黄精皂苷的制备、抗癌活性及其机理
发布时间：2021-11-03 01:23
黄精是我国卫生部认定的药食同源资源,在天然药物和功能食品等领域具有广阔的应用前景。皂苷是黄精中的主要活性物质,由于结构多样,其抗菌、抗肿瘤的机制也各不相同。对这些机制进行研究,将为黄精资源的综合利用提供理论依据和技术支持。本论文以九华黄精为原料,制备了高纯度的薯蓣皂苷和甲基原薯蓣皂苷,并研究了其抑癌活性及相关分子机制,主要研究内容及结果如下:（1）黄精皂苷的分离纯化。使用单因素和响应面优化试验,确定了超声辅助提取黄精皂苷的最佳工艺条件:乙醇浓度78%、料液比1:20 g/mL、超声温度58°C、超声时间75 min,在此条件下的皂苷得率为2.72%;在此基础上,利用硅胶色谱柱、葡聚糖凝胶柱层析技术对提取物中的皂苷进行分离,得到纯度分别为98.05%和95.13%的薯蓣皂苷和甲基原薯蓣皂苷,并使用UPLC-TOF-MS/MS和NMR技术对其结构进行了鉴定。（2）薯蓣皂苷对人肝癌细胞HepG2的抑制及分子机制。细胞活性及周期分析表明,薯蓣皂苷对HepG2细胞的半抑制浓度为8.34μM,可将细胞周期阻滞在G2/M期;当处理浓度为9μM时,早期凋亡细胞比率可达34.0%。薯蓣皂苷通过调节CHK...
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
薯蓣皂苷元标准曲线
（3）超声温度对黄精皂苷提取得率的影响在料液比为 1:20 g/mL、乙醇浓度 80%、超声时间 50 min 的条件下，比较不同的超声温度（30、40、50、60、70 ℃）对黄精皂苷提取得率的影响，结果如图 2.2C 所示。结果表明，在 60 ℃之前，随着温度的升高，黄精皂苷的得率不断升高，当超声温度达到 60 ℃时，皂苷的提取得率达到最大值 1.73%。而温度高于 60 ℃时，得率开始呈现下降趋势，可能是温度过高导致皂苷的结构受到了一定程度的破坏。因此，本试验中选取的最佳超声温度为 60 ℃。（4）超声时间对黄精皂苷提取得率的影响在料液比为 1:20 g/mL、乙醇浓度 80%和超声温度 60 ℃条件下，比较不同的超声时间（40、50、60、70、80 min）对黄精皂苷得率的影响，结果如图 2.2D所示，随着超声时间的延长，黄精皂苷得率先逐步升高后略有降低，70 min 时，达到最高值。这是因为超声时间的增加可以使黄精粉末与乙醇溶液更充分地接触从而促进皂苷的溶出，但当处理时间过长时，分子量较大、不稳定的皂苷易发生分解，且伴随着其他醇溶物质的不断溶出，从而降低了黄精皂苷的提取得率。因此，试验选取 70 min 作为黄精皂苷的最佳超声时间。
的提取得率随乙醇浓度的升高先上升后平缓下降，并随超声时间的不断增加而呈现缓慢上升后逐步下降的趋势。超声时间越长，会有更多的物质溶出，但同时，长时间的超声影响可能会使皂苷的内部结构发生变化，其他物质的溶出也限制了皂苷得率的提高。如图 2.3D，料液比和超声时间也会影响黄精皂苷的提取得率。由于杂质的不断溶出，黄精皂苷的提取得率随液料比的增加呈现先上升后下降的趋势，超声时间延长时也呈现出相似的趋势。料液比和超声温度对黄精皂苷提取得率的影响如图 2.3E。当物料质量一定时，适度提高的乙醇溶液的体积和超声温度会使皂苷的提取得率上升，然而过多的乙醇溶液和过高的超声温度会对黄精皂苷的提取得率产生一定影响。黄精皂苷提取得率随超声温度升高及超声时间延长变化的趋势如图 2.3F 所示。适宜条件下的超声辅助可以有效提高提取的质量和效率，但过高的超声温度和过长的超声时间不能将提取得率无限提高，反而会导致目标提取物结构的破坏和提取得率的降低。如图所示，皂苷的提取得率在超声温度的升高时呈现先上升后下降的趋势，此外，当超声时间延长时，得率先上升后下降。
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞凋亡主要检测方法及其应用[J]. 何玉婷,杨雯,王改琴,张旭东. 医学综述. 2019(04)
[2]响应面法优化重楼药材中甾体皂苷的回流提取工艺研究[J]. 王仕宝,苏莹,李会宁,杨培君,吴鹏. 陕西农业科学. 2019(01)
[3]黄精多糖提取工艺及功能作用研究进展[J]. 贾宇涵,吴澎,郗良卿,李晓彤. 中国调味品. 2018(11)
[4]黄精皂苷提取条件的Design-Expert优化及其降血糖效果初步研究[J]. 庞红霞,崔婧,范桂强,魏昭,马娜. 中国药师. 2018(09)
[5]HPLC法测定不同产地穿山龙中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷[J]. 尚海花,郑雅楠,王淼,白润,张保灿,廖茂梁. 现代药物与临床. 2018(08)
[6]皂苷提取分离技术研究新进展[J]. 宋易霖,刘婷,邓海山,韩疏影,池玉梅. 广东化工. 2018(12)
[7]黄精属植物中黄酮类化合物及其药理活性研究进展[J]. 陶爱恩,张晓灿,杜泽飞,赵飞亚,夏从龙,段宝忠. 中草药. 2018(09)
[8]G2/M期P53/CDK1通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 张瑞涛,史惠蓉,任芳,曹媛,姬鹏程,王文文. 安徽医科大学学报. 2018(04)
[9]CDK4/6抑制剂抗肿瘤作用研究进展[J]. 朱颖. 现代肿瘤医学. 2018(04)
[10]紫山药薯蓣皂苷元酶法提取优化及抗氧化性[J]. 王彦平,杨庆莹,孙瑞琳,古洋,陈月英. 食品工业. 2017(07)
硕士论文
[1]沙利度胺联合奥沙利铂、5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞的VEGF、Caspase-3基因表达的研究[D]. 孙媛.承德医学院 2015
[2]硼替佐米联合5-氟尿嘧啶对Hela细胞的抑制作用及其机制的研究[D]. 王超萍.苏州大学 2014
[3]卷叶黄精化学成分及其生物活性的研究[D]. 李娟丽.西北农林科技大学 2007
本文编号：3472760
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
薯蓣皂苷元标准曲线
（3）超声温度对黄精皂苷提取得率的影响在料液比为 1:20 g/mL、乙醇浓度 80%、超声时间 50 min 的条件下，比较不同的超声温度（30、40、50、60、70 ℃）对黄精皂苷提取得率的影响，结果如图 2.2C 所示。结果表明，在 60 ℃之前，随着温度的升高，黄精皂苷的得率不断升高，当超声温度达到 60 ℃时，皂苷的提取得率达到最大值 1.73%。而温度高于 60 ℃时，得率开始呈现下降趋势，可能是温度过高导致皂苷的结构受到了一定程度的破坏。因此，本试验中选取的最佳超声温度为 60 ℃。（4）超声时间对黄精皂苷提取得率的影响在料液比为 1:20 g/mL、乙醇浓度 80%和超声温度 60 ℃条件下，比较不同的超声时间（40、50、60、70、80 min）对黄精皂苷得率的影响，结果如图 2.2D所示，随着超声时间的延长，黄精皂苷得率先逐步升高后略有降低，70 min 时，达到最高值。这是因为超声时间的增加可以使黄精粉末与乙醇溶液更充分地接触从而促进皂苷的溶出，但当处理时间过长时，分子量较大、不稳定的皂苷易发生分解，且伴随着其他醇溶物质的不断溶出，从而降低了黄精皂苷的提取得率。因此，试验选取 70 min 作为黄精皂苷的最佳超声时间。
的提取得率随乙醇浓度的升高先上升后平缓下降，并随超声时间的不断增加而呈现缓慢上升后逐步下降的趋势。超声时间越长，会有更多的物质溶出，但同时，长时间的超声影响可能会使皂苷的内部结构发生变化，其他物质的溶出也限制了皂苷得率的提高。如图 2.3D，料液比和超声时间也会影响黄精皂苷的提取得率。由于杂质的不断溶出，黄精皂苷的提取得率随液料比的增加呈现先上升后下降的趋势，超声时间延长时也呈现出相似的趋势。料液比和超声温度对黄精皂苷提取得率的影响如图 2.3E。当物料质量一定时，适度提高的乙醇溶液的体积和超声温度会使皂苷的提取得率上升，然而过多的乙醇溶液和过高的超声温度会对黄精皂苷的提取得率产生一定影响。黄精皂苷提取得率随超声温度升高及超声时间延长变化的趋势如图 2.3F 所示。适宜条件下的超声辅助可以有效提高提取的质量和效率，但过高的超声温度和过长的超声时间不能将提取得率无限提高，反而会导致目标提取物结构的破坏和提取得率的降低。如图所示，皂苷的提取得率在超声温度的升高时呈现先上升后下降的趋势，此外，当超声时间延长时，得率先上升后下降。
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞凋亡主要检测方法及其应用[J]. 何玉婷,杨雯,王改琴,张旭东. 医学综述. 2019(04)
[2]响应面法优化重楼药材中甾体皂苷的回流提取工艺研究[J]. 王仕宝,苏莹,李会宁,杨培君,吴鹏. 陕西农业科学. 2019(01)
[3]黄精多糖提取工艺及功能作用研究进展[J]. 贾宇涵,吴澎,郗良卿,李晓彤. 中国调味品. 2018(11)
[4]黄精皂苷提取条件的Design-Expert优化及其降血糖效果初步研究[J]. 庞红霞,崔婧,范桂强,魏昭,马娜. 中国药师. 2018(09)
[5]HPLC法测定不同产地穿山龙中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷[J]. 尚海花,郑雅楠,王淼,白润,张保灿,廖茂梁. 现代药物与临床. 2018(08)
[6]皂苷提取分离技术研究新进展[J]. 宋易霖,刘婷,邓海山,韩疏影,池玉梅. 广东化工. 2018(12)
[7]黄精属植物中黄酮类化合物及其药理活性研究进展[J]. 陶爱恩,张晓灿,杜泽飞,赵飞亚,夏从龙,段宝忠. 中草药. 2018(09)
[8]G2/M期P53/CDK1通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 张瑞涛,史惠蓉,任芳,曹媛,姬鹏程,王文文. 安徽医科大学学报. 2018(04)
[9]CDK4/6抑制剂抗肿瘤作用研究进展[J]. 朱颖. 现代肿瘤医学. 2018(04)
[10]紫山药薯蓣皂苷元酶法提取优化及抗氧化性[J]. 王彦平,杨庆莹,孙瑞琳,古洋,陈月英. 食品工业. 2017(07)
硕士论文
[1]沙利度胺联合奥沙利铂、5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞的VEGF、Caspase-3基因表达的研究[D]. 孙媛.承德医学院 2015
[2]硼替佐米联合5-氟尿嘧啶对Hela细胞的抑制作用及其机制的研究[D]. 王超萍.苏州大学 2014
[3]卷叶黄精化学成分及其生物活性的研究[D]. 李娟丽.西北农林科技大学 2007
本文编号：3472760
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