黄芪有效成分对人肾小球足细胞裂孔膜蛋白nephrin和podocin影响的机制研究

发布时间：2024-05-18 08:42

　　目的:应用分子生物学技术分析核苷酸嘌呤霉素(Puromycinaminonucleoside,PAN)诱导损伤的人足细胞裂孔膜在予以不同浓度的黄芪多糖(Astragalus polysa-ccharides,APS)或黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)治疗后相关蛋白的表达变化,比较不同浓度的治疗效果,寻找疗效与浓度之间是否具有相关性,并探究PKC/MAPK通路在其中的作用,推测A PS或AS-Ⅳ保护人足细胞的可能作用机制,为临床治疗提供新的靶向思路。方法:采用细胞毒理测试CCK-8法分别测定PAN造成人足细胞裂孔膜损伤的合理浓度及时间和APS、AS-Ⅳ对人足细胞的最大无毒浓度。予分化完成的人足细胞以PAN刺激进行造模后,应用不同浓度的APS或AS-Ⅳ及溶剂进行处理(正常组及模型组给予维持液),用RT-PCR法检测各组细胞中nephrin及podocin的mRNA水平,用Western blotting法检测各组中nephrin、podocin、PKC、JNK、p38的蛋白水平,分析其变化规律,推测各指标之间、指标与疾病之间的相关关系。结果:1.RT-PCR法显示:模型...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．足细胞分化前４０?Ｘ

图２．足细胞分化前４０?Ｘ图３．足细胞分化完成４０?Ｘ?阁４．足细胞造模后４０?Ｘ??２１??

图３．足细胞分化完成４０?Ｘ?阁４．足细胞造模后４０?Ｘ??

（１０）洗膜及曝光：将条带自二抗中取出后洗膜３次，根据说明书配置曝光液，打开及软件，将条带放入曝光仪，添加曝光液，依步骤曝光。??（１１）抗体洗脱：曝光后再次洗膜３次，将条带浸没于抗体洗脱液中置于脱色摇床上－８０转／ｍｉｎ的速度快速洗脱３０ｍｉｍ洗膜后从封闭开始重新孵育分子量相近....

图５．ＡＰＳ对ＰＡＮ诱导损伤的人足细胞中ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的ｍＲＮＡ表达水平的影响??ｌ

?３．４．１?ＡＰＳ对ＰＡＮ诱导损伤的人足细胞中ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的ｍＲＮＡ表达水平的影响??如表３－４及图５中所不，ＰＡＮ作用与人足细胞后，模型组ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的表达量??较正常组均明显下降（ＰＵ５），差异有统计学意义；而应用不同浓度的ＡＰＳ后ｎｅｐ....

图６．ＡＳ－ＩＶ对ＰＡＮ诱导损伤的人足细胞中ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的ｍＲＮＡ表达水平的影响??

型组相比．卞＜０．０５??３．４．２?ＡＳ－ＩＶ对ＰＡＮ诱导损伤的人足细胞中ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的ｍＲＮＡ表达水、卜的影响??如表３－５及图６中所不，ＰＡＮ作用与人足细胞后，模型组ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的表达Ｗ：??与正常组相比卜降明显（ＰＵ５），有统计学差异；....

本文编号：3976720