迷迭香酸类似物RA-C1通过依赖Caspase的线粒体通路抑制鼻咽癌CNE-1细胞增殖
发布时间：2020-09-27 20:52
背景:目前,迷迭香酸具备的低毒性和抗肿瘤活性特性已经成为肿瘤治疗的热点化合物之一。然而由于其水溶性较低且抗肿瘤活性较低限制了其应用,同时由于鼻咽癌的预后不佳,迫切需要新的治疗方法。因此,我们课题组通过参照迷迭香酸结构,将其酯键用酰胺键取代提高水溶性、羧酸酯化以提高膜渗透性,从而合成了新的迷迭香酸类似物。目的:通过体外实验探讨迷迭香酸类似物RA-C1是否通过激活依赖于Caspase的线粒体通路抑制鼻咽癌CNE-1细胞的增殖,诱导其凋亡,并探索RA-C1的抗肿瘤机制。方法:我们通过参照迷迭香酸结构式合成了迷迭香酸类似物,命名为(R,E)-3-(3,4-二羟基苯基)-2-(3-(3,4-二羟基苯基)丙烯酰氨基)丙酸甲酯,简称RA-C1。采用MTT法测定RA-C1对鼻咽癌细胞系CNE-1、CNE-2以及HONE-1细胞的选择抑制作用,同时测定其对人体正常的人血管内皮细胞(HUVEC)和人类胚胎肾细胞293(HEK 293)的毒副作用。再者进一步拟探讨RA-C1对鼻咽癌CNE-1细胞的抑制的药理学机制。分别采用Hoechst 33342染色和Annexin-V FITC/PI双染检测细胞凋亡,随后采用JC-1荧光探针检测线粒体膜电位并采用Western blotting检测细胞色素C、Bax、Bcl-2、Caspase 3、Caspase 9的表达情况。结果:随着RA-C1的浓度逐渐增大,对CNE-1细胞的增殖抑制率也增大。同时Hoechst 33342染色和Annexin-V FITC/PI双染检测细胞凋亡结果显示,随着RA-C1浓度增大,凋亡特征越明显,早期凋亡率越大。此外,随着细胞色素C的释放和Caspase-9和Caspase-3的激活,RA-C1能够使线粒体膜电势的下降,且加入抗氧化剂NAC能够逆转线粒体膜电位的下降趋势。Western blotting结果显示RA-C1能够降低Bcl-2蛋白、升高Bax蛋白的表达。结论:RA-C1有效地抑制鼻咽癌细胞CNE-1细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制很可能是通过激活依赖Caspase的线粒体通路促进CNE-1细胞的凋亡。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285
【部分图文】：
细胞高分化鼻咽癌细胞株 CNE-1、CNE-2、HONE-1，胃癌腺癌 MCF-7 细胞、肝癌 SMMC-7721 细胞，均由广西研究所提供，本课题组液氮中保存。人血管内皮细胞（胎肾细胞 293（HEK 293）由广西医科大学实验中心鼻氮保存。以上细胞均是培养于含 10% 胎牛血清的 RPM100U/m L 青霉素和 100U/m L 链霉素，置于 37℃、相培养箱中培养，定期观察，1×PBS 缓冲液清洗，0.25 %DTA）消化传代。药物香酸（RA）（纯度＞ 98%，购自成都曼思特生物科技0.31，脂水分配系数 ClogP = 1.0996，结构式如下图 1
定期观察，1×PBS 缓冲液清洗，0.25 %胰TA）消化传代。药物酸（RA）（纯度＞ 98%，购自成都曼思特生物科技有.31，脂水分配系数 ClogP = 1.0996，结构式如下图 1-1图 1-1 RA 的化学结构式Figure 1-1 Chemical structure of RA-C1酸类似物 RA-C1（纯度 ≥ 98%，分子量 373.36，分子式系数 ClogP = 0.945，结构式见图 1-2），由广西医科大药物化学教研室李清老师提供。
RA-C1 对人正常 HUVEC 和 HEK 293 细胞增殖作用的影响 (48 h). *P > 0.05 与空白对照（0 μmol/L）相比. ( x±s, n=3)Figure 3-1. The effects of RA-C1 on proliferation of HUVEC and HEK 293 cells. (48 h)*P > 0.05 compared with control group. ( x±s, n=3 ）T 法测定 RA-C1 对鼻咽癌 CNE-1 细胞的增殖抑制活性表 3-2 的 MTT 结果所示，各浓度的 RA-C1 组（0，10，20，30，l/L）分别作用于 CNE-1 细胞 24、48、72 h 后，RA-C1 组对 CN长的抑制作用随着作用时间和药物浓度的增大而增大，呈现时间依赖关系，差异具有统计学意义（P < 0.05)。计算得各时间点 为 32.84±2.28，28.28±2.42, 16.24±3.08 μmol/L。同时 MTT 结果显 作用 24 h 时，其浓度变化与细胞增值抑制率的线性关系较好，另旨在研究 RA-C1 对 CNE-1 细胞早期凋亡的影响，故选择 RA-C1
本文编号：2828361
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285
【部分图文】：
细胞高分化鼻咽癌细胞株 CNE-1、CNE-2、HONE-1，胃癌腺癌 MCF-7 细胞、肝癌 SMMC-7721 细胞，均由广西研究所提供，本课题组液氮中保存。人血管内皮细胞（胎肾细胞 293（HEK 293）由广西医科大学实验中心鼻氮保存。以上细胞均是培养于含 10% 胎牛血清的 RPM100U/m L 青霉素和 100U/m L 链霉素，置于 37℃、相培养箱中培养，定期观察，1×PBS 缓冲液清洗，0.25 %DTA）消化传代。药物香酸（RA）（纯度＞ 98%，购自成都曼思特生物科技0.31，脂水分配系数 ClogP = 1.0996，结构式如下图 1
定期观察，1×PBS 缓冲液清洗，0.25 %胰TA）消化传代。药物酸（RA）（纯度＞ 98%，购自成都曼思特生物科技有.31，脂水分配系数 ClogP = 1.0996，结构式如下图 1-1图 1-1 RA 的化学结构式Figure 1-1 Chemical structure of RA-C1酸类似物 RA-C1（纯度 ≥ 98%，分子量 373.36，分子式系数 ClogP = 0.945，结构式见图 1-2），由广西医科大药物化学教研室李清老师提供。
RA-C1 对人正常 HUVEC 和 HEK 293 细胞增殖作用的影响 (48 h). *P > 0.05 与空白对照（0 μmol/L）相比. ( x±s, n=3)Figure 3-1. The effects of RA-C1 on proliferation of HUVEC and HEK 293 cells. (48 h)*P > 0.05 compared with control group. ( x±s, n=3 ）T 法测定 RA-C1 对鼻咽癌 CNE-1 细胞的增殖抑制活性表 3-2 的 MTT 结果所示，各浓度的 RA-C1 组（0，10，20，30，l/L）分别作用于 CNE-1 细胞 24、48、72 h 后，RA-C1 组对 CN长的抑制作用随着作用时间和药物浓度的增大而增大，呈现时间依赖关系，差异具有统计学意义（P < 0.05)。计算得各时间点 为 32.84±2.28，28.28±2.42, 16.24±3.08 μmol/L。同时 MTT 结果显 作用 24 h 时，其浓度变化与细胞增值抑制率的线性关系较好，另旨在研究 RA-C1 对 CNE-1 细胞早期凋亡的影响，故选择 RA-C1
【参考文献】
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本文编号：2828361
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