虎眼万年青对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖与凋亡的影响及机制研究
发布时间：2020-08-26 20:34
【摘要】：目的虎眼万年青是一种天然中草药植物,其多种化学成分已被证实具有强效抗癌活性,探讨虎眼万年青鳞茎及叶醇提物对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖抑制、凋亡作用及机制。方法应用MTT法测定不同浓度、不同时间段虎眼万年青鳞茎及叶醇提物对人肺腺癌H1299细胞株的增殖抑制作用;倒置显微镜观察肺癌H1299细胞形态变化,荧光显微镜观察H1299细胞凋亡变化;流式细胞术观察虎眼万年青醇提物对H1299细胞的凋亡诱导作用;Western Blot检测经虎眼万年青醇提物处理后H1299细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Bad蛋白)的表达情况;实时荧光定量法(RT-PCR)检测经虎眼万年青醇提物处理后H1299细胞凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、Bad)的表达情况。结果MTT结果显示,虎眼万年青鳞茎及叶醇提物作用于人肺腺癌H1299细胞后,48h及72h浓度为0.5、1、2、5、10mg/mL时细胞活性与空白对照组相比明显降低,且差异具有统计学意义(P0.05、P0.01);溶媒组(DMSO0.1%)与空白对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。倒置显微镜显示加药组细胞生长明显受抑制,细胞形态发生改变;荧光显微镜及流式细胞术显示,虎眼万年青鳞茎及叶醇提物正丁醇相可促进H1299细胞凋亡;Western Blot结果显示经虎眼万年青醇提物处理后H1299细胞中Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白无明显变化、Bad蛋白表达升高,Bax/Bcl-2比值升高;实时荧光定量法(RT-PCR)检测结果显示经虎眼万年青处理后H1299细胞中Bcl-2 mRNA表达下降、Bax mRNA无明显变化、Bad mRNA表达升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论1.体外实验表明,虎眼万年青叶及鳞茎醇提物均可抑制人非小细胞肺癌H1299细胞增殖及促进凋亡,且具有浓度依赖性;2.Bcl-2家族部分基因及蛋白共同参与虎眼万年青叶及鳞茎醇提物诱导H1299细胞凋亡的过程。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285
【图文】：
延边大学医学硕士学泣论文逦材料与方法逡逑５）向各孔加入２００｜ｉＬ混合好的ＢＣＡ工作液，并在３７°Ｃ水浴箱中静置逡逑２８ｍｉｎ；逡逑６）用酶标仪在波长５６２ｎｍ下读取各孔的光密度（０Ｄ）值；逡逑７）制作蛋白标准曲线如图２－６－１，并将待测样品的光密度值代入公式计逡逑算样品的蛋白浓度；逡逑８）加入ＰＢＳ，将待测样品稀释至相同浓度；逡逑９）向上述蛋白样品中加入１／４样品体积的５ｘ邋ｌｏａｄｉｎｇ邋ｂｕｆｆｅｒ邋（ＰＨ６．８），逡逑混匀，１００°Ｃ，煮沸６ｍｉｎ，并放入－２０°Ｃ冰箱中备用。逡逑
为０．５ｍｇ／ｎｉＬ、ｌｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ进行下一步实验。由此可见加药组对逡逑Ｈ１２９９肺癌细胞的增殖抑制作用，且具有明显的量效关系，结果见图３、逡逑图４。逡逑９０邋Ｔ邋｜邋—邋２４ｈ｜逦逦逦逡逑蹋桑″义希板澹模龋樱襄危埃玻靛澹埃靛澹卞危插澹靛危保板义希常板闻ǘ儒澹祝恚蹋╁义贤迹冲澹埃靡洞嘉锒苑伟龋保玻梗瓜赴翟鲋车挠跋戾义希徨澹蹋
本文编号：2805662
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285
【图文】：
延边大学医学硕士学泣论文逦材料与方法逡逑５）向各孔加入２００｜ｉＬ混合好的ＢＣＡ工作液，并在３７°Ｃ水浴箱中静置逡逑２８ｍｉｎ；逡逑６）用酶标仪在波长５６２ｎｍ下读取各孔的光密度（０Ｄ）值；逡逑７）制作蛋白标准曲线如图２－６－１，并将待测样品的光密度值代入公式计逡逑算样品的蛋白浓度；逡逑８）加入ＰＢＳ，将待测样品稀释至相同浓度；逡逑９）向上述蛋白样品中加入１／４样品体积的５ｘ邋ｌｏａｄｉｎｇ邋ｂｕｆｆｅｒ邋（ＰＨ６．８），逡逑混匀，１００°Ｃ，煮沸６ｍｉｎ，并放入－２０°Ｃ冰箱中备用。逡逑
为０．５ｍｇ／ｎｉＬ、ｌｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ进行下一步实验。由此可见加药组对逡逑Ｈ１２９９肺癌细胞的增殖抑制作用，且具有明显的量效关系，结果见图３、逡逑图４。逡逑９０邋Ｔ邋｜邋—邋２４ｈ｜逦逦逦逡逑蹋桑″义希板澹模龋樱襄危埃玻靛澹埃靛澹卞危插澹靛危保板义希常板闻ǘ儒澹祝恚蹋╁义贤迹冲澹埃靡洞嘉锒苑伟龋保玻梗瓜赴翟鲋车挠跋戾义希徨澹蹋
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