三种瑞香科植物醇提物对HIV-1潜伏感染再激活作用的研究

发布时间：2022-07-12 14:17

　　尽管高效抗逆转录病毒疗法（highly active antiretroviral therapy,HAART）能够有效抑制艾滋病毒的复制,将病毒载量降低至不可检测到的水平,但仍不能彻底清除病毒。人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）在体内的潜伏感染是无法治愈艾滋病的重要原因,“激活再杀伤”（shock and kill）治疗策略是艾滋病治疗的一个新方向。本课题采用HIV-1潜伏感染模型（J-Lat 11.1细胞）,通过流式细胞技术检测GFP阳性细胞率来评价了哥王60%醇提物、芫花100%醇提物和黄芫花60%醇提物对HIV-1潜伏感染的再激活作用。结果表明了哥王60%醇提物的有效剂量范围约为0.33μg/mL-208.30μg/mL;芫花100%醇提物的有效剂量范围约为0.08μg/mL-52.63μg/m L;黄芫花60%醇提物的有效剂量范围约为0.05μg/mL-166.70μg/m L。三种瑞香科植物醇提物的再激活作用均是从加药后4 h开始发挥作用的。经PKC抑制剂（G?6983或G?6850）或NF-κB抑制剂（PDTC或BAY 1... 

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要英文缩写词
第1章 绪论
    1.1 HIV-1简介
    1.2 HIV-1潜伏感染再激活
    1.3 HIV-1潜伏感染再激活机制
        1.3.1 染色质结构及表观遗传修饰
        1.3.2 细胞转录因子的调节
    1.4 研究内容及意义
    1.5 研究方案
第2章 实时检测NF-κBp65、PKC核易位方法的建立
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株、细胞株与质粒
        2.1.2 试剂与耗材
        2.1.3 序列合成与测序
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞RNA提取
        2.2.3 RT-PCR引物设计
        2.2.4 RT-PCR
        2.2.5 琼脂糖凝胶电泳回收目的片段
        2.2.6 重组质粒的连接
        2.2.7 重组质粒的转化
        2.2.8 质粒提取
        2.2.9 重组质粒的双酶切鉴定
        2.2.10 质粒转染
        2.2.11 细胞核DAPI染色
        2.2.12 活细胞成像观察TNF-α对NF-κBp65、PKC核易位的影响
    2.3 实验结果
        2.3.1 pEGFP-p65和pEGFP-PKC重组质粒的构建
        2.3.2 EGFP-p65和EGFP-PKC融合蛋白的表达
        2.3.3 TNF-α对EGFP-p65核易位的影响
        2.3.4 TNF-α对EGFP-PKC核易位的影响
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第3章 三种瑞香科植物醇提物对HIV-1潜伏感染再激活的研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞与试剂
        3.1.2 实验药材
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 天然植物提取物对J-Lat潜伏感染模型的再激活作用
        3.2.2 活细胞成像实时动态观察天然植物提取物对融合蛋白核易位的影响
        3.2.3 统计方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 了哥王60%醇提物对HIV-1潜伏感染的再激活作用
        3.3.2 芫花100%醇提物对HIV-1潜伏感染的再激活作用
        3.3.3 黄芫花60%醇提物对HIV-1潜伏感染的再激活作用
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间所发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]狼毒大戟提取物通过NF-κB通路激活潜伏HIV[J]. 潘晓彦,张明娇,曾晓云,林健,李琳,李珉珉,赵伟.  南方医科大学学报. 2015(11)
[2]HIV-1潜伏感染体外实验模型研究进展[J]. 康学军,杨怡姝.  中国生物工程杂志. 2015(08)
[3]EGCG影响TNF-α诱导的NF-κB/p65入核及促凋亡效应[J]. 王强,陈晓艳,罗招阳,赵慧.  中国癌症杂志. 2008(01)
[4]HIV-1的转录因子NF-κB及其抑制剂的研究进展[J]. 于明艳,刘新泳.  药学学报. 2007(10)
[5]Nuclear Factor-κB:Activation and Regulation during Toll-Like Receptor Signaling[J]. Ruaidhrí J. Carmody.  Cellular ＆ Molecular Immunology. 2007(01)
[6]中草药对Raji细胞EB病毒早期抗原的诱发作用[J]. 曾毅,钟建明,莫永坤,苗学谦.  中国医学科学院学报. 1984(02)



本文编号：3659279