甘草及其miRNA对小鼠肠道菌群和免疫的影响

发布时间：2022-10-09 19:46

　　背景及目的:前期实验研究发现,miRNA156在甘草水提物miRNA中丰度较高,并经由细胞形态学、细胞增殖情况和免疫相关基因表达探索了甘草miRNA对人免疫细胞的影响。本研究从小鼠肠道菌群、淋巴细胞免疫基因表达、肠道组织转录组表达情况及肠道组织形态观察探究甘草及其miRNA对小鼠的影响,为拓展中药研究新方向奠定了基础。方法:1、制取甘草水提物及对照组金银花水提物,根据前期高通量测序结果中miRNA156序列,设计合成相应的miRNA156 mimic及相应的反转录及检测引物,分别通过灌胃不同剂量甘草水提物、miRNA156mimic及尾静脉注射miRNA156 mimic进行后续实验。眼球取血并离心获得小鼠血清,利用qRT-PCR检测血清中的miRNA。2、取小鼠新鲜粪便提取基因组DNA,进行16S rDNA V4V5高变区测序,分析各组间门纲目科属水平肠道菌群的差异,并通过α多样性及β多样性分析确定各组间关系及miRNA156在甘草中发挥的作用。3、取小鼠回肠片段,一部分液氮研磨提取RNA用于转录组测序并进行生物信息学分析,另外一部分样品用4%多聚甲醛溶液进行固定,HE染色,光学显微... 

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 甘草miRNA在小鼠血清中的检测
    1.1 引言
    1.2 实验材料
        1.2.1 样本
        1.2.2 试剂
        1.2.3 仪器
        1.2.4 实验动物
        1.2.5 试剂配制
    1.3 实验方法
        1.3.1 动物分组及给药
        1.3.2 样品收集
        1.3.3 血清中总RNA的提取
        1.3.4 目标miRNA的RT-PCR检测
        1.3.5 实时荧光定量PCR鉴定目标miRNA
    1.4 实验结果
        1.4.1 小鼠体质量结果
        1.4.2 甘草miRNA在血清中的检测结果
    1.5 本章小结
第二章 甘草及其miRNA对小鼠肠道菌群的影响
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 样本
        2.2.2 试剂
        2.2.3 仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 粪便基因组DNA提取
        2.3.2 样品质量检测及PCR扩增
        2.3.3 建库测序和信息分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 基因组质量检测结果
        2.4.2 OTU及物种群落结构
        2.4.3 Alpha多样性分析
        2.4.4 Beta多样性分析
    2.5 本章小结
第三章 甘草及其miRNA对小鼠肠道组织转录组的影响
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 样本
        3.2.2 试剂
        3.2.3 仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 小鼠回肠组织总RNA提取
        3.3.2 样品质量检测
        3.3.3 建库测序
        3.3.4 生物信息学分析
        3.3.5 利用实时荧光定量PCR验证转录组测序结果
        3.3.6 肠道组织切片HE染色
    3.4 实验结果
        3.4.1 RNA质量检测结果
        3.4.2 测序数据统计和评估
        3.4.3 基因表达分析
        3.4.4 基因差异表达分析
        3.4.5 差异表达基因GO富集分析
        3.4.6 差异表达基因KEGG Pathway功能分析
        3.4.7 利用实时荧光定量PCR验证转录组测序结果
        3.4.8 肠道组织HE染色病理结果
    3.5 本章小结
第四章 甘草及其miRNA对小鼠脾脏免疫相关基因的影响
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 样本
        4.2.2 试剂
        4.2.3 仪器
        4.2.4 免疫相关基因引物
    4.3 实验方法
        4.3.1 小鼠脾脏淋巴细胞总RNA的提取
        4.3.2 小鼠脾脏RNA免疫相关基因的RT-PCR鉴定
        4.3.3 实时荧光定量PCR检测免疫基因的表达差异
    4.4 实验结果
        4.4.1 小鼠脾脏淋巴细胞总RNA提取及免疫相关基因扩增鉴定
        4.4.2 实时荧光定量PCR得到的免疫相关基因的差异表达量
    4.5 本章小结
第五章 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 展望
参考文献
附录1 转录组测序验证基因对应通路
附录2 转录组测序用于验证的基因测序表达量
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]趋化因子CXCL12/CXCR4与肿瘤关系的研究进展[J]. 亓建波,马家驰,郭庆金,陈晓昌,赵晓丹,龚珍强,杜剑波.  现代肿瘤医学. 2018(07)
[2]肠道菌群对肠道病毒感染的影响[J]. 王三元,董俊芳,彭宜红.  微生物学免疫学进展. 2018(01)
[3]甘草水提物中miRNA对人免疫细胞基因表达的影响[J]. 向静,黄洁嫦,徐畅,何免,徐鹏程,张丹,张文峰,沈晗,邵红伟.  中国中药杂志. 2017(09)
[4]中药有效成分与肠道菌群相互作用的研究进展[J]. 祖先鹏,林璋,谢海胜,杨鸟,刘心如,张卫东.  中国中药杂志. 2016(10)
[5]Bax基因及其产物对细胞凋亡的调节[J]. 李彩萍.  当代畜牧. 2016(11)
[6]中草药免疫增强功能的研究进展[J]. 阿地拉·艾皮热,张富春,李金耀.  细胞与分子免疫学杂志. 2016(03)
[7]甘草水煎剂中miRNA的提取及其对人外周血单个核细胞的影响研究[J]. 邵红伟,何免,陈嘉斯,陈辉,向静,黄树林.  中药材. 2015(07)
[8]甘草及其有效成分的药效学研究进展[J]. 张明,邓毅.  西部中医药. 2015(04)
[9]IL-12p35和IL-12p40缺失可引起衣原体生殖道感染后肾脏病变[J]. 符玺宗,陈胜华,孙源彬,柏琴琴,蔡恒玲,周洲,陆春雪,陈丽丽.  中华微生物学和免疫学杂志. 2015 (02)
[10]中药金银花的研究进展[J]. 王亚丹,杨建波,戴忠,马双成.  药物分析杂志. 2014(11)

硕士论文
[1]胭脂鱼CD79a和CD79b基因的克隆、表达及功能分析[D]. 李焕.西南大学 2017
[2]猪繁殖与呼吸综合征模型中补体受体CR2 mRNA的表达水平分析[D]. 段孟波.山西农业大学 2015
[3]SELL基因在中国汉族重型痤疮分子水平的研究[D]. 郑琪.昆明医科大学 2015
[4]甘草水煎剂中miRNA的提取、高通量测序及对免疫细胞的影响研究[D]. 何免.广东药学院 2015



本文编号：3689245