蓝萼乙素通过JNK和p38 MAPK通路诱导人宫颈癌细胞凋亡和细胞周期阻滞

发布时间：2020-10-09 06:37

　　背景:宫颈癌在全世界女性癌症相关死亡的疾病中排第四位。目前,化疗仍是晚期及复发性宫颈癌患者的主要治疗手段,但大剂量化疗药物引起的毒副反应以及长期使用化疗药物引起的耐药现象,使其在临床应用中受到一定的限制,因此寻找新的、低毒高效的治疗药物是当前亟待解决的问题。JNK和p38 MAPK信号通路参与细胞的增殖、分化、凋亡和细胞周期阻滞等生理过程。蓝萼乙素的抗肿瘤作用与JNK和p38 MAPK信号通路的关系及其具体的分子作用机制目前尚不清楚。目的:本实验通过研究蓝萼乙素对宫颈癌HeLa、SiHa细胞毒性作用与JNK和p38MAPK信号通路的关系,进一步阐明蓝萼乙素抗宫颈癌作用的相关分子机制,为蓝萼乙素治疗宫颈癌奠定理论基础。方法:1.MTT法测定不同处理组HeLa、SiHa细胞增殖活性的变化。2.流式细胞仪检测不同处理组HeLa、SiHa细胞凋亡的改变和细胞周期分布的变化。3.Western blot法检测相关分子蛋白表达水平的变化。4.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测相关分子mRNA表达水平的变化。结果:1.MTT结果显示:蓝萼乙素以剂量依赖的方式抑制HeLa、SiHa细胞增殖,而用SB203580(p38 MAPK通路特异性抑制剂)或SP600125(JNK通路特异性抑制剂)预处理1 h后,再用相同浓度的蓝萼乙素处理相同时间,细胞活性显著增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。2.流式细胞术结果显示:8μM蓝萼乙素可明显诱导HeLa、SiHa细胞凋亡,而用SB203580或SP600125预处理1 h后,再用8μM蓝萼乙素处理相同时间,HeLa、SiHa细胞凋亡率明显下降,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。蓝萼乙素以剂量依赖的方式诱导HeLa、SiHa细胞周期阻滞在G2/M期,而用SB203580或SP600125预处理1 h后,再用相同浓度的蓝萼乙素处理相同时间,阻滞在G2/M期的HeLa、SiHa细胞明显减少。与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。3.Western-blot结果显示:蓝萼乙素处理宫颈癌HeLa、SiHa细胞24 h后,与对照组相比,P-JNK,P-p38,Bax,p21蛋白的表达增高,Bcl-2,cyclin D1蛋白表达降低,T-JNK,T-p38蛋白表达没有变化,而用SB203580或SP600125预处理1 h后,再用相同浓度的蓝萼乙素处理相同时间,P-JNK,P-p38,Bax,p21蛋白的表达降低,Bcl-2,cyclin D1蛋白表达升高。与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。4.qRT-PCR结果显示:蓝萼乙素处理宫颈癌HeLa、SiHa细胞24 h后,与对照组相比,Fas,FasL,Bax,p21 mRNA的表达增高,Bcl-2,cyclinD1 mRNA表达降低,而用SB203580或SP600125预处理1 h后,再用相同浓度的蓝萼乙素处理相同时间,Fas,FasL,Bax,p21 mRNA的表达降低,Bcl-2,cyclinD1 mRNA的表达升高。与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.蓝萼乙素通过活化JNK和p38 MAPK信号通路抑制宫颈癌HeLa、SiHa细胞的增殖并促进其凋亡。2.蓝萼乙素可能通过JNK和p38 MAPK信号通路上调p21、下调cyclinD1的表达,进而诱导宫颈癌HeLa、SiHa细胞周期阻滞在G2/M期。
【学位单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

乙素,联合抑制剂,对照组,细胞活性

分组 n 抑制率（%）对照组 3 04 μM GLB 组 3 26.09±4.32**8 μM GLB 组 3 39.80±5.59**16 μM GLB 组 3 50.73±5.34**4 μM GLB+10 μM SB 组 3 15.74±5.72#4 μM GLB+10μM SP 组 3 16.17±4.63#8 μM GLB+10 μM SB 组 3 24.08±3.58##8 μM GLB+10 μM SP 组 3 29.60±5.09#16 μM GLB+10 μM SB组 3 39.12±5.79##16 μM GLB+10 μM SP 组 3 40.76±4.19#10 μM SB 组 3 5.29±4.03**10 μM SP 组 3 4.62±3.39**P 值 0.000F 30.248注：*P<0.05,**P<0.01，与对照组相比，#P<0.05,##P<0.01，与不同浓度蓝萼乙素单用组比较

乙素,宫颈癌,流式细胞术,抑制剂

注：*P<0.05,**P<0.01，与对照组相比；#P<0.05,##P<0.01，与单用蓝萼乙素组比较图 4A、B 流式细胞术检测蓝萼乙素及相关抑制剂对宫颈癌 HeLa、SiHa 细胞周期的影响；C、D HeLa、SiHa 细胞周期分布的统计图表；E、F Western blot 法检测不同处理组 p21 和 cyclinD1蛋白水平表达的变化；G、H qRT-PCR 法检测不同处理组 p21 和 cyclinD1 mRNA 水平表达的变化表 12 流式细胞术分析不同处理组对 SiHa 细胞周期分布的影响分组 n G0/G1 S G2/M空白对照组 3 62.94±1.14 23.19±0.92 13.87±1.964 μM GLB 组 3 67.35±0.78 15.27±0.47 17.38±1.07**8 μM GLB 组 3 66.79±1.14 7.85±0.23 25.36±1.31**16 μM GLB 组 3 51.98±1.64 16.22±0.44 31.98±1.63**8 μM GLB+10 μM SB组 3 64.59±2.26 21.38±0.91 14.03±1.36##8 μM GLB+10 μM SP 组 3 53.93±1.73 23.82±0.46 22.25±1.42

【参考文献】