基于JAK2/STAT3信号通路研究芍药苷抑制糖尿病肾脏巨噬细胞激活的分子机制

发布时间：2023-02-27 17:47

　　背景和目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是一种常见的代谢类疾病,其和终末期肾功能衰竭(ESRF)存在密切的关系,目前关于DN病理和疗法的研究在不断增加,并取得了很多重要的成果。相关研究发现在一定因素刺激下,相关炎性因子表达量会提高,引发NF-κB活化,这会导致糖尿病肾病的病情加重,不过其作用机理和相关信号转导通路还不是很明确。大量研究表明,参与炎症反应的单核巨噬细胞首先需要激活JAK/STAT信号通路并启动自身下游信号通路,导致巨噬细胞被激活并引发相关的炎性反应,这会增加此类患者的肾脏损害,因而在进行治疗时可以将其看作为相应的靶点。近年来中药治疗DN受到人们的关注,芍药苷(Paeoniflorin,PF)是白芍总苷的活性成分,其具有一定的抗氧化和提高机体免疫力的作用。在这项研究中,PF被用于链脲佐菌素诱导的糖尿病模型和高糖刺激的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,从整体,细胞等角度分析了JAK/STAT信号通路的变化情况,并深入分析了此信号通路在糖尿病肾病发生和发展过程中的作用,为这种疾病的防治起到参考作用。方法:第一部分:采用RAW264.7小鼠巨噬细胞系...

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文缩略词(Abbreviation)
中文摘要
Abstract
引言
研究一 芍药苷通过JAK2/STAT3信号通路抑制高糖诱导的RAW264.7巨噬细胞激活
    1.引言
    2.实验材料
        2.1 主要仪器
        2.2 主要试剂
    3.实验方法
        3.1 主要试剂配制
        3.2 RAW264.7细胞系的复苏、换液、传代、冻存
        3.3 选取JAK2/STAT3基因沉默最佳的干扰序列
        3.4 Westernblotting检测各组巨噬细胞的蛋白表达
        3.5 不同高糖刺激浓度对RAW264.7巨噬细胞及JAK2/STAT3表达的影响
        3.6 不同时间点高糖刺激对JAK2/STAT3激活及RAW264.7巨噬细胞活化的影响
        3.7 不同芍药苷浓度对高糖刺激引起JAK2/STAT3激活及RAW264.7巨噬细胞活化的影响
        3.8 巨噬细胞实验分组
        3.9 实时荧光定量PCR检测各组RAW264.7巨噬细胞的mRNA的表达
        3.10 ELISA法检测各组巨噬细胞培养上清液中细胞因子含量
        3.11 MCP-1趋化实验
        3.12 细胞免疫荧光
        3.13 统计分析
    4.结果
        4.1 PF对高糖环境中RAW264.7巨噬细胞活性的影响
        4.2 选取JAK2/STAT3基因沉默最佳的干扰序列
        4.3 RAW264.7细胞在不同高糖刺激浓度下P-JAK2及STAT3的表达
        4.4 不同时间点高糖刺激对P-JAK2、STAT3激活及RAW264.7细胞活化的影响
        4.5 不同浓度Paeoniflorin对高糖环境中RAW264.7细胞p-JAK2,p-STAT2蛋白表达的影响
        4.6 JAK2/STAT3基因沉默及PF干预对高糖刺激巨噬细胞迁徙能力的影响
        4.7 高糖刺激、PF干预对iNOS、TNF-α、IL-1β和MCP-1mRNA表达的影响
        4.8 高糖刺激对RAW264.7巨噬细胞培养基中分泌TNF-α、IL-1β、MCP-1的影响
        4.9 高糖刺激RAW264.7M1活化及JAK2/STAT3基因沉默、PF干预的影响
    5.讨论
        5.1 巨噬细胞与糖尿病肾病
        5.2 JAK2/STAT3信号通路与糖尿病肾病
        5.3 PF治疗与糖尿病肾病
    6.结论
    7.参考文献
研究二 芍药苷通过JAK2/STAT3信号通路抑制糖尿病小鼠肾组织炎症作用与机制
    1.引言
    2.实验材料
        2.1 主要仪器
        2.2 主要试剂
        2.3 实验动物
    3.实验方法
        3.1 主要试剂配置
        3.2 动物模型建立及实验动物分组
        3.3 实验标本的收集
        3.4 血糖指标测定
        3.5 尿白蛋白排泄率测定
        3.6 病理形态学的观察
        3.7 免疫组织化学染色
        3.8 蛋白印迹检测各组肾组织的蛋白表达
        3.9 实时荧光定量PCR检测各组巨噬细胞的mRNA的表达
        3.10 统计分析
    4.结果
        4.1 各组小鼠一般情况
        4.2 各组小鼠一般指标变化
        4.3 各组小鼠肾组织病理学改变
        4.4 各组小鼠肾组织CD68、p-JAK2与p-STAT3免疫组化改变
        4.5 各组小鼠肾组织p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3蛋白的表达
        4.6 各组小鼠肾组织TNF-α、IL1-β、MCP-1和iNOSmRNA表达
    5.讨论
    6.结论
    7.参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3751169