骨痿康颗粒对大鼠骨髓干细胞的动员作用及外周血VEGF、TGF-β、PDGF表达量的影响

发布时间：2020-08-22 09:14

【摘要】：目的通过观察骨痿康颗粒对大鼠外周血中白细胞计数、单个核细胞计数、CD34~+细胞含量及VEGF、TGF-β、PDGF细胞生长因子表达量的影响,探讨骨痿康颗粒对大鼠骨髓干细胞的动员作用以及外周血细胞生长因子的表达影响,为下一步运用中药动员干细胞以及增加外周血细胞生长因子含量来达到无创性的治疗骨缺血坏死、骨缺损、骨不连等骨科疾病做前期的基础研究。方法SD大鼠60只,随机分为4组,每组15只。生理盐水组:生理盐水灌胃,同时皮下注射生理盐水;骨痿康颗粒组:骨痿康颗粒稀释剂灌胃,同时皮下注射生理盐水;粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)组(G-CSF组):生理盐水灌胃,同时皮下注射G-CSF;骨痿康颗粒+G-CSF(联合用药组):骨痿康颗粒稀释剂灌胃,同时皮下注射G-CSF;连续用药5天后,各组取大鼠外周血,检测计数大鼠外周血中白细胞计数和单个核细胞数量,流式细胞仪检测CD34~+细胞百分比,ELISA检测外周血VEGF、TGF-β、PDGF含量。结果用药5天后,生理盐水组、骨痿康颗粒组、G-CSF组以及骨痿康颗粒+G-CSF组外周血白细胞计数分别为(7.47±0.40)×10~9/L、(7.76±0.41)×10~9/L、(19.81±0.66)×10~9/L、(20.01±0.58)×10~9/L,骨痿康颗粒组白细胞计数与生理盐水组比较(P㧐0.01),G-CSF组白细胞计数与骨痿康颗粒+G-CSF组比较(P㧐0.01),G-CSF组以及骨痿康颗粒+G-CSF组外周血白细胞计数均高于生理盐水组(P㩳0.01);生理盐水组、骨痿康颗粒组、G-CSF组以及联合用药组外周血单个核细胞计数分别为(3.32±0.30)×10~9/L、(4.93±0.51)×10~9/L、(10.99±0.62)×10~9/L、(12.64±0.69)×10~9/L,其中,骨痿康颗粒组单个核细胞计数高于生理盐水组(P㩳0.01),G-CSF组单个核细胞计数高于骨痿康颗粒组(P㩳0.01),联合用药组高于G-CSF组(P㩳0.01);骨痿康颗粒组、G-CSF组以及联合用药组CD34~+细胞百分比为(0.78±0.04)%、(3.26±0.07)%、(3.90±0.08)%,均高于生理盐水组的(0.20±0.02)%(P㩳0.01),其中G-CSF组CD34~+细胞百分比高于骨痿康颗粒组(P㩳0.01),联合用药组CD34~+细胞百分比高于G-CSF组(P㩳0.01)。骨痿康颗粒组、G-CSF组和联合用药组的大鼠VEGF、TGF-β含量均高于生理盐水组(P㩳0.01),其中G-CSF组VEGF、TGF-β含量高于骨痿康颗粒组(P㩳0.01),联合用药组VEGF、TGF-β含量高于G-CSF组(P㩳0.01)。各组大鼠PDGF含量比较,骨痿康颗粒组和联合用药组PDGF含量高于生理盐水组(P㩳0.01),但是G-CSF组PDGF含量与生理盐水组比较无差异(P㧐0.01)。结论中药骨痿康颗粒对干细胞具有一定的动员作用,同时能够增加外周血VEGF、TGF-β、PDGF表达量,临床上骨痿康颗粒治疗骨缺血坏死等疾病的细胞学机制可能与此有关。骨痿康颗粒联合G-CSF对干细胞的动员效果最佳,并且能够在动员干细胞的同时,显著增加外周血中VEGF、TGF-β、PDGF含量。这提示我们在今后的研究中,可以更多的尝试将中药作为干细胞动员剂或辅助干细胞动员,在增加外周血干细胞数量的同时增加外周血中细胞生长因子的含量,为受损组织的修复提供充足的干细胞来源和生长因子条件。实验证明利用中药参与干细胞动员治疗骨科疾病在细胞学上具有可行性,具有研究意义。
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

单个核细胞

图 1 分离的单个核细胞层Fig 1 The MNC layer was isolated2.4.3 流式细胞检测 CD34+细胞百分比① 100μL 的 BSA 加入单个核细胞（MNC）标本中，室温下放置 30min。② 30min 后，取 PE 直接标记的抗大鼠 CD34 抗体 10μL 加入到 90μL 的 MNC提取液中，另一管中加入阴性对照试剂，每管再加入 2ml 红细胞裂解液，室温放置（20℃-30℃）30 min。③ 30min 后，再加入 2mlBSA，混匀，20℃下，1500r/min 离心 15min。离心之后，弃上清液，加入 500μL BSA，混匀。④ 可以 4℃临时放置，同日上机检测。应用 BD 公司的 FACSCaIib 收集检测处理过的 MNC，首先设定第一个门，选取单个核细胞，滤去杂质，在此基础上进一步选取 CD34 阳性细胞，统计分析 CD34+百分比。

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各组大鼠WBC计数Fig2ThecountofWBCineachgroup

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17图 3 各组大鼠 MNC 计数Fig3 The count of MNC in each group给药 5 天后，WBC 计数统计分析比较发现：骨痿康颗粒组大鼠 WBC 计数与生理盐水组比较，略有增长，但分析比较（P㧐0.01）。G-CSF 组和联合用药组的WBC 均明显高于生理盐水组（P㩳0.01），说明给予 G-CSF 皮下注射后，无论是单

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