β-arrestin2调节NOX4影响氧化应激在肝纤维化中的作用及CP-25对其的影响
发布时间：2023-02-19 09:48
肝纤维化是因致病因子长期刺激导致肝脏受损,以细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积、结缔组织异常增生为主要特点的肝脏结构和功能异常的病理过程。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是ECM的主要来源。NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)家族的主要功能是催化产生活性氧(reactive oxygen species,ROS),导致氧化应激的发生,HSC中主要表达NOX1、NOX2、NOX4。肝脏是过量ROS主要攻击的器官,导致氧化破坏,释放大量炎症因子,同时直接刺激HSC活化,导致纤维化。β-arrestin2是arrestin家族成员之一,是G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)的调节蛋白,参与受体的脱敏和内化。研究发现,它还可以调节许多信号转导通路,影响ECM的沉积、炎症反应、氧化应激等,参与纤维化疾病进程。课题组前期研究结果表明,β-arrestin2在肝纤维化患者肝脏中的表达明显高于肝内胆管结石患者;体外使用β-arrestin2 siRNA转染HSC,可抑制...
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 实验材料
2.1 实验动物
2.2 细胞株
2.3 试剂
2.4 仪器与设备
3 实验方法
3.1 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的小鼠氧化应激和肝纤维化的影响及CP-25的作用
3.1.1 CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型的建立与分组
3.1.2 肝脏组织病理学检查
3.1.3 DHE荧光探针检测小鼠肝脏冰冻切片ROS表达
3.1.4 免疫荧光双染法检测小鼠肝脏中β-arrestin2、NOX4的表达情况
3.1.5 Western blot法检测NOX4、胶原、β-arrestin2、MMP-13、TIMP-1表达的变化
3.1.6 免疫组化法检测NOX4、胶原在肝纤维化小鼠肝脏中的表达情况
3.2 NOX4 siRNA对LX-2细胞中氧化应激及纤维化指标表达的影响
3.2.1 LX-2细胞的培养
3.2.2 LX-2细胞总蛋白的提取和定量
3.2.3 Western blot法检测不同浓度AngⅡ刺激对NOX4、α-SMA蛋白表达影响
3.2.4 NOX4 siRNA的筛选和转染效率验证
3.2.5 NOX4 siRNA对LX-2中氧化应激及纤维化指标表达的影响
3.3 β-arrestin2 siRNA对LX-2细胞中纤维化指标及下游信号通路相关蛋白表达的影响
3.3.1 实验分组
3.3.2 Western blot法检测β-arrestin2、Ⅰ型胶原、NOX4、p-ERK、p-JNK蛋白表达的变化
3.4 CP-25对LX-2中ROS及纤维化相关蛋白表达的影响
3.4.1 实验分组
3.4.2 CP-25对LX-2细胞ROS表达的影响
3.4.3 Westernblot法检测CP-25对NOX4、Ⅰ型胶原蛋白和β-arrestin2表达的影响
3.5 统计学处理
4 结果
4.1 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的小鼠肝纤维化和氧化应激的影响
4.1.1 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏外观和病理的影响
4.1.2 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏ROS产生的影响
4.1.3 肝纤维化小鼠肝组织β-arrestin2、NOX4的表达情况
4.1.4 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏中NOX4、胶原表达的影响
4.1.5 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏中MMP-13、TIMP-1表达的影响
4.2 CP-25对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的影响
4.2.1 免疫组化检测CP-25对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏中NOX4和胶原表达的影响
4.2.2 CP-25对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏NOX4、Ⅲ型胶原和β-arrestin2表达的影响
4.2.3 CP-25对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏MMP-13和TIMP-1表达的影响
4.3 NOX4 siRNA对LX-2细胞中氧化应激及纤维化指标表达的影响
4.3.1 不同浓度AngⅡ刺激对LX-2细胞中NOX4、α-SMA表达的影响
4.3.2 NOX4 siRNA筛选与转染效率验证
4.3.3 NOX4 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞ROS产生的影响
4.3.4 NOX4 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
4.4 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激得LX-2细胞中纤维化指标及下游信号通路相关蛋白表达的影响
4.4.1 β-arrestin2 siRNA转染效率验证
4.4.2 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞ROS产生的影响
4.4.3 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞Ⅰ型胶原和NOX4蛋白表达的影响
4.4.4 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞中ERK和 JNK激活的影响
4.5 CP-25对LX-2细胞中氧化应激及纤维化指标表达的影响
4.5.1 CP-25对LX-2细胞ROS表达的影响
4.5.2 CP-25对AngⅡ刺激的LX-2细胞中β-arrestin2、NOX4和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
5 讨论
5.1 氧化应激在肝纤维化发展过程中发挥重要作用
5.2 β-arrestin2可能通过上调NOX4介导氧化应激
5.3 CP-25可能通过下调β-arrestin2降低NOX4和ROS的生成发挥抗肝纤维化作用
6 结论
参考文献
附录
致谢
综述：G蛋白偶联受体与肝损伤的研究进展
参考文献
本文编号：3745996
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
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英文缩略词表
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 实验材料
2.1 实验动物
2.2 细胞株
2.3 试剂
2.4 仪器与设备
3 实验方法
3.1 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的小鼠氧化应激和肝纤维化的影响及CP-25的作用
3.1.1 CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型的建立与分组
3.1.2 肝脏组织病理学检查
3.1.3 DHE荧光探针检测小鼠肝脏冰冻切片ROS表达
3.1.4 免疫荧光双染法检测小鼠肝脏中β-arrestin2、NOX4的表达情况
3.1.5 Western blot法检测NOX4、胶原、β-arrestin2、MMP-13、TIMP-1表达的变化
3.1.6 免疫组化法检测NOX4、胶原在肝纤维化小鼠肝脏中的表达情况
3.2 NOX4 siRNA对LX-2细胞中氧化应激及纤维化指标表达的影响
3.2.1 LX-2细胞的培养
3.2.2 LX-2细胞总蛋白的提取和定量
3.2.3 Western blot法检测不同浓度AngⅡ刺激对NOX4、α-SMA蛋白表达影响
3.2.4 NOX4 siRNA的筛选和转染效率验证
3.2.5 NOX4 siRNA对LX-2中氧化应激及纤维化指标表达的影响
3.3 β-arrestin2 siRNA对LX-2细胞中纤维化指标及下游信号通路相关蛋白表达的影响
3.3.1 实验分组
3.3.2 Western blot法检测β-arrestin2、Ⅰ型胶原、NOX4、p-ERK、p-JNK蛋白表达的变化
3.4 CP-25对LX-2中ROS及纤维化相关蛋白表达的影响
3.4.1 实验分组
3.4.2 CP-25对LX-2细胞ROS表达的影响
3.4.3 Westernblot法检测CP-25对NOX4、Ⅰ型胶原蛋白和β-arrestin2表达的影响
3.5 统计学处理
4 结果
4.1 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的小鼠肝纤维化和氧化应激的影响
4.1.1 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏外观和病理的影响
4.1.2 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏ROS产生的影响
4.1.3 肝纤维化小鼠肝组织β-arrestin2、NOX4的表达情况
4.1.4 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏中NOX4、胶原表达的影响
4.1.5 β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏中MMP-13、TIMP-1表达的影响
4.2 CP-25对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的影响
4.2.1 免疫组化检测CP-25对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏中NOX4和胶原表达的影响
4.2.2 CP-25对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏NOX4、Ⅲ型胶原和β-arrestin2表达的影响
4.2.3 CP-25对CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏MMP-13和TIMP-1表达的影响
4.3 NOX4 siRNA对LX-2细胞中氧化应激及纤维化指标表达的影响
4.3.1 不同浓度AngⅡ刺激对LX-2细胞中NOX4、α-SMA表达的影响
4.3.2 NOX4 siRNA筛选与转染效率验证
4.3.3 NOX4 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞ROS产生的影响
4.3.4 NOX4 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
4.4 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激得LX-2细胞中纤维化指标及下游信号通路相关蛋白表达的影响
4.4.1 β-arrestin2 siRNA转染效率验证
4.4.2 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞ROS产生的影响
4.4.3 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞Ⅰ型胶原和NOX4蛋白表达的影响
4.4.4 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞中ERK和 JNK激活的影响
4.5 CP-25对LX-2细胞中氧化应激及纤维化指标表达的影响
4.5.1 CP-25对LX-2细胞ROS表达的影响
4.5.2 CP-25对AngⅡ刺激的LX-2细胞中β-arrestin2、NOX4和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
5 讨论
5.1 氧化应激在肝纤维化发展过程中发挥重要作用
5.2 β-arrestin2可能通过上调NOX4介导氧化应激
5.3 CP-25可能通过下调β-arrestin2降低NOX4和ROS的生成发挥抗肝纤维化作用
6 结论
参考文献
附录
致谢
综述：G蛋白偶联受体与肝损伤的研究进展
参考文献
本文编号：3745996
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/3745996.html
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