目的:研究漆姑草提取物(HSJ)对人早幼粒白血病细胞HL-60和人慢性髓系白血病细胞K562的诱导分化作用,并探讨其诱导分化的作用机制。方法:实验设置药物组(2000、1000、500、250、125、62.5μg/mL HSJ)、阳性药对照组(100μg/mL吡柔比星)、阴性对照组,MTT法检测HSJ作用HL-60和K562细胞24、48、72 h的增殖抑制率。根据MTT结果设置药物组(250、125、62.5μg/mL HSJ)和阴性对照组,经HSJ作用HL-60和K562细胞48 h后,采用NBT还原实验法分别测定HL-60和K562细胞分化能力;瑞氏-吉姆萨染色法分别观察HL-60和K562细胞形态的变化;流式细胞术检测HL-60细胞分化相关抗原CD11b和CD14阳性细胞的表达率以及K562细胞分化相关抗原CD11b、CD14、CD41a和CD42b阳性细胞的表达率;Western-Blot法检测HL-60细胞c-myc蛋白表达以及K562细胞GATA1和PU.1蛋白表达。结果:1.HSJ对HL-60细胞诱导分化研究实验结果:(1)HSJ能够抑制HL-60细胞的增殖,经HSJ作用24 h、48 h和72 h后的IC50分别为251、156和102μg/mL。(2)NBT还原实验结果显示,HSJ能增加HL-60细胞的NBT还原能力,与阴性对照组的NBT还原率(0.83±0.29)%相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的NBT还原率(16.67±1.76)%、(10.83±1.26)%、(6.00±0.87)%提高,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态发现,与阴性对照组比较,给药组HL-60细胞核浆比例减小,核仁变为肾形或蚕豆形,出现明显的细胞分化形态。(4)流式细胞术检测HL-60细胞分化相关抗原阳性细胞的表达率发现,和阴性对照组的CD11b阳性细胞表达率(41.13±0.42)%比较,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的CD11b阳性细胞表达率(66.77±4.27)%、(52.27±0.95)%、(46.27±0.38)%增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的CD14阳性细胞表达率(53.30±7.23)%比较,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的CD14阳性细胞表达率(96.63±0.23)%、(85.25±3.80)%、(63.84±0.78)%增加,差异具有统计学意义(P0.05)。(5)Western-Blot法检测HL-60细胞分化相关蛋白c-myc的表达显示,和阴性对照组的c-myc蛋白表达(0.71±0.02)相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组c-myc蛋白表达(0.38±0.01、0.45±0.01、0.58±0.02)降低,差异具有统计学意义(P0.05)。2.HSJ对K562细胞诱导分化研究实验结果:(1)HSJ能够有效抑制K562细胞的增殖,经HSJ作用24 h、48 h和72h后的IC50分别为195、112和80μg/mL。(2)NBT还原实验结果显示,HSJ能增加K562细胞的NBT还原能力,与阴性对照组的NBT还原率(0.92±0.17)%相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的NBT还原率(23.47±3.15)%、(9.33±2.56)%、(4.00±0.47)%提高,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态发现,与阴性对照组比较,给药组K562细胞核浆比例减小,出现分叶状细胞核,部分细胞核凹陷,出现明显的细胞分化形态。(4)流式细胞术检测K562细胞分化相关抗原阳性细胞的表达率,和阴性对照组的CD11b阳性细胞表达率(58.70±9.60)%比较,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的CD11b阳性细胞表达率(97.53±3.26)%、(90.93±1.90)%、(78.30±6.62)%增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的CD14阳性细胞表达率(52.43±5.40)%比较,HSJ(250、125μg/mL)组的CD14阳性细胞表达率(94.57±2.37)%、(83.05±6.86)%增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的CD41a阳性细胞表达率(53.37±8.03)%比较,HSJ(250、125μg/mL)组的CD41a阳性细胞表达率(94.57±2.25)%、(86.07±3.68)%增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的CD42b阳性细胞表达率(46.10±10.32)%比较,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的CD42b阳性细胞表达率(94.47±4.05)%、(84.33±2.73)%、(69.63±6.88)%增加,差异具有统计学意义(P0.05)。(5)Western-Blot法检测K562细胞分化相关蛋白表达显示,和阴性对照组的GATA-1蛋白表达(0.02±0.01)相比,HSJ(250、125、62.5μg/m L)组的GATA-1蛋白表达(0.63±0.04、0.57±0.03、0.18±0.02)增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性对照组的PU.1蛋白表达(0.01±0.01)相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)组的PU.1蛋白表达(0.53±0.02、0.17±0.03、0.11±0.01)增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:HSJ对HL-60和K562细胞具有一定诱导分化作用,其能诱导HL-60细胞向成熟粒细胞、单核细胞方向分化;诱导K562细胞向成熟粒细胞、单核细胞、巨核细胞、红细胞方向分化。
【学位单位】:贵州医科大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2017
【中图分类】:R285
【部分图文】:![表达率,对分,抗原](http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1017086455.nh0002)
18图 2-2 HSJ 对分化相关抗原 CD11b 阳性细胞表达率的影响Fig.2-2 Effect of HSJ on the expression rate of CD11b positive cells
![表达率,对分,蛋白表达,抗原](http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1017086455.nh0003)
图 2-3 HSJ 对分化相关抗原 CD14 阳性细胞表达率的影响Fig.2-3 Effect of HSJ on the expression rate of CD14 positive cells2.1.5 HSJ 对 HL-60 细胞 c-myc 蛋白表达的影响与阴性对照组比较,经不同浓度 HSJ 作用后,c-myc 蛋白表达降低,差异有
![HL-60细胞,蛋白表达,细胞的,细胞](http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1017086455.nh0004)
图 2-4HSJ 对 HL-60 细胞 c-myc 蛋白表达的影Fig.2-4 Effect of HSJ on c-myc protein expression in H2.2 HSJ 对 K562 细胞的诱导分化作用2.2.1 HSJ 对 K562 细胞增殖抑制率的影响
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 黄英丹;鹿全意;;MicroRNA介导的急性髓系白血病化疗耐药机制研究进展[J];中国实验血液学杂志;2017年01期
2 乔静巧;何苗;张姝婷;白海;;新型小分子药物在治疗慢性淋巴细胞白血病中的研究进展[J];中国实验血液学杂志;2017年01期
3 丁亦含;李玉峰;;酪氨酸激酶抑制剂治疗慢性髓系白血病疗效预测的研究进展[J];中国实验血液学杂志;2017年01期
4 余潇苓;赵燕娜;郑智茵;高瑞兰;尹利明;;地西他滨抑制K562白血病细胞增殖和诱导分化的作用[J];中国病理生理杂志;2017年01期
5 范奎;代良敏;伍振峰;杨桂燕;杨明;;放化疗所致骨髓抑制的研究进展[J];中华中医药杂志;2017年01期
6 梁冰;周磊;李淑芳;沈祥春;;漆姑草醇提物对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡相关蛋白表达的影响[J];中华中医药杂志;2016年06期
7 杨萌;申星;邢爽;熊国林;欧红玲;罗庆良;王欣茹;余祖胤;;伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡[J];国际药学研究杂志;2016年02期
8 王为光;王晓艳;田黎明;于广晴;张纯;董航;倪蕾;王守梅;赵悦荣;宋月;;急性白血病不同阶段血小板膜糖蛋白的变化[J];中国医刊;2016年04期
9 蔡艳霞;王晓燕;曾丽吟;田文洪;王逢春;赵友恒;;急性早幼粒细胞白血病患者白血病细胞免疫表型分析[J];临床和实验医学杂志;2015年11期
10 吕菲菲;杜艳;李楠楠;王玮;;三氧化二砷对慢性髓系白血病K562细胞的诱导分化及其作用机制的研究[J];中国实验血液学杂志;2015年01期
相关硕士学位论文 前2条
1 陈影;流式细胞术检测急性髓细胞白血病免疫表型及其临床意义[D];安徽医科大学;2014年
2 李兆荣;葛根总黄酮诱导急性髓细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的实验研究[D];南京中医药大学;2011年
本文编号:
2823979
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2823979.html