补肾填髓方对AD细胞模型中miRNA-206-3p与BDNF表达的影响

发布时间：2023-02-19 15:09

　　目的:观察补肾填髓方干预Aβ_25-35影响的C6大鼠胶质瘤细胞中以BDNFmRNA标靶的miRNA-206-3p表达的影响,探讨补肾填髓法的抗痴呆作用及其可能的机制,为指导临床应用和开发新药提供理论和实验依据。方法:1.含药血清的制备:将健康SD大鼠,随机分为空白血清组和补肾填髓方组,各组动物给予相应药物或生理盐水灌胃。其中补肾填髓方低、高剂量组灌胃浓度为1:6,后取血、离心备用。2.C6细胞的培养:将C6细胞进行培养,取对数生长期细胞进行实验研究,以β-淀粉样蛋白(Aβ_25-35)处理制备阿尔茨海默病细胞模型。分为空白血清组、模型组、低剂量BSTSF组、高剂量BSTSF组。3.实时荧光定量PCR观察各组BDNF mRNA及miRNA-206-3p mRNA表达的差异。4.Western Blot检测各组BDNF蛋白的表达。结果:1.实时荧光定量PCR反应BDNF mRNA、miRNA-206-3p mRNA比较:与空白血清组比较,模型组BDNF mRNA显著下降(P<0.01);与模型组比较,补肾填髓方低、高剂量含药血清组BDNF m...

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
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英文缩略词
前言
一、实验材料
    1.1 实验动物
    1.2 细胞系
    1.3 实验仪器
    1.4 实验试剂
二、实验方法
    2.1 实验药物及制备
    2.2 动物分组及含药血清的制备方法
    2.3 C6细胞培养
    2.4 Aβ寡聚体孵育
    2.5 实验分组及干预措施
    2.6 荧光定量RT-PCR检测
        2.6.1 Trizol法提取神经元中总RNA
        2.6.2 RNA的琼脂糖凝胶电泳
        2.6.3 RNA反转录
        2.6.4 实时荧光定量PCR检测miR-206-3p mRNA
        2.6.5 实时荧光定量PCR检测BDNF mRNA
    2.7 免疫印迹 (Western blot)法检测BDNF蛋白的表达
        2.7.1 蛋白提取
        2.7.2 蛋白浓度测定
        2.7.3 电泳
        2.7.4 转膜
        2.7.5 封闭
        2.7.6 一抗孵育
        2.7.7 二抗孵育
        2.7.8 显色 / 曝光
三、统计方法
四、实验结果
    4.1 实时定量荧光PCR
        4.1.1 补肾填髓方对AD细胞模型中BDNF mRNA表达的影响
        4.1.2 补肾填髓方对AD细胞模型中miRNA-206-3p mRNA表达的影响
    4.2 补肾填髓方对AD细胞模型中BDNF蛋白表达的影响
五、讨论
    5.1 AD发病机制的认识
    5.2 含药血清的制备
    5.3 AD细胞模型的建立
    5.4 BDNF、miRNA-206-3p与AD
    5.5 补肾填髓方与AD的治疗
    5.6 补肾填髓方对AD细胞模型中BDNF、BDNF mRNA、miRNA-206-3p表达的影响
六、结论
致谢
参考文献
综述
    参考文献



本文编号：3746446