薯蓣皂苷元衍生物和片叶苔素D衍生物抗肿瘤活性及作用机制的研究

发布时间：2022-02-19 15:42

　　肺癌是世界上最常见的癌症,为一种异质性、复杂性和挑战性的疾病,而且它的新发病例逐年上升。天然产物作为新药研发的重要来源之一,这就促使我们在天然产物中寻找效果更好或有新靶点的抗肿瘤化合物。薯蓣皂苷元是从薯蓣属植物的根茎中提取出来的一种植物甾体皂苷,是合成甾体类激素的重要原料。现代药理学研究证明,薯蓣皂苷元具有抗肿瘤、抗炎、降血脂和免疫调节等功能,并且毒副作用较低,应用广泛。本课题组致力于薯蓣皂苷元的结构修饰和活性筛选,发现经过结构修饰的薯蓣皂苷元衍生物具有很强的抗肿瘤活性。在本论文中,我们研究了化合物7在人非小细胞肺癌A549细胞中诱导细胞死亡的方式和机制。MTT法对一系列薯蓣皂苷元衍生物进行抗肿瘤活性筛选,筛选出最有潜力的化合物7进行后续机制研究。观察药物对细胞形态影响时,发现化合物可以诱导肿瘤细胞产生明显的空泡,空泡不断增多,相互融合,最终细胞膜破裂,细胞死亡。用PI染色流式细胞仪检测发现,化合物7导致A549细胞阻滞在G0/G1期。Annexin V/PI双染并用流式细胞仪测定细胞的凋亡率,Western blot测定PARP蛋白,广谱的凋亡抑制剂（Z-VAD-FMK）测定细胞死亡... 

【文章来源】：山东大学山东省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
缩略语词汇表
第一章 前言
    1.1 巨泡性死亡
    1.2 旁凋亡
    1.3 自噬
    1.4 胀亡
    1.5 四种出泡性死亡机制的异同
第二章 薯蓣皂苷元衍生物诱导肺癌细胞出泡性死亡的机制研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 化合物来源
        2.2.2 细胞株来源及实验动物
        2.2.3 试剂
        2.2.4 主要仪器
        2.2.5 常用试剂配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞复苏、传代和冻存
        2.3.2 MTT法检测化合物的细胞毒性
        2.3.3 流式细胞仪检测细胞周期
        2.3.4 Western blotting
        2.3.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
        2.3.6 免疫荧光
        2.3.7 体内移植瘤抑制实验
    2.4 结果与分析
        2.4.1 抗肿瘤活性筛选
        2.4.2 化合物7诱导多株肿瘤细胞产生空泡化现象
        2.4.3 化合物7诱导非凋亡性细胞死亡
        2.4.4 化合物7诱导细胞周期阻滞
        2.4.5 化合物7诱导非旁凋亡性细胞死亡
        2.4.6 化合物7诱导非自噬性细胞死亡
        2.4.7 化合物7诱导巨泡性死亡
        2.4.8 化合物7体内抗肿瘤活性
    2.5 讨论
第三章 片叶苔素D衍生物的抗肿瘤活性筛选和机制研究
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 化合物来源
        3.2.2 细胞株来源
        3.2.3 试剂
        3.2.4 仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 MTT法检测化合物的细胞毒性
        3.3.2 DAPI染色
        3.3.3 流式细胞仪检测细胞凋亡
        3.3.4 溶酶体荧光探针染色和吖啶橙染色
        3.3.5 xCELLigence系统实时监测
    3.4 实验结果
        3.4.1 抗肿瘤活性筛选
        3.4.2 片叶苔素D衍生物诱导溶酶体膜渗透(LMP)
        3.4.3 片叶苔素D衍生物诱导A549细胞凋亡和坏死
    3.5 讨论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：3633171