目的:研究漆姑草提取物(HSJ)对人早幼粒白血病细胞HL-60和人慢性髓系白血病细胞K562的诱导分化作用,并探讨其诱导分化的作用机制。方法:实验设置药物组(2000、1000、500、250、125、62.5μg/mL HSJ)、阳性药对照组(100μg/mL吡柔比星)、阴性对照组,MTT法检测HSJ作用HL-60和K562细胞24、48、72 h的增殖抑制率。根据MTT结果设置药物组(250、125、62.5μg/mL HSJ)和阴性对照组,经HSJ作用HL-60和K562细胞48 h后,采用NBT还原实验法分别测定HL-60和K562细胞分化能力;瑞氏-吉姆萨染色法分别观察HL-60和K562细胞形态的变化;流式细胞术检测HL-60细胞分化相关抗原CD11b和CD14阳性细胞的表达率以及K562细胞分化相关抗原CD11b、CD14、CD41a和CD42b阳性细胞的表达率;Western-Blot法检测HL-60细胞c-myc蛋白表达以及K562细胞GATA1和PU.1蛋白表达。结果:1.HSJ对HL-60细胞诱导分化研究实验结果:(1)HSJ能够抑制HL-60细胞的增殖,经HSJ作用24 h、48 h和72 h后的IC50分别为251、156和102μg/mL。(2)NBT还原实验结果显示,HSJ能增加HL-60细胞的NBT还原能力,与阴性对照组的NBT还原率(0.83±0.29)%相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的NBT还原率(16.67±1.76)%、(10.83±1.26)%、(6.00±0.87)%提高,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态发现,与阴性对照组比较,给药组HL-60细胞核浆比例减小,核仁变为肾形或蚕豆形,出现明显的细胞分化形态。(4)流式细胞术检测HL-60细胞分化相关抗原阳性细胞的表达率发现,和阴性对照组的CD11b阳性细胞表达率(41.13±0.42)%比较,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的CD11b阳性细胞表达率(66.77±4.27)%、(52.27±0.95)%、(46.27±0.38)%增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的CD14阳性细胞表达率(53.30±7.23)%比较,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的CD14阳性细胞表达率(96.63±0.23)%、(85.25±3.80)%、(63.84±0.78)%增加,差异具有统计学意义(P0.05)。(5)Western-Blot法检测HL-60细胞分化相关蛋白c-myc的表达显示,和阴性对照组的c-myc蛋白表达(0.71±0.02)相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组c-myc蛋白表达(0.38±0.01、0.45±0.01、0.58±0.02)降低,差异具有统计学意义(P0.05)。2.HSJ对K562细胞诱导分化研究实验结果:(1)HSJ能够有效抑制K562细胞的增殖,经HSJ作用24 h、48 h和72h后的IC50分别为195、112和80μg/mL。(2)NBT还原实验结果显示,HSJ能增加K562细胞的NBT还原能力,与阴性对照组的NBT还原率(0.92±0.17)%相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的NBT还原率(23.47±3.15)%、(9.33±2.56)%、(4.00±0.47)%提高,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态发现,与阴性对照组比较,给药组K562细胞核浆比例减小,出现分叶状细胞核,部分细胞核凹陷,出现明显的细胞分化形态。(4)流式细胞术检测K562细胞分化相关抗原阳性细胞的表达率,和阴性对照组的CD11b阳性细胞表达率(58.70±9.60)%比较,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的CD11b阳性细胞表达率(97.53±3.26)%、(90.93±1.90)%、(78.30±6.62)%增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的CD14阳性细胞表达率(52.43±5.40)%比较,HSJ(250、125μg/mL)组的CD14阳性细胞表达率(94.57±2.37)%、(83.05±6.86)%增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的CD41a阳性细胞表达率(53.37±8.03)%比较,HSJ(250、125μg/mL)组的CD41a阳性细胞表达率(94.57±2.25)%、(86.07±3.68)%增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的CD42b阳性细胞表达率(46.10±10.32)%比较,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的CD42b阳性细胞表达率(94.47±4.05)%、(84.33±2.73)%、(69.63±6.88)%增加,差异具有统计学意义(P0.05)。(5)Western-Blot法检测K562细胞分化相关蛋白表达显示,和阴性对照组的GATA-1蛋白表达(0.02±0.01)相比,HSJ(250、125、62.5μg/m L)组的GATA-1蛋白表达(0.63±0.04、0.57±0.03、0.18±0.02)增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的PU.1蛋白表达(0.01±0.01)相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的PU.1蛋白表达(0.53±0.02、0.17±0.03、0.11±0.01)增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:HSJ对HL-60和K562细胞具有一定诱导分化作用,其能诱导HL-60细胞向成熟粒细胞、单核细胞方向分化;诱导K562细胞向成熟粒细胞、单核细胞、巨核细胞、红细胞方向分化。
【学位单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285
【部分图文】：
18图 2-2 HSJ 对分化相关抗原 CD11b 阳性细胞表达率的影响Fig.2-2 Effect of HSJ on the expression rate of CD11b positive cells
图 2-3 HSJ 对分化相关抗原 CD14 阳性细胞表达率的影响Fig.2-3 Effect of HSJ on the expression rate of CD14 positive cells2.1.5 HSJ 对 HL-60 细胞 c-myc 蛋白表达的影响与阴性对照组比较，经不同浓度 HSJ 作用后，c-myc 蛋白表达降低，差异有
图 2-4HSJ 对 HL-60 细胞 c-myc 蛋白表达的影Fig.2-4 Effect of HSJ on c-myc protein expression in H2.2 HSJ 对 K562 细胞的诱导分化作用2.2.1 HSJ 对 K562 细胞增殖抑制率的影响
【参考文献】
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2823979
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