丹参多糖和丹参素钠促进人外周血T淋巴细胞增殖药理作用及机制研究
发布时间：2021-10-13 20:08
目的:研究丹参多糖（Salvia miltiorrhiza polysaccharide,SMP）和丹参素钠（sodium Danshensu,SDSS）对人外周血T淋巴细胞增殖和杀伤活性的影响及其作用机制。方法:采用水提醇沉法提取SMP并纯度鉴定;Ficoll密度梯度离心法分离人外周血淋巴细胞,细胞分为两部分,一部分淋巴细胞加药处理,流式细胞仪检测不同浓度SMP和SDSS对淋巴细胞表型（CD3+、CD14+、CD19+、CD56+）的影响;倒置荧光显微镜、细胞计数仪和CFSE染色考察不同浓度SMP和SDSS对淋巴细胞增殖的影响;钙黄绿素法检测其对淋巴细胞杀伤能力的影响;一部分细胞按照CIK培养,加入细胞因子刺激活化,按照上述步骤检测两种药物对CIK细胞增殖的影响。提取细胞样品总RNA和蛋白,用RT-PCR检测细胞增殖相关基因IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ和TLR家族mRNA基因表达变化。用Western Blotting检测MAPK信号通路和NF-κB信号通路相关蛋白ERK、JNK、IκBα、p-p65等蛋白的变化。为验证SMP和SDSS刺激T淋巴细胞增殖活化是否是通过MA...
【文章来源】：广东药科大学广东省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 序言
1.1 研究背景
1.2 研究目的、意义
1.3 研究内容
1.4 研究路线
第二章 SMP和SDSS促进人外周血淋巴细胞增殖药效学研究
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 样本
2.2.2 试剂
2.2.3 仪器
2.2.4 主要溶液的配置
2.3 实验方法
2.3.1 丹参多糖的提取与纯度鉴定
2.3.2 人外周血淋巴细胞的分离与培养
2.3.3 免疫荧光标记检测丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞表型的影响
2.3.4 细胞计数仪检测丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞数量的影响
2.3.5 CFSE染色检测丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞增殖能力的影响
2.3.6 钙黄绿素-AM(Calcein-AM)荧光检测丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞杀伤活性的影响
2.3.7 丹参多糖和丹参素钠对T淋巴细胞细胞因子基因表达水平的影响
2.3.8 统计分析
2.4 结果
2.4.1 丹参多糖纯度测定
2.4.2 丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞表型的影响
2.4.3 丹参多糖和丹参素钠对T淋巴细胞增殖的影响
2.4.4 丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞杀伤活性的影响
2.4.5 丹参多糖和丹参素钠对T淋巴细胞细胞因子分泌的影响
2.5 小结
第三章 SMP和SDSS对T淋巴细胞增殖机制研究
3.1 前言
3.2 材料
3.2.1 试剂
3.2.2 仪器
3.2.3 主要溶液的配制
3.3 实验方法
3.3.1 RT-PCR检测TLR家族相关基因的表达
3.3.2 Western blotting检测T细胞活化信号通路蛋白表达的影响
3.4 结果
3.4.1 丹参多糖对T淋巴细胞TLR基因表达的影响
3.4.2 丹参素钠对T淋巴细胞TLR基因表达的影响
3.4.3 丹参多糖对T细胞活化相关蛋白表达的影响
3.4.4 丹参素钠对T细胞活化相关蛋白表达的影响
3.5 小结
讨论
参考文献
附录一 英文缩略词表
附录二 攻读学位期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体（TLR）介导的天然免疫间的相互调节[J]. 于莉莉,韩代书. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2013(01)
[2]淫羊藿多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响[J]. 高焕,王德云,郭利伟,张欣兴,赵晓娟,赵晓娜. 畜牧兽医学报. 2013(01)
[3]Toll样受体介导的细胞内信号通路及其免疫调节功能[J]. 洪丽莉,孔倩颖,韦曦. 国际口腔医学杂志. 2013(01)
[4]铁皮石斛多糖对RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响[J]. 蔡海兰,黄晓君,聂少平,田芳,谢明勇,崔武卫. 中国药理学通报. 2012(11)
[5]天门冬多糖对猪脾淋巴细胞体外增殖的影响[J]. 潘贵珍,胡庭俊,苏子杰,钟舒红,韦现色. 饲料工业. 2012(19)
[6]免疫增强剂提高破伤风免疫马血浆效价试验研究[J]. 马学文,毛志明,高建英,马忠效. 甘肃畜牧兽医. 2005(02)
[7]几种中药成分的免疫增强活性及其作用效果[J]. 储岳峰,颜新敏,胡元亮,李祥瑞. 中国兽医科技. 2005(01)
[8]中草药免疫增强剂的研究与应用[J]. 刘欣. 辽宁畜牧兽医. 2004(02)
[9]丹参注射液对肿瘤浸润淋巴细胞的体外扩增及抗肿瘤作用[J]. 陈良良,吴良村,李庆霞,陈卫星,沈敏鹤. 浙江中医学院学报. 2002(03)
[10]中药免疫增强剂提高鸡免疫功能的研究[J]. 梁荣,郭抗抗,伊岚,张耀相,李健强,岳治权. 中国兽医科技. 1998(09)
硕士论文
[1]丹参多糖的提取及生物活性的研究[D]. 吴从平.山东农业大学 2010
本文编号：3435327
【文章来源】：广东药科大学广东省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 序言
1.1 研究背景
1.2 研究目的、意义
1.3 研究内容
1.4 研究路线
第二章 SMP和SDSS促进人外周血淋巴细胞增殖药效学研究
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 样本
2.2.2 试剂
2.2.3 仪器
2.2.4 主要溶液的配置
2.3 实验方法
2.3.1 丹参多糖的提取与纯度鉴定
2.3.2 人外周血淋巴细胞的分离与培养
2.3.3 免疫荧光标记检测丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞表型的影响
2.3.4 细胞计数仪检测丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞数量的影响
2.3.5 CFSE染色检测丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞增殖能力的影响
2.3.6 钙黄绿素-AM(Calcein-AM)荧光检测丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞杀伤活性的影响
2.3.7 丹参多糖和丹参素钠对T淋巴细胞细胞因子基因表达水平的影响
2.3.8 统计分析
2.4 结果
2.4.1 丹参多糖纯度测定
2.4.2 丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞表型的影响
2.4.3 丹参多糖和丹参素钠对T淋巴细胞增殖的影响
2.4.4 丹参多糖和丹参素钠对淋巴细胞杀伤活性的影响
2.4.5 丹参多糖和丹参素钠对T淋巴细胞细胞因子分泌的影响
2.5 小结
第三章 SMP和SDSS对T淋巴细胞增殖机制研究
3.1 前言
3.2 材料
3.2.1 试剂
3.2.2 仪器
3.2.3 主要溶液的配制
3.3 实验方法
3.3.1 RT-PCR检测TLR家族相关基因的表达
3.3.2 Western blotting检测T细胞活化信号通路蛋白表达的影响
3.4 结果
3.4.1 丹参多糖对T淋巴细胞TLR基因表达的影响
3.4.2 丹参素钠对T淋巴细胞TLR基因表达的影响
3.4.3 丹参多糖对T细胞活化相关蛋白表达的影响
3.4.4 丹参素钠对T细胞活化相关蛋白表达的影响
3.5 小结
讨论
参考文献
附录一 英文缩略词表
附录二 攻读学位期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体（TLR）介导的天然免疫间的相互调节[J]. 于莉莉,韩代书. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2013(01)
[2]淫羊藿多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响[J]. 高焕,王德云,郭利伟,张欣兴,赵晓娟,赵晓娜. 畜牧兽医学报. 2013(01)
[3]Toll样受体介导的细胞内信号通路及其免疫调节功能[J]. 洪丽莉,孔倩颖,韦曦. 国际口腔医学杂志. 2013(01)
[4]铁皮石斛多糖对RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响[J]. 蔡海兰,黄晓君,聂少平,田芳,谢明勇,崔武卫. 中国药理学通报. 2012(11)
[5]天门冬多糖对猪脾淋巴细胞体外增殖的影响[J]. 潘贵珍,胡庭俊,苏子杰,钟舒红,韦现色. 饲料工业. 2012(19)
[6]免疫增强剂提高破伤风免疫马血浆效价试验研究[J]. 马学文,毛志明,高建英,马忠效. 甘肃畜牧兽医. 2005(02)
[7]几种中药成分的免疫增强活性及其作用效果[J]. 储岳峰,颜新敏,胡元亮,李祥瑞. 中国兽医科技. 2005(01)
[8]中草药免疫增强剂的研究与应用[J]. 刘欣. 辽宁畜牧兽医. 2004(02)
[9]丹参注射液对肿瘤浸润淋巴细胞的体外扩增及抗肿瘤作用[J]. 陈良良,吴良村,李庆霞,陈卫星,沈敏鹤. 浙江中医学院学报. 2002(03)
[10]中药免疫增强剂提高鸡免疫功能的研究[J]. 梁荣,郭抗抗,伊岚,张耀相,李健强,岳治权. 中国兽医科技. 1998(09)
硕士论文
[1]丹参多糖的提取及生物活性的研究[D]. 吴从平.山东农业大学 2010
本文编号：3435327
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/3435327.html
