几种天然化合物对AD小鼠神经元5hmC靶向调控水平的比较研究

发布时间：2023-05-11 05:53

　　阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种渐进性神经功能退行性疾病,通常会在海马、皮质等组织出现选择性神经元丢失和变性、大量淀粉样斑块(SP)沉积以及神经原纤维缠结(NFTs),甚至导致神经死亡。由于发病机理复杂,目前还没有有效的预防及治疗措施,AD已成为老年人的健康和正常的生活的一大威胁。近年来研究发现,5-甲基胞嘧啶(5mC)会被TET蛋白家族氧化形成5-羟甲基胞嘧啶(5hmC),而5hmC作为DNA去甲基化的关键中间体对于维持机体的正常生理功能具有重要意义。已有一系列研究证实,DNA甲基化失调(5mC/5hmC)现象与一些疾病发生和发展关系密切,在AD等神经退行性疾病中,存在DNA甲基化失调现象。本研究选择了5种已被证实具有改善记忆、神经保护以及增强免疫等作用的天然化合物(虫草素、虫草酸、栀子苷、藏红花素以及麦角甾醇)以及目前研究较深入的天然化合物白藜芦醇为阳性对照进行细胞水平的研究,以发掘具有能调控5hmC水平以及改善AD神经元状态的天然化合物。通过Dot Blot实验发现,高浓度的虫草素、虫草酸、白藜芦醇和藏红花素均能显著的增加5hmC的表达水平;结合...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 研究背景
    1.阿尔茨海默症
    2.DNA甲基化与神经退行性疾病
    3.阿尔茨海默症相关药物
    4.技术路线
    5.研究目的及意义
第二章 不同化合物处理对SHSY-5Y细胞甲基化的影响
    1.实验材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验仪器及试剂
        1.3 实验方法
            1.3.1 细胞培养
            1.3.2 结晶紫染色法检测细胞成活率
            1.3.3 提取细胞DNA及DotBlot检测
            1.3.4 细胞RNA提取和RT-PCR
    2.实验结果
        2.1 细胞存活率测试
            2.1.1 不同剂量化合物处理条件下293T细胞存活率
            2.1.2 不同剂量化合物处理条件下SHSY-5Y细胞存活率
        2.2 SHSY-5Y在不同化合物处理后5hmC表达情况
        2.3 DNA甲基化相关基因检测
            2.3.1 semi-qPCR实验结果
            2.3.2 RT-PCR实验结果
    3.讨论
第三章 不同化合物对SHSY-5Y及原代神经元形态的影响
    1.实验材料及方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
            1.2.1 小鼠原代神经元培养
            1.2.2 细胞免疫荧光方法
    2.实验结果
        2.1 不同化合物处理后对神经细胞诱导分化的影响
            2.1.1 虫草素对神经细胞的诱导分化
            2.1.2 虫草酸对神经细胞的诱导分化
            2.1.3 白藜芦醇对神经细胞的诱导分化
        2.2 不同化合物处理后对SHSY-5Y细胞DNA的损伤
        2.3 不同化合物处理对小鼠原代神经元的影响
            2.3.1 不同化合物处理对WT小鼠原代神经元的影响
            2.3.2 不同化合物处理对AD小鼠原代神经元的影响
    3.讨论
第四章 总结与展望
参考文献
攻读硕士学位期间完成的科研成果
致谢



本文编号：3814294