理冲生髓饮有效组分调控卵巢癌侵袭转移及其微环境因子的实验研究

发布时间：2022-02-22 10:21

　　第一部分目的:本实验观察理冲生髓饮（LCSSY）有效组分对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中微环境相关因子的改变,探讨LCSSY有效组分对卵巢癌侵袭转移的抑制作用及相关分子机制,探索LCSSY对卵巢癌多信号靶点的作用机制。方法:建立Balb/C裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、贝伐单抗组、LCSSY有效组分低剂量组、LCSSY有效组分中剂量组、LCSSY有效组分高剂量组。观察药物作用后裸鼠的肿瘤生长情况,各组给药干预18天,其中每隔两天测量瘤体体积,绘制生长趋势,于最后一次给药后处死裸鼠,将瘤体称重,采用RT-PCR检测瘤体中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的mRNA表达情况;免疫组化法检测瘤体中人毛细血管内皮细胞（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP9）、IL-1、低氧诱导因子-1（HIF-1）表达;WesrernBlot法检测转化生长因子-β相关激酶（Tak1）、去磷酸化转化生长因子-β相关激酶（p-Tak1）、核因子κB抑制蛋白激酶（IKKα）、去磷酸化核因子κB抑制蛋白激酶（p-IKKα）、核因子κB抑制蛋白（IKBα）、MMP9、TNF-α、I... 

【文章来源】：黑龙江中医药大学黑龙江省

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献综述
    一、西医学对卵巢癌的研究进展
        1. 卵巢癌的病因和流行病学研究
        2. 卵巢癌的西医治疗
        3. 卵巢癌的复发和转移的相关因素
    二、中医学对卵巢癌的研究进展及对血管生成的研究
        1. 中医学对卵巢癌概念及病因病机的认识
        2. 中医学对卵巢癌的现代医学治疗
    三、 卵巢癌微环境的研究
        1. 肿瘤微环境学说的提出
        2. 中医药在卵巢癌微环境的研究进展
        3. 卵巢癌侵袭转移微环境的相关因素分析
    四、理冲生髓饮在治疗卵巢癌中的研究进展
实验研究
    实验一 理冲生髓饮有效组分对卵巢癌侵袭转移微环境的影响
        1. 实验材料
            1.1 药物与试剂
            1.2 仪器与设备
            1.3 实验药物
            1.4 实验动物
        2. 实验方法
            2.1 构建卵巢癌SKOV3荷瘤鼠模型
            2.2 给药方法及取材
            2.3 石蜡切片肿瘤组织苏木精-伊红(HE)染色
            2.4免疫组化法检测瘤体中7￡6「、1?1
9、丨1_-1、忖1「-1蛋白的表达
            2.5 RT-PCR检测瘤体中TNF-a、IL-ip的mRNA表达
            2.6 Wesrern Blot 法检测 Takl、p-Takl、IKKa、p-IKKct、IKBa、MMP9、TNFa、IL1P的蛋白表达
        3. 统计分析
        实验结果
            1 裸鼠皮下移植瘤模型成功率分析
            2 理冲生髓饮有效组分对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用
            3 卵巢癌细胞移植瘤的病理学特征
            4 免疫组化法检测瘤体中VEGF、MMP9、IL-1、HIF-1蛋白的表达
            5 RT-PCR检测TNF-α、IL-1β基因的mRNA的表达
            6. 理冲生髓饮有效组分对裸鼠皮下移植瘤的Tak1、p-tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα、MMP9、TNFα、IL1β的蛋白影响
    实验二 理冲生髓饮有效组分药物血清对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响
        1. 实验材料
            1.1 药物与试剂
            1.2 仪器与设备
            1.3 实验细胞
            1.4 实验动物
        2. 实验方法
            2.1 含药血清的制备
            2.2 SKOV-3细胞培养
            2.3 理冲生髓饮有效组分药物血清观察鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的情况
            2.4 MTT法检测理冲生髓饮有效组分含药血清对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用
            2.5 划痕实验(迁移实验)
            2.6 Transwell细胞侵袭、转移试验
            2.7 ELISA法检测人卵巢癌细胞上清液中VEGF、MMP-9、IL-6、IL-1、TNF-α的浓度
        3. 统计分析
        实验结果
            1 卵巢癌细胞SKOV3的培养
            2 理冲生髓饮有效组分药物血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
            3 MTT法检测理冲生髓饮有效组分含药血清对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用
            4 理冲生髓饮有效组分对卵巢癌细胞SKOV3的迁移和侵袭作用
            5 Elisa法细胞上清液中VEGF、MMP-9、IL-6、IL-1、TNF-α的浓度
讨论
    一、卵巢癌微环境相关因子和侵袭转移的关系
    二、理冲生髓饮有效组分对卵巢癌侵袭转移微环境相关因子的作用
    三、理冲生髓饮有效组分对卵巢癌转移能力的影响
    四、理冲生髓饮有效组分的中医理论基础和实验研究依据
    五、不足和展望
结论
致谢
参考文献
附录
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]理冲生髓饮有效组分对卵巢癌组织的相关基因表达与血管生成影响[J]. 郭滢,张艳,韩凤娟.  中医药学报. 2018(01)
[2]铂类耐药复发转移性卵巢癌贝伐单抗联合白蛋白结合型紫杉醇治疗临床观察[J]. 张孟伟,秦亚光,王亚秋,李艳华,马会芳,卢红.  中华肿瘤防治杂志. 2016(05)
[3]益气活血解毒方加减治疗卵巢癌紫杉醇化疗后外周神经毒性临床观察[J]. 马丹,郑巧,闫会苓,卢雯平.  天津中医药大学学报. 2014(05)
[4]卵巢子宫内膜异位症恶变与卵巢癌的相关性研究及预后分析[J]. 吴雨珂,廖光东,张竹,杨帆,赵倩颖,何艳梅,陈悦,王平,刘辉,王红静,郄明蓉.  实用妇产科杂志. 2014(09)
[5]莪术-三棱药对配伍挥发油成分GC-MS分析[J]. 廖华军.  辽宁中医药大学学报. 2014(08)
[6]卵巢癌起源及发病机制研究的最新进展[J]. 徐燕宁,刘易欣.  解剖科学进展. 2014(03)
[7]晚期卵巢癌中医证型分布规律研究[J]. 夏恺,车焕丽,卢雯平.  新中医. 2013(04)
[8]益气活血解毒中药联合树突状细胞疫苗对荷瘤小鼠免疫抑制的调控[J]. 卢雯平,李向英,李晓,范秀华.  中国中医药信息杂志. 2013(03)
[9]水蛭抑制肿瘤血管生成的作用及其机制[J]. 李小菊,卢宏达,陈卫群,雷章,胡杨,孔庆志.  肿瘤防治研究. 2013(01)
[10]增免抑瘤方联合顺铂对铂类耐药卵巢癌抑瘤率影响的实验研究[J]. 齐聪,张勤华,李久现,胡欣欣.  中国中西医结合杂志. 2012(06)

博士论文
[1]理冲生髓饮有效组分对卵巢癌血管生成影响及JAK2/STAT3信号通路调控的机制研究[D]. 张艳.黑龙江中医药大学 2016

硕士论文
[1]理冲生髓饮对卵巢癌术后化疗患者减毒作用的疗效分析[D]. 夏霁.黑龙江中医药大学 2017
[2]卵巢癌患者中医证型和心理社会因素及性格的相关性研究[D]. 郭滢.黑龙江中医药大学 2015
[3]80例卵巢癌患者中医体质分布及其相关因素分析[D]. 孟楠楠.黑龙江中医药大学 2015
[4]活血解毒方对晚期卵巢癌患者疗效及生活质量影响的研究[D]. 夏恺.北京中医药大学 2014
[5]扶正解毒方对小鼠前胃癌所诱导的肿瘤相关巨噬细胞干预作用研究[D]. 黎磊.北京中医药大学 2013
[6]中医药干预对妇科恶性肿瘤放化疗患者生存质量的影响研究[D]. 高雪.成都中医药大学 2012



本文编号：3639259