柚皮苷调控miR-199a-5p/ECE1分子轴促进骨损伤修复

发布时间：2022-02-26 17:38

　　目的探讨柚皮苷通过调控mi R-199a-5p/ECE1分子轴对骨损伤修复的影响。方法 Western blotting检测ECE1及成骨分化相关标志物的表达水平;RT-qPCR检测mi RNAs相对表达水平;双荧光素酶报告基因验证mi R-199a-5p和ECE1靶向关系;MTT检测MC3T3-E1细胞增殖活力;碱性磷酸酶（ALP）检测MC3T3-E1细胞成骨分化能力;茜素红染色检测MC3T3-E1细胞矿化情况。结果柚皮苷处理显著促进MC3T3-E1细胞增殖活力、成骨分化指标Runx2、OPN、BMPs、OC等的表达、ALP活性以及细胞钙化能力水平（P<0.01）。其中20ng/m L浓度处理的效果最优。RT-qPCR检测结果显示,柚皮苷能显著上调mi R-199a-5p的表达水平。双荧光素酶报告基因检测结果表明ECE1是mi R-199a-5p的一个靶基因;并且,mi R-199a-5p靶向下调ECE1的表达。进一步实验表明,敲降mi R-199a-5p显著降低柚皮苷对MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和钙矿化的促进作用（P<0.01）;敲降ECE1显著促进了柚皮... 

【文章来源】：昆明医科大学学报. 2020,41(06)

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 细胞转染
        1.2.3 We s te rn blotting检测MC3T3-E1细胞中蛋白表达水平
        1.2.4 MTT检测MC3T3-E1细胞增殖活力
        1.2.5 RT-qP CR检测miRNAs表达
        1.2.6 双荧光素酶报告基因检测miR-199a-5p和ECE1靶向关系
        1.2.7 MC3T3-E1细胞ALP活性检测
        1.2.8 茜素红染色检测MC3T3-E1细胞矿化情况
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 柚皮苷促进骨损伤修复
    2.2 柚皮苷上调MC3T3-E1细胞中miR-199a-5p表达
    2.3 miR-199a-5p靶向下调ECE1表达
    2.4 柚皮苷通过调控miR-199a-5p/ECE1分子轴促进骨损伤修复
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]丹参作用于内皮素转换酶的活性成分虚拟筛选[J]. 陈少军,崔明超,陈宏降.  中国实验方剂学杂志. 2014(14)
[2]血管内皮生长因子缓释系统复合成骨诱导的骨髓间质干细胞修复骨缺损[J]. 徐晓峰,王明伟,潘鑫,刘小平,张志坚.  中国组织工程研究与临床康复. 2011(34)

博士论文
[1]生物可降解纤维支架与miR-495在骨和软骨损伤修复上的应用研究[D]. 赵星宇.吉林大学 2019
[2]糖皮质激素对大鼠股骨头微血管内皮细胞miRNAs表达谱的影响及淫羊藿苷的保护作用[D]. 岳聚安.北京中医药大学 2018

硕士论文
[1]柚皮苷在共培养体系下对成骨细胞和破骨细胞以及内皮祖细胞的影响及其机制研究[D]. 赵志虎.天津医科大学 2017
[2]印记基因（H19、Grb10）和miR-675对骨损伤愈合骨细胞增殖与分化的影响[D]. 姚军威.武汉体育学院 2016



本文编号：3644879