京尼平苷调节胰腺β细胞GLUT2内吞的分子机制研究

发布时间：2022-11-05 03:35

　　2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）是一种以持续高血糖和胰岛素抵抗为主要特征的常见慢性代谢性疾病。在胰腺β细胞中,糖促胰岛素分泌（glucose-stimulated insulin secretion,GSIS）作用对于维持机体血糖平衡的过程中具有非常重要的作用。课题组前期研究发现,京尼平苷可通过激活胰高血糖素样肽1受体（glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R）调节GSIS,并且在低、中浓度葡萄糖存在条件下,京尼平苷可快速的增强胰腺β细胞对葡萄糖的吸收和代谢,促进胰岛素分泌,然而,在高糖条件下,京尼平苷却起着相反的作用,减弱了胰腺β细胞对葡萄糖的吸收、代谢和胰岛素分泌。由于高血糖会诱导胰腺β细胞过度分泌胰岛素以满足身体的需要,从而加速胰腺β细胞功能障碍和细胞凋亡,因此,京尼平苷可能有助于防止高血糖造成的胰腺β细胞损伤和功能障碍、防止或延缓2型糖尿病的形成、减少并发症的发生。但京尼平苷如何在短时间内实现对β细胞胰岛素分泌的调节的呢?目前还不清楚。结合文献和前期工作基础,我们提出假说:京尼平苷可能是通过影响胰腺β... 

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩写
1 绪论
    1.1 2型糖尿病的流行病学
    1.2 2型糖尿病的发病机制
        1.2.1 遗传和环境因素
        1.2.2 胰岛素抵抗
        1.2.3 胰岛β细胞功能受损和凋亡
        1.2.4 高血糖与2型糖尿病及并发症
    1.3 GLUT2与2 型糖尿病
    1.4 京尼平苷与糖尿病相关的研究进展
        1.4.1 对胰腺β细胞的保护作用
        1.4.2 激活PPARγ受体作用
        1.4.3 对糖尿病并发症的防治作用
    1.5 本文的立项依据和研究内容
2 京尼平苷对胰腺β细胞GLUT2 表达和内吞的影响
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验细胞
        2.2.2 主要溶液
        2.2.3 主要试剂
        2.2.4 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 大鼠胰腺INS-1 细胞的培养
        2.3.2 细胞膜蛋白与浆蛋白分离提取
        2.3.3 样品蛋白浓度测定
        2.3.4 蛋白免疫印迹分析
        2.3.5 样品总RNA提取
        2.3.6 RNA逆转录cDNA
        2.3.7 RT-PCR反应
        2.3.8 免疫荧光技术
        2.3.9 数据统计分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 京尼平苷对INS-1 细胞中GLUT2 m RNA和蛋白水平的影响
        2.4.2 不同糖浓度条件下,京尼平苷短时间作用对INS-1 细胞中GLUT2 分布的影响
    2.5 讨论与小结
        2.5.1 讨论
        2.5.2 小结
3 京尼平苷对胰腺β细胞GLUT2 内吞关键分子的调节作用
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验细胞
        3.2.2 主要溶液
        3.2.3 主要试剂
        3.2.4 主要仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 大鼠胰腺INS-1 细胞培养
        3.3.2 样品蛋白浓度测定
        3.3.3 蛋白免疫印迹分析
        3.3.4 样品总RNA提取
        3.3.5 RNA逆转录cDNA
        3.3.6 RT-PCR反应
        3.3.7 数据统计分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 京尼平苷对INS-1 细胞中GnT-IVa mRNA和蛋白水平的影响
        3.4.2 京尼平苷对INS-1 细胞中galectin-9 mRNA和蛋白水平的影响
        3.4.3 京尼平苷对INS-1 细胞中clathrin m RNA和蛋白水平的影响
        3.4.4 不同糖浓度条件下,京尼平苷短时间作用对INS-1 细胞中galectin-9 蛋白水平的影响
        3.4.5 不同糖浓度条件下,京尼平苷短时间作用对INS-1 细胞中GnT-IVa蛋白水平的影
        3.4.6 不同糖浓度条件下,京尼平苷短时间作用对INS-1 细胞中GLUT2 蛋白糖基化水平的影响
    3.5 讨论与小结
        3.5.1 讨论
        3.5.2 小结
4 GnT-IVa与京尼平苷短时间内调节胰腺β细胞GLUT2 内吞的相关性
    4.1 前言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验细胞
        4.2.2 主要溶液
        4.2.3 主要试剂
        4.2.4 主要仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 大鼠胰腺INS-1 细胞培养
        4.3.2 样品蛋白浓度测定
        4.3.3 蛋白免疫印迹分析
        4.3.4 siRNA基因干扰
        4.3.5 免疫荧光技术
        4.3.6 葡萄糖水平测定
        4.3.7 ATP水平测定
        4.3.8 胰岛素水平检测
        4.3.9 数据统计分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 GnT-IVa siRNA浓度和最优序列的选择
        4.4.2 京尼平苷对GnT-IVa干扰后的INS-1 细胞中GLUT2 蛋白糖基化水平的影响
        4.4.3 京尼平苷对GnT-IVa干扰后的INS-1 细胞中GLUT2 在细胞膜上分布的影响
        4.4.4 京尼平苷对GnT-IVa干扰后的INS-1 细胞葡萄糖吸收、代谢和胰岛素分泌的影响
    4.5 讨论与小结
        4.5.1 讨论
        4.5.2 小结
5 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]栀子苷降糖作用及相关机制研究[J]. 姚冬冬,舒娈,杨蕾,贾晓斌,孙敏.  中草药. 2014(08)
[2]栀子及其活性成分栀子苷防治糖尿病作用机制研究进展[J]. 姚冬冬,舒娈,杨蕾,贾晓斌.  中国中药杂志. 2014(08)
[3]糖尿病及新药研发概况[J]. 周维军,吴冬梅,方烨.  临床医药实践. 2013(07)
[4]糖尿病血管并发症的中药防治[J]. 邬伟魁,张海燕,宋伟,芦乾,刘昊,贺娅,郑琴,杨明.  中国实验方剂学杂志. 2011(19)
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[6]栀子降血糖作用的实验研究[J]. 黄洪林,杨怀瑾,刘立超,邱咏薇,刘杰,丁舸.  中药新药与临床药理. 2006(01)
[7]急性胰腺炎时XOD和GSH的变化及栀子的影响[J]. 贾玉杰,姜妙娜,高静涛,裴德恺,梅懋华.  大连医学院学报. 1993(04)
[8]栀子对实验性胰腺炎时胰腺细胞膜流动性的影响[J]. 贾玉杰,高静涛,杨雅珍,裴德恺.  大连医学院学报. 1991(01)
[9]胰腺炎时胰腺细胞反应性的变化及栀子的影响[J]. 贾玉杰,高静涛,姜妙娜,裴德恺.  大连医学院学报. 1991(01)
[10]急性胰腺炎时胰腺细胞亚细胞器的功能变化及栀子的影响[J]. 贾玉杰,高静涛,姜妙娜,刘博,裴德恺.  大连医学院学报. 1991(01)



本文编号：3701845