黄芪甲苷通过抑制内质网应激阻止mPTP开放保护PC12细胞
发布时间：2021-12-10 13:17
目的探究黄芪甲苷能否通过抑制内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）发挥神经保护作用,并探讨其可能的信号转导机制。方法（1）高分化的PC12细胞（大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）常规培养,为了探究不同浓度的ERS诱导剂2-DG对ERS以及线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,?Ψm）产生的不同影响,将细胞随机分成对照组和多种不同浓度（25、50、100、150、200μM）2-DG组,用Western Blot法检测ERS相关蛋白GRP 78、94表达情况,同时使用激光共聚焦显微镜检测TMRE红色荧光强度的改变来判断线粒体通透性转移孔（mitochondrial permeability transition pore,m PTP）开放的情况,以确定2-DG最适浓度。（2）将细胞随机分成对照组和不同浓度（25、50、75、100μM）黄芪甲苷组,通过Western Blot法检测黄芪甲苷对糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）磷酸化的表达以确定黄芪甲苷最适浓度...
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
蛋白定量标准曲线
图 2 2-DG 对内质网应激蛋白 GRP 78 、GRP 94 表达的影响Fig.2 Effect of 2-DG on the expression of endoplasmic reticulum stress protein GRP 78 and GRP 941.2.2 2-DG 能够使线粒体膜电位降低(mPTP 开放)并确定最适浓度为了探究 2-DG 能否引起 mPTP 开放，以及它的最佳作用浓度，实验中我们应用激光共聚焦显微镜技术，检测各组细胞内线粒体膜电位的变化，结果显示，与对照组相比，不同浓度 2-DG 组均可以减少线粒体 TMRE 红色荧光强度，差异具有统计学意义(P<0.05)。2-DG 浓度为 50 μmol/L 时，TMRE 红色荧光强度最弱，线粒体膜电位降低最明显即 mPTP 开放程度最大，说明 2-DG 浓度为 50 μmol/L 时最易引起 ERS，见表 3、图 3，图 3 中标尺为 20 μm。因此后续实验均采用此浓度。表 3 2-DG 对线粒体膜电位(mPTP 开放)的影响 (Mean±SE)Table 3 Effect of 2-DG on mitochondrial membrane potential (mPTP opening) (Mean±SE)Group(μmol/L) n TMRE Fluorescence F P0 6 10 0.0±1.38 －
图 3 2-DG 对线粒体膜电位(mPTP 开放)的影响(x1000)Fig. 3 Effect of 2-DG on mitochondrial membrane potential (mPTP opening) (x10001.2.3 黄芪甲苷能使 GSK-3β 磷酸化增加并确定最适浓度为了探究黄芪甲苷的最佳作用浓度，实验中我们采用 Western blot 法检测不同浓度黄芪甲苷对 p-GSK-3β 表达的影响，结果显示，与对照组比，不同浓度黄芪甲苷组 p-GSK-3β 表达不同，其中 50 μmol/L 黄芪甲苷组 p-GSK-3β 蛋白表达增多最明显，差异具有统计学意义(P<0.05)，说明黄芪甲苷能使 GSK-3β 磷酸化增加并确定最适浓度为 50 μmol/L，见表 4、图 4。因此后续实验中黄芪甲苷的浓度使用为50 μmol/L。表 4 黄芪甲苷对 GSK-3β 磷酸化表达的影响 (Mean±SE)Table 4 Effects of Astragaloside on Phosphorylation of GSK-3β (Mean±SE)GSK-3β
【参考文献】：
期刊论文
[1]仙鹤草不同方式提取产物抗脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究（英文）[J]. 朱慧渊,别玉龙,王江,高静,杨冰月,万海同. Chinese Medical Sciences Journal. 2017(04)
[2]黄芪甲苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响[J]. 李媛,吴增,靳晓飞,周晓红,高维娟. 中国药理学通报. 2018(01)
[3]内质网应激PERK通路在脑泰方提取物保护局灶性脑缺血大鼠海马神经元中的作用[J]. 石咏梅,马英民,廖君,易亚乔,余清平,黄娟,葛金文. 中国老年学杂志. 2017(22)
[4]Garcinia xanthochymus extract protects PC12 cells from H2O2-induced apoptosis through modulation of PI3K/AKT and NRF2/HO-1 pathways[J]. XU Jing,GAN Sheng,LI Jun,WAND De-Bing,CHEN Yu,HU Xin,YANG Guang-Zhong. Chinese Journal of Natural Medicines. 2017(11)
[5]黄芪甲苷联合羟基红花黄色素A对小鼠心肌梗死的保护作用[J]. 苏宁,卢芬萍,朱明明,征宗梅,申毓军,刘亭宇,施洪飞. 中国实验方剂学杂志. 2018(02)
[6]当药醇苷对β淀粉样蛋白诱导神经细胞损伤模型GSK-3β及Akt表达的影响[J]. 赵志英,胡志强,高洋洋. 中国老年学杂志. 2017(20)
[7]The role of glycogen synthase kinase 3 beta in brain injury induced by myocardial ischemia/reperfusion injury in a rat model of diabetes mellitus[J]. Bo Zhao,Wen-wei Gao,Ya-jing Liu,Meng Jiang,Lian Liu,Quan Yuan,Jia-bao Hou,Zhong-yuan Xia. Neural Regeneration Research. 2017(10)
[8]黄芪甲苷对甲型H1N1流感病毒和呼吸道合胞病毒的抑制作用[J]. 梅周芳,陈家君,施天昀,都勇,何炜,陈鸿军,揭志军. 中国动物传染病学报. 2017(05)
[9]黄芪甲苷和三七总皂苷配伍抗大鼠脑缺血再灌注损伤及其药动学的研究[J]. 李静娴,杨筱倩,唐标,刘晓丹,唐映红,邓常清,黄小平. 中国中药杂志. 2017(19)
[10]黄芪甲苷通过激活自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡[J]. 靳晓飞,周晓红,武密山,张颖,赵艳萌,李媛,吴增,高维娟. 北京中医药大学学报. 2017(05)
硕士论文
[1]黄芪甲苷对慢性心衰大鼠的心脏保护作用及机制研究[D]. 唐斌.山东大学 2017
本文编号：3532690
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
蛋白定量标准曲线
图 2 2-DG 对内质网应激蛋白 GRP 78 、GRP 94 表达的影响Fig.2 Effect of 2-DG on the expression of endoplasmic reticulum stress protein GRP 78 and GRP 941.2.2 2-DG 能够使线粒体膜电位降低(mPTP 开放)并确定最适浓度为了探究 2-DG 能否引起 mPTP 开放，以及它的最佳作用浓度，实验中我们应用激光共聚焦显微镜技术，检测各组细胞内线粒体膜电位的变化，结果显示，与对照组相比，不同浓度 2-DG 组均可以减少线粒体 TMRE 红色荧光强度，差异具有统计学意义(P<0.05)。2-DG 浓度为 50 μmol/L 时，TMRE 红色荧光强度最弱，线粒体膜电位降低最明显即 mPTP 开放程度最大，说明 2-DG 浓度为 50 μmol/L 时最易引起 ERS，见表 3、图 3，图 3 中标尺为 20 μm。因此后续实验均采用此浓度。表 3 2-DG 对线粒体膜电位(mPTP 开放)的影响 (Mean±SE)Table 3 Effect of 2-DG on mitochondrial membrane potential (mPTP opening) (Mean±SE)Group(μmol/L) n TMRE Fluorescence F P0 6 10 0.0±1.38 －
图 3 2-DG 对线粒体膜电位(mPTP 开放)的影响(x1000)Fig. 3 Effect of 2-DG on mitochondrial membrane potential (mPTP opening) (x10001.2.3 黄芪甲苷能使 GSK-3β 磷酸化增加并确定最适浓度为了探究黄芪甲苷的最佳作用浓度，实验中我们采用 Western blot 法检测不同浓度黄芪甲苷对 p-GSK-3β 表达的影响，结果显示，与对照组比，不同浓度黄芪甲苷组 p-GSK-3β 表达不同，其中 50 μmol/L 黄芪甲苷组 p-GSK-3β 蛋白表达增多最明显，差异具有统计学意义(P<0.05)，说明黄芪甲苷能使 GSK-3β 磷酸化增加并确定最适浓度为 50 μmol/L，见表 4、图 4。因此后续实验中黄芪甲苷的浓度使用为50 μmol/L。表 4 黄芪甲苷对 GSK-3β 磷酸化表达的影响 (Mean±SE)Table 4 Effects of Astragaloside on Phosphorylation of GSK-3β (Mean±SE)GSK-3β
【参考文献】：
期刊论文
[1]仙鹤草不同方式提取产物抗脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究（英文）[J]. 朱慧渊,别玉龙,王江,高静,杨冰月,万海同. Chinese Medical Sciences Journal. 2017(04)
[2]黄芪甲苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响[J]. 李媛,吴增,靳晓飞,周晓红,高维娟. 中国药理学通报. 2018(01)
[3]内质网应激PERK通路在脑泰方提取物保护局灶性脑缺血大鼠海马神经元中的作用[J]. 石咏梅,马英民,廖君,易亚乔,余清平,黄娟,葛金文. 中国老年学杂志. 2017(22)
[4]Garcinia xanthochymus extract protects PC12 cells from H2O2-induced apoptosis through modulation of PI3K/AKT and NRF2/HO-1 pathways[J]. XU Jing,GAN Sheng,LI Jun,WAND De-Bing,CHEN Yu,HU Xin,YANG Guang-Zhong. Chinese Journal of Natural Medicines. 2017(11)
[5]黄芪甲苷联合羟基红花黄色素A对小鼠心肌梗死的保护作用[J]. 苏宁,卢芬萍,朱明明,征宗梅,申毓军,刘亭宇,施洪飞. 中国实验方剂学杂志. 2018(02)
[6]当药醇苷对β淀粉样蛋白诱导神经细胞损伤模型GSK-3β及Akt表达的影响[J]. 赵志英,胡志强,高洋洋. 中国老年学杂志. 2017(20)
[7]The role of glycogen synthase kinase 3 beta in brain injury induced by myocardial ischemia/reperfusion injury in a rat model of diabetes mellitus[J]. Bo Zhao,Wen-wei Gao,Ya-jing Liu,Meng Jiang,Lian Liu,Quan Yuan,Jia-bao Hou,Zhong-yuan Xia. Neural Regeneration Research. 2017(10)
[8]黄芪甲苷对甲型H1N1流感病毒和呼吸道合胞病毒的抑制作用[J]. 梅周芳,陈家君,施天昀,都勇,何炜,陈鸿军,揭志军. 中国动物传染病学报. 2017(05)
[9]黄芪甲苷和三七总皂苷配伍抗大鼠脑缺血再灌注损伤及其药动学的研究[J]. 李静娴,杨筱倩,唐标,刘晓丹,唐映红,邓常清,黄小平. 中国中药杂志. 2017(19)
[10]黄芪甲苷通过激活自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡[J]. 靳晓飞,周晓红,武密山,张颖,赵艳萌,李媛,吴增,高维娟. 北京中医药大学学报. 2017(05)
硕士论文
[1]黄芪甲苷对慢性心衰大鼠的心脏保护作用及机制研究[D]. 唐斌.山东大学 2017
本文编号：3532690
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