竹节参皂苷Ⅳa调控氧化应激和自噬抗衰老作用及机制研究

发布时间：2022-04-23 17:57

　　背景太白楤木是一种在我国中西部秦岭大巴山脉及其余脉有着丰富野生资源的药用植物。皂苷类化合物是其发挥药理作用的主要成分。我们前期研究发现太白楤木总皂苷在D-半乳糖诱导的大鼠衰老模型中有很好的抗衰老作用,而在太白楤木总皂苷中,含有较高比率的竹节参皂苷Ⅳa（CHS）,并有良好的抗氧化作用。大量的研究表明氧化应激与衰老密切相关,那么CHS能否通过其出色的抗氧化能力起到抗衰老的作用呢?另外,我们前期研究表明CHS具有激活AMPK的作用,而AMPK又可以调控自噬,越来越多的证据显示通过调节自噬能够调节衰老,那么我们有理由推断CHS能够通过调节AMPK从而调控自噬来调节衰老。为了解决上述这些疑问和推断,我们建立了两种有效诱导细胞衰老的模型,从氧化应激和自噬两个方面研究了CHS的抗衰老作用,为有效深入开发太白楤木及其活性成分提供了方向和实验室依据。目的通过建立过氧化氢（H₂O₂）诱导的小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）衰老以及MEFs复制性衰老模型,研究太白楤木中主要成分竹节参皂苷Ⅳa的抗衰老作用及机制。方法1.取Balb/c孕鼠,分离小鼠胚胎成纤维细胞（MEF... 

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略语表
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前言
文献回顾
1 材料
    1.1 实验动物
    1.2 主要试剂
2 方法
    2.1 MEFs细胞的分离培养
    2.2 细胞培养
        2.2.1 细胞培养与传代
        2.2.2 细胞复苏
        2.2.3 细胞冻存
    2.3 细胞活力测定（MTT实验）
    2.4 细胞总ROS测定
    2.5 细胞线粒体ROS测定
    2.6 衰老相关的 β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色
    2.7 Western blot
    2.8 MDC染色
    2.9 腺病毒转染
    2.10 自噬小体的观察
    2.11 统计学分析
3 结果
    3.1 CHS对H_2O_2诱导的衰老的保护作用
        3.1.1 CHS和H_2O_2对MEFs细胞活力的影响
        3.1.2 CHS对H_2O_2诱导的细胞总ROS水平影响
        3.1.3 CHS对H_2O_2诱导的线粒体ROS水平影响
        3.1.4 CHS对H_2O_2诱导的细胞衰老的SA-β-gal染色的影响
        3.1.5 CHS对H_2O_2诱导的细胞衰老的相关标志蛋白表达的影响
        3.1.6 CHS对H_2O_2诱导的细胞衰老的氧化应激通路蛋白Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM的影响
    3.2 CHS对MEFs复制性衰老的保护作用
        3.2.1 CHS对MEFs细胞活力的影响
        3.2.2 不同浓度CHS对MEFs细胞自噬的影响
        3.2.3 CHS（5μg·mL~(-1)）处理不同时间对MEFs细胞自噬的影响
        3.2.4 MEFs细胞复制性衰老模型的建立
        3.2.5 MEFs细胞复制性衰老模型中自噬情况
        3.2.6 CHS对能够抗MEFs细胞衰老
        3.2.7 CHS对复制性衰老MEFs细胞自噬的诱导作用
        3.2.8 CHS对复制性衰老MEFs细胞自噬相关通路的影响
        3.2.9 CHS通过AMPK/mTOR/ULK1通路诱导自噬
        3.2.10 Compound C对CHS抗衰老作用的影响
4 讨论
    4.1 H_2O_2诱导的细胞衰老模型中CHS的抗衰老作用
    4.2 复制性衰老模型中CHS的抗衰老作用
小结
参考文献
附录
个人简历和研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]太白楤木的化学成分及药理作用研究进展[J]. 李成全,周健,徐洲,秦绪军,汤海峰.  中南药学. 2017(10)
[2]畲药山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定[J]. 王伟影,毛菊华,余华丽,李水福.  中国药师. 2015(09)
[3]竹节参化学成分研究[J]. 吴兵,陈新,张长春,任晓慧,任雪琴.  天然产物研究与开发. 2012(08)
[4]珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定[J]. 邓翀,宋小妹,蔡宝昌.  时珍国医国药. 2011(04)



本文编号：3647693