南葶苈子中有效部位与活性成分的筛选及抗肿瘤作用研究

发布时间：2020-08-04 14:36

【摘要】：目的:从南葶苈子中筛选出具有抗肿瘤活性的有效部位(乙酸乙酯浸膏),并初步探讨其有效部位对人非小细胞肺癌H1975细胞增殖、凋亡的影响,进一步采用活性追踪分离法对南葶苈子的有效部位进行研究,寻找新的活性化合物。方法:1.运用放大镜、光学显微镜等手段对葶苈子进行性状和显微鉴别,采用膨胀度测定法测量葶苈子的膨胀度。2.采用溶剂提取法和系统溶剂萃取法对南葶苈子进行粗分,获得不同极性的浸膏样品。3.MTT法检测南葶苈子甲醇浸膏各萃取部位的细胞毒性,筛选出有效部位。4.集落克隆法检测南葶苈子乙酸乙酯浸膏对人非小细胞肺癌H1975细胞增殖抑制的作用。5.建立人非小细胞肺癌H1975细胞裸鼠移植瘤模型,检测南葶苈子乙酸乙酯浸膏的体内抗肿瘤活性及其毒性。6.Annexin V-FITC/PI法检测南葶苈子乙酸乙酯浸膏对人非小细胞肺癌H1975细胞凋亡的影响。7.免疫印迹法检测南葶苈子乙酸乙酯浸膏对蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bax蛋白表达的影响。8.运用制备薄层色谱法、硅胶柱层析法、半制备高效液相色谱法和高效液相色谱法等技术对南葶苈子的乙酸乙酯浸膏进行提取分离,获得活性化合物。9.MTT法检测活性化合物对4种人肿瘤细胞(H1975细胞、CNE-2Z细胞、MDA-MB-231细胞、SGC-7901细胞)的增殖抑制作用,并计算IC_(50)值。结果:1.显微鉴别和膨胀度测定结果显示,本研究所用的葶苈子为南葶苈子。2.通过对南葶苈子进行甲醇浸提并对其进行分级萃取,得到南葶苈子甲醇浸膏373.66 g,正己烷层浸膏108.28 g,二氯甲烷层浸膏15.32 g,乙酸乙酯层浸膏6.23 g,水层浸膏197.42 g。3.MTT和集落克隆法结果显示,南葶苈子乙酸乙酯浸膏呈剂量依赖和时间依赖的方式抑制人非小细胞肺癌H1975细胞的增殖。4.人非小细胞肺癌H1975细胞裸鼠移植瘤模型结果表明,南葶苈子乙酸乙酯浸膏在裸鼠体内表现出较好的抗肿瘤活性及较低毒性。5.Annexin V-FITC/PI结果表明,南葶苈子乙酸乙酯浸膏能诱导人非小细胞肺癌H1975细胞的凋亡。6.Western blot结果显示,南葶苈子乙酸乙酯浸膏能够下调Akt和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。7.通过对南葶苈子乙酸乙酯浸膏的分离,得到了活性化合物芥子酸、GJH2-51-1和GJH2-52-1。8.芥子酸对H1975、CNE-2Z、MDA-MB-231、SGC-7901细胞的IC_(50)值分别为7.94、6.34、19.28、33.72μg/mL;GJH2-51-1对H1975、CNE-2Z、MDA-MB-231、SGC-7901细胞的IC_(50)值分别为6.23、7.26、22.06、12.09μg/mL;GJH2-52-1对H1975、CNE-2Z、MDA-MB-231、SGC-7901细胞的IC_(50)值分别为14.20、16.25、59.42、33.72μg/mL。结论:1.南葶苈子乙酸乙酯浸膏具有抑制人非小细胞肺癌H1975细胞增殖、诱导凋亡的能力,并且具有较好的体内抗人非小细胞肺癌H1975细胞活性和低毒性,为中药南葶苈子的研发奠定了基础。2.芥子酸、GJH2-51-1和GJH2-52-1对H1975和CNE-2Z细胞具有较强的细胞毒性作用,对MDA-MB-231和SGC-7901细胞具有细胞毒性作用。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285
【图文】：

性状特征,显微特征,粉末,样品

图 1. 葶苈子微性状特征图 (A): 10×10 倍放大情况下拍摄 (B): 10×20 倍放大情况下拍Fig. 1 The appearance and micromorphological features of the Descurainia sophia L.(A): Shooting at 10×10 magnification (B): Shooting at 10×20 magnification1.3.2 葶苈子样品粉末制片的显微特征

种皮,表皮细胞,细胞,理化性质

2. 葶苈子粉末显微特征图 (A)：种皮表皮细胞(10×40 倍) (B)：种皮内表皮细胞（10×20 Fig. 2 Powder microstructure of the Descurainia sophia L. (A): Epidermal cells of seed coat(10×40 times) (B): Endothelial cells of seed coat (10×20 times).3.3 葶苈子样品的理化性质

南葶苈子,浸膏,乙酸乙酯

图 3. 南葶苈子乙酸乙酯浸膏的制备eparation of the methanol-ethyl acetate partitioned fraction from Descurainia用南葶苈子甲醇浸膏各萃取部位（20、100 μg/mL）处理人非5 细胞，作用 48 h，观察各组肿瘤细胞的存活率。MTT 结果显示

【参考文献】