麦冬皂苷D诱导CYP2J3增强SERCA2a/PLB相互作用的分子机制

发布时间：2021-12-02 16:39

　　目的:中药麦冬是麦冬Ophiopogon japonicus（L.f.）的干燥块根,是中医临床常用中药,以其为主要成分的参麦注射液在临床主要用于治疗心血管疾病。麦冬皂苷D（Ophiopogonin D,OPD）是麦冬以及参麦注射液中的重要有效成分,具有心血管保护作用。CYP2J在心血管系统方面具有重要作用,CYP2J3转基因大鼠的心肌细胞活力明显增强,SERCA2a(Ca²⁺-ATPase2a)作为多种心力衰竭的关键分子,已被证实心衰患者的SERCA2a活性及表达降低。课题组前期工作发现麦冬皂苷D可通过CYP2J/EETs系统促进SERCA2a的表达。本研究以麦冬中重要单体成分麦冬皂苷D（Ophiopogonin D,OPD）为研究对象,对其心肌保护作用的药理作用及可能的分子机制进行研究。结果显示OPD可通过诱导CYP2J3,增强SERCA2a与PLB之间的相互作用,增强内质网钙调蛋白SERCA2a活性,增加内质网钙离子水平,改善大鼠心肌细胞心衰症状。本研究从OPD诱导CYP2J为基础,首次证实OPD通过诱导CYP2J增强SERCA2a与PLB（Phosphola... 

【文章来源】：广东药科大学广东省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

麦冬皂苷D对H9c2大鼠心肌细胞活力的影响(x±s，n=4)，与对照组相比，P＜

苷 D 对 H9c2 大鼠心肌细胞活力的影响( x ±s，n=4)，与对0.05;**P＜0.01;***P＜0.001t of OPD on H9c2 cells( x ±s,n=4).*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜with the CON group皂苷 D 诱导 H9c2 细胞中 CYP2J3 的表达0.5μM、1μM 的 OPD 作用大鼠心肌细胞 24h 后，OPRNA 表达（P＜0.001）。采用 Western blot 检测 OPD 对结果如图 1-2（a）所示，OPD 诱导 CYP2J3 蛋白表达衰模型，本实验采用采用 1μM ISO 诱导心力衰竭模型 共同处理细胞 24h，观察病理条件下 CYP2J3 的 mRN结果如图 1-2（b）所示，ISO 模拟心力衰竭细胞模型胞内 CYP2J3 表达降低（P＜0.001），OPD 能逆转细胞降低（P＜0.001）。a

1-2（b） 麦冬皂苷 D 对 CYP2J3 表达的影响( x ±s，n=4)，与对照组相比，***P＜0.001；与 ISO 处理组相比，##P＜0.01;###P＜0.001Fig.1-2(b) Effect of OPD on the expression of CYP2J3 in H9c2 cells( x ±s,n=4).***P＜0.001compared with the control group .##P＜0.01;###P＜0.001 compared with the ISO group..3.3 CYP2J3 敲低与过表达后，麦冬皂苷 D 对 CYP2J3 表达的影响前部分实验已证明麦冬皂苷 D 可明显诱导 CYP2J3 的表达并能逆转 ISO 所致 CYP2J 下调，本部分实验观察 CYP2J3 敲低与过表达后，麦冬皂苷 D 对 CYP2J3达的影响。检测 siRNA 转染后细胞内 CYP2J3 的蛋白表达，如图 1-3（a）所示，阴性对照组相比，siRNA-CYP2J3 组的蛋白表达水平明显降低(P<0.01)：成功构 CYP2J3 低表达细胞模型，为后续实验进行打下基础。转染 siRNA 后 12h，1μMPD 以及 1μM OPD+1μM ISO 作用细胞 24h，检测 CYP2J3 表达水平，实验结果示：与对照组相比，OPD 也能显著诱导 CYP2J3 表达(P<0.01)，虽然 CYP2J3 整表达水平低于 CYP2J3 正常表达细胞。在心力衰竭细胞模型中，与各自对照组比，在 CYP2J3 正常表达与低表达条件下均能显著增加 CYP2J3 表达（P<0.05），图 1-3（b）。


本文编号：3528797