗 YZG-331 对睡眠成分的改变。DA、5-HT等单胺类神经递质对睡眠觉醒的平衡起调节作用。我们采用HPLC-ECD法检测了 YZG-331对小鼠下丘脑和皮层组织中DA、5-HT等单胺类神经递质水平的影响。结果表明,与溶剂对照组相比,化合物YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)能将下丘脑中的DA和DOPAC水平分别提高40.4%(P0.01)和103%(P0.01),但对皮层中的DA和DOPAC水平并无显著影响,对小鼠下丘脑和皮层中5-HT和5-HIAA在均无显著影响。小鼠脑内DA及5-HT的代谢主要由MAO调控。与对照组相比,YZG-331(40mg·kg-1,i.g.)组小鼠皮层中MAO有显著的升高,下丘脑和纹状体中MAO活性无显著变化。提示YZG-331可能不仅是通过调节MAO活性来调节单胺类神经递质的水平。综上所述,新型镇静催眠化合物YZG-331的镇静催眠机制可能为:增加GAD酶活性,使GABA合成增加,TMN区突触间隙有更多的GABA与GABAA受体结合,实验室前期实验表明,YZG-331可以使细胞内氯离子浓度增加,神经细胞超级化,产生抑制效应,出现镇静催眠作用。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】