吴茱萸次碱抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌功能改变及机制研究
发布时间：2021-11-18 16:53
背景:血管紧张素II（Angiotensin II,AngII）诱导的血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）异常增殖、迁移和表型转化,是高血压、动脉粥样硬化等血管重构性疾病发生发展的重要病理性基础。最近有文献报道,AngII诱导的VSMC增殖和迁移改变与激活NF-κB途径上调缝隙连接蛋白43（Connexin43,Cx43）表达有关。中药有效成分吴茱萸次碱（Rutaecarpine,Rut）作为一种降压药物被发现有抑制血管重构效应。本课题组前期研究发现,Rut可抑制Ox-LDL诱导的VSMC增殖,其机制与激活辣椒素受体（Transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）抑制Cx43的表达有关。近来,AngII诱导的VSMC衰老在各种血管重构性疾病中的作用也引起广泛关注,其机制与下调长寿蛋白SIRT1表达有关。我们前期还发现,Rut可抑制高糖诱导的内皮细胞衰老,其机制与激活TRPV1上调SIRT1的表达有关。目的:探究吴茱萸次碱对AngII诱导的VSMC增殖、迁移和表型改变的影响及其机制是否涉及激活T...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料与试剂
2.1 主要的材料与试剂
2.2 主要仪器和设备
2.3 主要试剂的配制
第3章 实验方法
3.1 原代平滑肌细胞培养
3.1.1 大鼠原代胸主动脉血管平滑肌细胞获取及培养：组织块贴壁法
3.1.2 细胞复苏
3.1.3 细胞传代
3.2 实验分组与处理方法
3.2.1 实验分组与内容
3.2.2 原代细胞的鉴定
3.2.3 CCK-8检测细胞活力
3.2.4 EdU试剂盒检测VSMC内DNA复制活性
3.2.5 流式细胞术测定细胞周期变化
3.2.6 划痕愈合实验测定细胞迁移
3.2.7 Transwell小室(孔径8μm)迁移实验
3.2.8 SA-β-Gal染色
3.2.9 细胞内活性氧的检测
3.2.10 Western blot 检测平滑肌细胞中 α-SMA、Calponin、Cx43、Cyclin D1SIRT1、P53、P21 及 P-AMPK 蛋白表达水平
3.2.11 Westernblot结合免疫细胞化学检测P65核转位
3.2.12 数据处理
第4章 实验结果
第一部分 TRPV1介导Rut抗VSMC增殖、迁移和表型转化：抑制NF-κB/Cx43途径
4.1 培养原代VSMC及鉴定
4.2 Rut对AngII诱导的VSMC增殖的影响
4.3 Rut对AngII诱导的VSMC周期分布的影响
4.4 Rut对AngII诱导的VSMC迁移的影响
4.5 Rut对AngII诱导的VSMC表型的影响
4.6 Rut抑制AngII诱导的Cx43表达上调
4.7 Rut抑制AngII诱导的NF-κBP65转位
第二部分 TRPV1介导Rut的抗VSMC衰老：激活AMPK/SIRT1途径
4.8 Rut对AngII诱导的VSMC衰老的影响
4.9 Rut抑制AngII诱导的VSMC衰老的机制：上调SIRT1表达而抑制P53/P21通路
4.10 Rut通过AMPK通路上调SIRT1表达
第5章 讨论
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 下一步研究方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]p38-p53-p21信号通路参与调控血管紧张素-Ⅱ诱导的人血管平滑肌细胞衰老[J]. 廉亚茹,刘新华,韩苗,潘礼龙,胡金锋,魏刚,倪挺. 复旦学报(自然科学版). 2015(06)
[2]Rutaecarpine Inhibits Angiotensin Ⅱ-Induced Proliferation in Rat Vascular Smooth Muscle Cells[J]. 李艳菊,张锋,龚其海,吴芹,余丽梅,孙安盛. Chinese Journal of Integrative Medicine. 2014(09)
[3]Losartan reduced connexin43 expression in left ventricular myocardium of spontaneously hypertensive rats[J]. Li-li ZHAO,Hong-juan CHEN,Jun-zhu CHEN,Min YU,Yun-lan NI,Wei-fang ZHANG(Department of Cardiology,the First Affiliated Hospital,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310003,China). Journal of Zhejiang University（Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal）. 2008(06)
本文编号：3503257
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料与试剂
2.1 主要的材料与试剂
2.2 主要仪器和设备
2.3 主要试剂的配制
第3章 实验方法
3.1 原代平滑肌细胞培养
3.1.1 大鼠原代胸主动脉血管平滑肌细胞获取及培养：组织块贴壁法
3.1.2 细胞复苏
3.1.3 细胞传代
3.2 实验分组与处理方法
3.2.1 实验分组与内容
3.2.2 原代细胞的鉴定
3.2.3 CCK-8检测细胞活力
3.2.4 EdU试剂盒检测VSMC内DNA复制活性
3.2.5 流式细胞术测定细胞周期变化
3.2.6 划痕愈合实验测定细胞迁移
3.2.7 Transwell小室(孔径8μm)迁移实验
3.2.8 SA-β-Gal染色
3.2.9 细胞内活性氧的检测
3.2.10 Western blot 检测平滑肌细胞中 α-SMA、Calponin、Cx43、Cyclin D1SIRT1、P53、P21 及 P-AMPK 蛋白表达水平
3.2.11 Westernblot结合免疫细胞化学检测P65核转位
3.2.12 数据处理
第4章 实验结果
第一部分 TRPV1介导Rut抗VSMC增殖、迁移和表型转化：抑制NF-κB/Cx43途径
4.1 培养原代VSMC及鉴定
4.2 Rut对AngII诱导的VSMC增殖的影响
4.3 Rut对AngII诱导的VSMC周期分布的影响
4.4 Rut对AngII诱导的VSMC迁移的影响
4.5 Rut对AngII诱导的VSMC表型的影响
4.6 Rut抑制AngII诱导的Cx43表达上调
4.7 Rut抑制AngII诱导的NF-κBP65转位
第二部分 TRPV1介导Rut的抗VSMC衰老：激活AMPK/SIRT1途径
4.8 Rut对AngII诱导的VSMC衰老的影响
4.9 Rut抑制AngII诱导的VSMC衰老的机制：上调SIRT1表达而抑制P53/P21通路
4.10 Rut通过AMPK通路上调SIRT1表达
第5章 讨论
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 下一步研究方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]p38-p53-p21信号通路参与调控血管紧张素-Ⅱ诱导的人血管平滑肌细胞衰老[J]. 廉亚茹,刘新华,韩苗,潘礼龙,胡金锋,魏刚,倪挺. 复旦学报(自然科学版). 2015(06)
[2]Rutaecarpine Inhibits Angiotensin Ⅱ-Induced Proliferation in Rat Vascular Smooth Muscle Cells[J]. 李艳菊,张锋,龚其海,吴芹,余丽梅,孙安盛. Chinese Journal of Integrative Medicine. 2014(09)
[3]Losartan reduced connexin43 expression in left ventricular myocardium of spontaneously hypertensive rats[J]. Li-li ZHAO,Hong-juan CHEN,Jun-zhu CHEN,Min YU,Yun-lan NI,Wei-fang ZHANG(Department of Cardiology,the First Affiliated Hospital,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310003,China). Journal of Zhejiang University（Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal）. 2008(06)
本文编号：3503257
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