猫爪草多糖理化性质及抗肝损伤活性的研究
发布时间：2021-10-29 19:57
研究目的本论文旨在对猫爪草粗多糖进行系统的分离,以期得到的猫爪草多糖组分、多糖亚组分和均一多糖成分,并对分离产物进行理化性质的测定,同时采用体内和体外模型,评价猫爪草粗多糖、多糖组分、多糖亚组分和均一多糖成分的抗肝损伤和免疫调节活性,为今后猫爪草多糖的研究和开发提供实验依据,以及为“灵猫方”的开发奠定基础。实验方法实验中采用水浴提取/煎煮、醇沉、透析和冷冻干燥等方法,制备猫爪草粗多糖;采用DEAE-纤维素、Sephadex G-100和Sephadex G-50柱层析对粗多糖进行系统的分离和纯化;通过测定糖醛酸含量、糖含量、分子量分布和单糖组成,确定粗多糖、多糖亚组分和均一多糖成分的理化性质;采用红外光谱和核磁共振图谱对均一多糖成分进行化学结构的表征。采用ConA诱导肝损伤模型,评价猫爪草多糖对整体动物的保肝活性;采用人L-O2细胞评价多糖在体外促进肝细胞增殖和对抗ConA或H2O2诱导的肝细胞损伤的活性;采用HepG2.2.15肝细胞评价猫爪草多糖对乙肝抗原分泌的抑制活性;采用小鼠原代脾细胞评价多糖对脾细胞增殖和分泌细...
【文章来源】：湖南中医药大学湖南省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文缩略表
引言
第一章 猫爪草多糖提取、分离和纯化及理化表征的分析
1 材料
1.1 药材
1.2 试剂
1.3 仪器
2 实验方法
2.1 猫爪草粗多糖的制备
2.2 猫爪草粗多糖的分离和纯化
2.2.1 猫爪草粗多糖的DEAE-Cellulose柱层析
2.2.2 猫爪草多糖组分的初次凝胶柱层析
2.2.3 猫爪草多糖亚组分的再次凝胶柱层析
2.3 猫爪草多糖理化性质的测定
2.3.1 糖含量测定
2.3.2 糖醛酸含量测定
2.3.3 多糖分子量的分布和峰高分子量测定
2.3.4 多糖组分单糖组成测定
3. 实验结果
3.1 猫爪草粗多糖的理化性质
3.2 猫爪草多糖组分的理化性质
3.3 猫爪草多糖亚组分的理化性质
3.4 猫爪草均一多糖成分RTP-60-Ⅰ和RTP-60-Ⅱ的理化性质
4.小结
第二章 猫爪草多糖抗肝损伤和免疫调节作用的研究
1.实验材料
1.1 动物和细胞
1.2 试剂和供试品
1.3 仪器
2.实验方法
2.1 ConA诱导小鼠肝损伤模型的建立
2.2 ConA致肝损伤小鼠药理活性指标的测定方法
2.2.1 小鼠脾脏细胞增殖能力检测的实验方法
2.2.2 检测小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ和IL-6 能力的实验方法
2.2.3 检测肝脏匀浆上清液中总蛋白的含量
2.2.4 检测肝脏匀浆上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活力
2.2.5 检测肝脏匀浆上清液中过氧化氢酶(CAT)的活力
2.2.6 检测肝脏匀浆上清液中丙二醛(MDA)的活力
2.2.7 检测肝脏匀浆上清液中TNF-α的含量
2.2.8 检测肝脏匀浆上清液中IFN-γ的含量
2.2.9 检测肝脏匀浆上清液中IL-6 的含量
2.2.10 检测肝脏匀浆上清液中谷丙转氨酶(ALT)的活力
2.2.11 检测肝脏匀浆上清液中谷草转氨酶(AST)的活力
2.3 体外测定多糖对人肝细胞分泌HBsAg和HBeAg影响的方法
2.4 体外测定多糖对人L-O_2肝细胞增殖活性的实验
2.5 测定多糖对人L-O_2肝细胞抗ConA损伤影响的实验方法
2.6 体外测定多糖对人L-O_2肝细胞抗H_2O_2损伤影响的实验方法
2.7 体外测定多糖免疫活性方法
2.7.1 检测多糖对小鼠脾脏B和T淋巴细胞增殖能力影响
2.7.2 检测多糖对小鼠脾细胞分泌IFN-γ的影响
2.7.3 检测腹腔巨噬细胞分泌TNF-α影响
2.8 统计学方法
3.实验结果
3.1 猫爪草粗多糖对ConA诱导肝损伤小鼠影响的实验结果
3.1.1 对ConA造模小鼠存活率的影响
3.1.2 猫爪草粗多糖对ConA肝损伤小鼠脏器质量的影响
3.1.3 粗多糖对ConA诱导肝损伤小鼠肝组织病理变化的影响
3.1.4 对肝损伤小鼠脾细胞增殖以及IFN-γ和IL-6 分泌的影响
3.1.5 对肝损伤小鼠肝匀浆中SOD、MDA及CAT含量的影响
3.1.6 对肝损伤小鼠肝匀浆中IFN-γ、TNF-α、IL-6 含量的影响
3.1.7 对肝损伤小鼠肝匀浆中AST和ALT活力的影响
3.2 粗多糖对HepG2.2.15 肝细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响
3.3 猫爪草多糖对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.3.1 粗多糖对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.3.2 多糖组分对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.3.3 多糖亚组分对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.3.4 均一多糖对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.4 猫爪草多糖对人L-O_2 细胞抗H_2O_2损伤的影响
3.4.1 粗多糖对人L-O_2 细胞的抗H_2O_2损伤的影响
3.4.2 多糖组分对人L-O_2细胞的抗H_2O_2损伤的影响
3.4.3 亚组分对人L-O_2 细胞的抗H_2O_2损伤的影响
3.4.4 均一多糖对人L-O_2细胞的抗H_2O_2损伤的影响
3.5 猫爪草粗多糖免疫活性的研究结果(体外)
3.5.1 对原代小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响
3.5.2 猫爪草粗多糖对脾细胞分泌IFN-γ的影响
3.5.3 猫爪草粗多糖对腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的影响
3.6 猫爪草多糖组分免疫活性的研究结果(体外)
3.6.1 猫爪草多糖组分对原代小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
3.6.2 猫爪草多糖组分对脾细胞分泌IFN-γ的影响
4.小结
第三章 猫爪草多糖成分的化学结构解析
1 材料
1.1 试剂
1.2 仪器
2 实验方法
2.1 红外光谱(IR)测定
2.2 核磁共振(NMR)图谱测定
3.实验结果
3.1 RTP-60-Ⅰ结构解析
3.1.1 红外光谱(IR)分析
3.1.2 核磁共振吸收光谱解析(NMR)
3.2 RTP-60-Ⅱ结构解析
3.2.1 红外光谱(IR)分析
3.2.2 核磁共振吸收光谱解析(NMR)
4. 小结
结论
致谢
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]猫爪草多糖研究进展[J]. 李锦,毛朋飞,刘红云,扶胜兰. 农技服务. 2017(24)
[2]猫爪草药理作用的研究情况[J]. 陈津慧. 内蒙古中医药. 2015(07)
[3]猫爪草提取物体外抗菌活性研究[J]. 卞晓霞,罗跃娥,王文洁,闫利华. 辽宁中医杂志. 2014(09)
[4]猫爪草的化学成分及药理作用研究进展[J]. 苗耀东,李小江,贾英杰. 中草药. 2014(11)
[5]中药猫爪草的研究进展[J]. 李瑞,尹春萍. 中国药师. 2014(03)
[6]猫爪草药理作用研究的新进展[J]. 胡瑛瑛. 当代医药论丛. 2014(02)
[7]猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌A549细胞活性研究[J]. 童晔玲,杨锋,戴关海,任泽明,王波波. 中华中医药学刊. 2013(10)
[8]野生与栽培猫爪草药材中总糖与黄酮含量比较[J]. 李保珍,王智玮,侯海若,刘雪芳. 贵阳医学院学报. 2011(05)
[9]mfn2基因在猫爪草皂苷、红三叶异黄酮治疗乳腺癌中的作用机制研究[J]. 孟祥虎,刘博,尹春萍,樊龙昌,臧光辉,汤雅馨,周婷婷. 中国药师. 2011(09)
[10]中药猫爪草化学成分及质量控制研究进展[J]. 张红伟,刘菊,赵群涛,王君明. 中医学报. 2011(08)
硕士论文
[1]中药猫爪草的化学成分分析研究[D]. 芮晟.南京工业大学 2003
本文编号：3465302
【文章来源】：湖南中医药大学湖南省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文缩略表
引言
第一章 猫爪草多糖提取、分离和纯化及理化表征的分析
1 材料
1.1 药材
1.2 试剂
1.3 仪器
2 实验方法
2.1 猫爪草粗多糖的制备
2.2 猫爪草粗多糖的分离和纯化
2.2.1 猫爪草粗多糖的DEAE-Cellulose柱层析
2.2.2 猫爪草多糖组分的初次凝胶柱层析
2.2.3 猫爪草多糖亚组分的再次凝胶柱层析
2.3 猫爪草多糖理化性质的测定
2.3.1 糖含量测定
2.3.2 糖醛酸含量测定
2.3.3 多糖分子量的分布和峰高分子量测定
2.3.4 多糖组分单糖组成测定
3. 实验结果
3.1 猫爪草粗多糖的理化性质
3.2 猫爪草多糖组分的理化性质
3.3 猫爪草多糖亚组分的理化性质
3.4 猫爪草均一多糖成分RTP-60-Ⅰ和RTP-60-Ⅱ的理化性质
4.小结
第二章 猫爪草多糖抗肝损伤和免疫调节作用的研究
1.实验材料
1.1 动物和细胞
1.2 试剂和供试品
1.3 仪器
2.实验方法
2.1 ConA诱导小鼠肝损伤模型的建立
2.2 ConA致肝损伤小鼠药理活性指标的测定方法
2.2.1 小鼠脾脏细胞增殖能力检测的实验方法
2.2.2 检测小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ和IL-6 能力的实验方法
2.2.3 检测肝脏匀浆上清液中总蛋白的含量
2.2.4 检测肝脏匀浆上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活力
2.2.5 检测肝脏匀浆上清液中过氧化氢酶(CAT)的活力
2.2.6 检测肝脏匀浆上清液中丙二醛(MDA)的活力
2.2.7 检测肝脏匀浆上清液中TNF-α的含量
2.2.8 检测肝脏匀浆上清液中IFN-γ的含量
2.2.9 检测肝脏匀浆上清液中IL-6 的含量
2.2.10 检测肝脏匀浆上清液中谷丙转氨酶(ALT)的活力
2.2.11 检测肝脏匀浆上清液中谷草转氨酶(AST)的活力
2.3 体外测定多糖对人肝细胞分泌HBsAg和HBeAg影响的方法
2.4 体外测定多糖对人L-O_2肝细胞增殖活性的实验
2.5 测定多糖对人L-O_2肝细胞抗ConA损伤影响的实验方法
2.6 体外测定多糖对人L-O_2肝细胞抗H_2O_2损伤影响的实验方法
2.7 体外测定多糖免疫活性方法
2.7.1 检测多糖对小鼠脾脏B和T淋巴细胞增殖能力影响
2.7.2 检测多糖对小鼠脾细胞分泌IFN-γ的影响
2.7.3 检测腹腔巨噬细胞分泌TNF-α影响
2.8 统计学方法
3.实验结果
3.1 猫爪草粗多糖对ConA诱导肝损伤小鼠影响的实验结果
3.1.1 对ConA造模小鼠存活率的影响
3.1.2 猫爪草粗多糖对ConA肝损伤小鼠脏器质量的影响
3.1.3 粗多糖对ConA诱导肝损伤小鼠肝组织病理变化的影响
3.1.4 对肝损伤小鼠脾细胞增殖以及IFN-γ和IL-6 分泌的影响
3.1.5 对肝损伤小鼠肝匀浆中SOD、MDA及CAT含量的影响
3.1.6 对肝损伤小鼠肝匀浆中IFN-γ、TNF-α、IL-6 含量的影响
3.1.7 对肝损伤小鼠肝匀浆中AST和ALT活力的影响
3.2 粗多糖对HepG2.2.15 肝细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响
3.3 猫爪草多糖对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.3.1 粗多糖对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.3.2 多糖组分对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.3.3 多糖亚组分对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.3.4 均一多糖对人L-O_2细胞的促增殖和抗ConA损伤的影响
3.4 猫爪草多糖对人L-O_2 细胞抗H_2O_2损伤的影响
3.4.1 粗多糖对人L-O_2 细胞的抗H_2O_2损伤的影响
3.4.2 多糖组分对人L-O_2细胞的抗H_2O_2损伤的影响
3.4.3 亚组分对人L-O_2 细胞的抗H_2O_2损伤的影响
3.4.4 均一多糖对人L-O_2细胞的抗H_2O_2损伤的影响
3.5 猫爪草粗多糖免疫活性的研究结果(体外)
3.5.1 对原代小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响
3.5.2 猫爪草粗多糖对脾细胞分泌IFN-γ的影响
3.5.3 猫爪草粗多糖对腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的影响
3.6 猫爪草多糖组分免疫活性的研究结果(体外)
3.6.1 猫爪草多糖组分对原代小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
3.6.2 猫爪草多糖组分对脾细胞分泌IFN-γ的影响
4.小结
第三章 猫爪草多糖成分的化学结构解析
1 材料
1.1 试剂
1.2 仪器
2 实验方法
2.1 红外光谱(IR)测定
2.2 核磁共振(NMR)图谱测定
3.实验结果
3.1 RTP-60-Ⅰ结构解析
3.1.1 红外光谱(IR)分析
3.1.2 核磁共振吸收光谱解析(NMR)
3.2 RTP-60-Ⅱ结构解析
3.2.1 红外光谱(IR)分析
3.2.2 核磁共振吸收光谱解析(NMR)
4. 小结
结论
致谢
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]猫爪草多糖研究进展[J]. 李锦,毛朋飞,刘红云,扶胜兰. 农技服务. 2017(24)
[2]猫爪草药理作用的研究情况[J]. 陈津慧. 内蒙古中医药. 2015(07)
[3]猫爪草提取物体外抗菌活性研究[J]. 卞晓霞,罗跃娥,王文洁,闫利华. 辽宁中医杂志. 2014(09)
[4]猫爪草的化学成分及药理作用研究进展[J]. 苗耀东,李小江,贾英杰. 中草药. 2014(11)
[5]中药猫爪草的研究进展[J]. 李瑞,尹春萍. 中国药师. 2014(03)
[6]猫爪草药理作用研究的新进展[J]. 胡瑛瑛. 当代医药论丛. 2014(02)
[7]猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌A549细胞活性研究[J]. 童晔玲,杨锋,戴关海,任泽明,王波波. 中华中医药学刊. 2013(10)
[8]野生与栽培猫爪草药材中总糖与黄酮含量比较[J]. 李保珍,王智玮,侯海若,刘雪芳. 贵阳医学院学报. 2011(05)
[9]mfn2基因在猫爪草皂苷、红三叶异黄酮治疗乳腺癌中的作用机制研究[J]. 孟祥虎,刘博,尹春萍,樊龙昌,臧光辉,汤雅馨,周婷婷. 中国药师. 2011(09)
[10]中药猫爪草化学成分及质量控制研究进展[J]. 张红伟,刘菊,赵群涛,王君明. 中医学报. 2011(08)
硕士论文
[1]中药猫爪草的化学成分分析研究[D]. 芮晟.南京工业大学 2003
本文编号：3465302
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