基于内质网应激PERK/ATF4信号通路研究栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗机制
发布时间：2023-08-15 19:41
目的:本研究通过制备大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusions,MCAO)大鼠模型,研究栝楼桂枝汤(Gualou-Guizhi Decoction,GLGZD)对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用,并深入探究GLGZD是否通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(Proteinkinase R(PKR)-like ERkinase,PERK)/转录活化因子 4(Activating transcription factor 4,ATF4)信号通路以改善内质网应激进而减轻脑缺血后神经细胞损伤,为脑卒中后神经功能康复的临床用药提供科学依据。方法:(1)模型的建立、分组及给药:采用线栓法制备大鼠MCAO大鼠模型,并进行神经功能评分,将评分为2～4分的大鼠随机分为MCAO组、GLGZD低、中、高剂量组以及尼莫地平组,另设假手术组。各组大鼠于手术当日给予相应的药物,1次/d,连续干预7d。(2)GLGZD对MCAO大鼠的治疗作用:GLGZD干预7d后,采用longa神经功能评分评价大鼠的神经行为障碍;TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;HE染色法观察大鼠缺血侧大脑皮层神...
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表
中文摘要
Abstract
引言
第一章 栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经保护作用研究
1 材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 实验仪器
1.4 实验试剂
2 实验方法
2.1 栝楼桂枝汤的制备
2.2 大鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立
2.3 实验分组与给药方法
2.4 神经功能评分
2.5 TTC染色法
2.6 组织石蜡切片的制作
2.7 组织病理观察(HE染色)
2.8 细胞凋亡率检测(Tunel法)
2.9 实验结果统计学分析
3 实验结果
3.1 GLGZD对MCAO模型大鼠神经功能评分的影响
3.2 GLGZD对MCAO缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积的影响
3.3 GLGZD对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧大脑皮层组织病理变化的影响
3.4 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层神经细胞凋亡的影响
4 讨论
5 小结
第二章 栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注损伤大鼠内质网应激PERK/ATF4信号转导的调控作用
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 实验仪器
1.4 实验试剂
2 实验方法
2.1 动物组织取材
2.2 实时荧光定量qRT-PCR模板DNA的制备及相应指标的定量检测
2.3 蛋白样品的制备
2.4 Western-Blot法测定PERK/ATF4相关蛋白的表达
2.5 免疫组织化学法检测IP3R蛋白表达水平
2.6 免疫荧光法检测GRP78蛋白表达水平
2.7 荧光探针法检测缺血皮层组织中Ca2+、ROS含量
2.8 数据处理与分析
3 实验结果
3.1 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层GRP78 mRNA和总蛋白表达的影响
3.2 GLGZD对MCAO大鼠缺血皮层中PERK、eIF2α蛋白磷酸化水平的影响
3.3 GLGZD对MCAO大鼠缺血皮层中ATF4 mRNA和总蛋白表达的影响
3.4 GLGZD对MCAO大鼠缺血皮层中CHOP mRNA和总蛋白表达的影响
3.5 GLGZD对MCAO大鼠缺血皮层中Ero-1α mRNA和总蛋白表达的影响
3.6 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中Bcl-2 mRNA和总蛋白表达的影响
3.7 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中Bax mRNA和总蛋白表达的影响
3.8 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中Caspase-3激活的影响
3.9 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中ROS和Ca2+含量的影响
3.10 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中SERCA2α、IP3R mRNA和总蛋白表达的影响
4 讨论
5 小结
结论
参考文献
文献综述
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3842150
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表
中文摘要
Abstract
引言
第一章 栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经保护作用研究
1 材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 实验仪器
1.4 实验试剂
2 实验方法
2.1 栝楼桂枝汤的制备
2.2 大鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立
2.3 实验分组与给药方法
2.4 神经功能评分
2.5 TTC染色法
2.6 组织石蜡切片的制作
2.7 组织病理观察(HE染色)
2.8 细胞凋亡率检测(Tunel法)
2.9 实验结果统计学分析
3 实验结果
3.1 GLGZD对MCAO模型大鼠神经功能评分的影响
3.2 GLGZD对MCAO缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积的影响
3.3 GLGZD对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧大脑皮层组织病理变化的影响
3.4 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层神经细胞凋亡的影响
4 讨论
5 小结
第二章 栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注损伤大鼠内质网应激PERK/ATF4信号转导的调控作用
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 实验仪器
1.4 实验试剂
2 实验方法
2.1 动物组织取材
2.2 实时荧光定量qRT-PCR模板DNA的制备及相应指标的定量检测
2.3 蛋白样品的制备
2.4 Western-Blot法测定PERK/ATF4相关蛋白的表达
2.5 免疫组织化学法检测IP3R蛋白表达水平
2.6 免疫荧光法检测GRP78蛋白表达水平
2.7 荧光探针法检测缺血皮层组织中Ca2+、ROS含量
2.8 数据处理与分析
3 实验结果
3.1 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层GRP78 mRNA和总蛋白表达的影响
3.2 GLGZD对MCAO大鼠缺血皮层中PERK、eIF2α蛋白磷酸化水平的影响
3.3 GLGZD对MCAO大鼠缺血皮层中ATF4 mRNA和总蛋白表达的影响
3.4 GLGZD对MCAO大鼠缺血皮层中CHOP mRNA和总蛋白表达的影响
3.5 GLGZD对MCAO大鼠缺血皮层中Ero-1α mRNA和总蛋白表达的影响
3.6 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中Bcl-2 mRNA和总蛋白表达的影响
3.7 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中Bax mRNA和总蛋白表达的影响
3.8 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中Caspase-3激活的影响
3.9 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中ROS和Ca2+含量的影响
3.10 GLGZD对MCAO大鼠缺血侧皮层中SERCA2α、IP3R mRNA和总蛋白表达的影响
4 讨论
5 小结
结论
参考文献
文献综述
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3842150
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