仙茅多糖的分离纯化、结构鉴定及抗骨质疏松活性研究

发布时间：2020-08-17 19:55

【摘要】：本论文以仙茅(Curculigo Orchioides Gaertn)为研究对象,对其多糖进行提取、分离纯化、一级结构鉴定、高级结构研究及体内抗骨质疏松活性的研究。首先采用热水和碱水将仙茅中的水溶性多糖和碱溶性多糖分别进行提取,水提多糖采用分级醇沉法,所得多糖和碱提醇沉多糖分别进行Sevag法脱蛋白、透析和冻干处理得到四个不同部位的仙茅粗多糖CO50、CO70、CO90和COB。将溶解性较好、糖含量较高且体内抗骨质疏松活性最好的两个部位CO70和CO90分别进行DEAE-Cellulose 52阴离子交换柱层析分离,将分离所得主峰样品用Sephadex G-75凝胶柱进一步纯化,得到三个多糖COP70-1、COP70-3和COP90-1。经高效凝胶渗透色谱法验证COP70-1、COP70-3和COP90-1为均一多糖,分子量分别为100647 Da、53399 Da和4609 Da。紫外可见光谱扫描表明COP70-1、COP70-3和COP90-1中均不含有核酸和蛋白质。采用完全酸水解-柱前PMP衍生化-HPLC分析和离子色谱分析其单糖组成,通过标准品对比确定其单糖D/L绝对构型、结合完全甲基化-GC-MS分析和核磁共振分析得到三种均一多糖的一级结构特征,结果表明COP70-3是由7种单糖组成的复杂多糖,包括(1→5)连接α-L-Araf、(1,3→5)连接α-L-Araf、(1,2→5)连接α-L-Araf、末端α-L-Araf、(1→3)连接β-L-Rhap、(1→4)连接β-D-Manp、(1,3→6)连接β-D-Manp、(1→6)连接β-D-Galp、(1,3→6)连接β-D-Galp、(1→3)连接β-D-GalpA、(1→6)连接α-D-Glcp、(1→3)连接α-D-GalpA、末端α-D-GlcpA 13种连接残基。COP70-1和COP90-1都是由葡萄糖和甘露糖两种单糖组成,其中COP70-1由(1→4)连接3-O-acetyl-β-DManp、(1→4)连接β-D-Glcp、(1,3→6)连接β-D-Manp和α-D-Glcp组成,COP90-1由(1→4)连接β-D-Manp、(1→4)连接3-O-acetyl-β-D-Manp、(1→4)连接β-DGlcp、(1,3→6)连接β-D-Manp、末端β-D-Manp和α-D-Glcp组成。采用刚果红实验、圆二色谱、扫描电镜和原子力显微镜对均一多糖的高级结构进行初步研究,刚果红实验和圆二色谱分析表明COP70-3和COP90-1中均不含有三股螺旋结构,扫描电镜结果表明COP70-1为分布较为均匀的球形颗粒,COP70-3为分布不均的片状结构,COP90-1为均匀的椭球形。这三个均一多糖均未见文献报道。本论文采用去卵巢手术建立大鼠原发性骨质疏松模型,考察仙茅多糖CO50、CO70、CO90和COB的抗骨质疏松活性。体重及各脏器系数检测结果表明仙茅多糖能有效抑制雌性大鼠切除卵巢导致的体重增加趋势;多糖CO70和CO90对去卵巢大鼠的子宫萎缩情况有一定的改善作用;多糖CO50、CO70、CO90、COB能在一定程度上缓解卵巢摘除对大鼠脏器的影响,结果同时说明仙茅多糖在长期给药的情况下并未对大鼠产生毒副作用。骨密度及骨量检测结果表明各部位仙茅多糖均能增加去卵巢大鼠股骨和腰椎骨的骨密度、骨矿物量,其中CO70和CO90的改善效果更好;Elisa检测结果表明仙茅多糖能够抑制去卵巢大鼠体内的骨吸收和骨形成,调节血清和尿液中骨代谢生化指标,调节骨代谢趋于正常,其中CO50的效果最为显著;三点弯曲实验和压缩实验结果表明仙茅多糖显著改善股骨和腰椎骨的生物力学性能,增加骨强度和骨韧性,降低骨折风险,各给药组的股骨韧度均恢复到了正常范围,其中CO70和CO90的效果与阳性药相当;Micro-CT扫描及三维重建结果表明仙茅多糖显著修复股骨和腰椎骨骨小梁微观结构,增加骨小梁数量、骨小梁厚度,降低骨小梁分离度,改善结构模型指数,逆转模型大鼠骨微结构的退变,其中CO70和CO90的效果优于雌二醇。综合上述结果,四个仙茅多糖均具有治疗去卵巢模型大鼠骨质疏松症的作用,且CO70和CO90的效果最为显著。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285.5
【图文】：

棍合单糖标准品的PMP柱前衍生化产物HPLC分析图谱

CO50的PMP柱前衍生化产物HPLC分析图谱

090的PMP柱前衍生化产物HPLC分析图谱

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈丽娟;杨继国;宁正祥;;银耳多糖湿法打浆快速提取工艺的研究[J];中国食品添加剂;2017年01期

2 蔡琨;王晓敏;张波;田维毅;张世鹰;卢芳国;杨娟;;仙茅多糖对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响[J];中华中医药杂志;2016年12期

3 易晓敏;唐雪娟;王娟;;香蕉低聚糖的微波、超高压法提取与柱层析分离纯化[J];中国食品学报;2016年09期

4 陈阳;杨娟;;响应面法优化仙茅多糖的酶解工艺及其抗氧化活性研究[J];食品科技;2016年09期

5 曾婷;彭梅;杨娟;;仙茅多糖的分离纯化及结构分析[J];中国实验方剂学杂志;2016年16期

6 汪荔;王征;张娇;唐志书;孙晓春;宋忠兴;黄文静;刘力;;传统工艺与膜分离技术联合对马齿苋多糖的提取分离与抗氧化活性研究[J];中草药;2016年10期

7 黄菲;张瑞芬;刘慧娟;董丽红;赖婷;张名位;;荔枝多糖级分的溶液性质研究[J];食品安全质量检测学报;2015年05期

8 徐航;朱锐;刘玮;高向东;;多糖高级结构解析方法的研究进展[J];药学进展;2015年05期

9 陈冠;张岩;冯文茹;王文彤;陶遵威;;苦豆子多糖溶液构象的研究[J];现代药物与临床;2015年03期

10 蒲忠慧;杜永华;魏琴;尹礼国;高炯;;仙茅多糖对离体蛙心生理功能的影响[J];绵阳师范学院学报;2015年02期

本文编号：2795767