加味阳和汤含药血清对乳腺癌MCF-7细胞PI3K/Akt信号通路干预机制的研究

发布时间：2025-01-06 00:39

　　目的:通过观察加味阳和汤含药血清对乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期、凋亡以及PI3K/Akt信号通路相关基因和蛋白表达的影响。初步探讨其干预PI3K/Akt信号通路及抗侵袭转移的分子机制,为进一步探讨温阳化痰法治疗乳腺癌的具体分子机制,拓宽其应用空间奠定研究基础。方法:不同剂量加味阳和汤含药血清干预乳腺癌MCF-7细胞。○1观察细胞生长状态及细胞形态的改变;○2 MTT法检测细胞增殖;○3流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡;○4划痕法及Transwell小室法检测细胞侵袭能力;○5 RT-PCR法测定PI3K、Akt、caspase-3、cyclinD₁、Bcl-2及BaxmRNA的表达水平;○6 Western Blot法测定PI3K、Akt、p-Akt、MMP-2、TIMP-2蛋白的表达。结果:①倒置显微镜下可见,经加味阳和汤含药血清干预后细胞发生不同程度的形态学改变。② MTT法结果显示,加味阳和汤含药血清可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖。③ FCM测定细胞周期结果显示,加味阳和汤含药血清作用于乳腺癌MCF-7细胞48h后,各剂量组G₀/G...

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【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
引言
实验研究
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验动物
        1.3 受试药物
        1.4 主要试剂
        1.5 主要仪器
        1.6 主要试剂配制
    2 实验方法
        2.1 受试药物配制
        2.2 含药血清制备
        2.3 乳腺癌MCF-7细胞悬液制备
        2.4 MTT比色法测定细胞增殖
        2.5 检测细胞侵袭能力
        2.6 流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡
        2.7 实时荧光定量检测PI3K/Akt通路及凋亡相关基因表达
        2.8 WesternBlot检测PI3K、Akt、p-Akt、MMP-2、TIMP-2蛋白的表达
        2.9 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 对MCF-7细胞生长的影响
            3.1.1 对乳腺癌MCF-7细胞形态学的影响
            3.1.2 抑制增殖
        3.2 对MCF-7细胞周期的影响
        3.3 对细胞凋亡的影响
        3.4 对PI3K、Akt、caspase-3、cyclinD1、Bcl-2、Bax磷酸化水平的影响
        3.5 对PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达
        3.6 对细胞侵袭能力的影响
            3.6.1 细胞划痕实验
            3.6.2 Transwell细胞侵袭实验
            3.6.3 肿瘤转移相关因子MMP-2、TIMP-2的表达
讨论
    1 加味阳和汤治疗乳腺癌的中医机制
        1.1 阳虚痰凝致乳腺癌的中医机理
        1.2 温阳化痰法在乳腺癌治疗中的应用
        1.3 加味阳和汤配伍原理
    2 乳腺癌PI3K/Akt信号通路相关发病机制
        2.1 PI3K/Akt信号转导通路的分子结构
        2.2 PI3K/Akt信号传导通路的激活
        2.3 PI3K/Akt信号传导通路的生物效应
        2.4 PI3K/Akt信号通路与乳腺癌发生发展的关系
    3 加味阳和汤抗乳腺癌的作用机制
        3.1 血清药理学方法的选择
        3.2 加味阳和汤对乳腺癌细胞MCF-7生长的抑制作用
        3.3 加味阳和汤调控乳腺癌MCF-7细胞周期
        3.4 加味阳和汤抑制乳腺癌MCF-7细胞凋亡
            3.4.1 抑制细胞凋亡率
            3.4.2 调控细胞凋亡的分子机制
        3.5 抗乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力
        3.6 加味阳和汤干预PI3K/Akt通路的作用
        3.7 加味阳和汤抗乳腺癌MCF-7的网络作用机制
结论
特色与创新
问题与展望
致谢
参考文献
附件1：附图
附件2：文献综述
    参考文献
附件3：文献综述
    参考文献
附件4：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果



本文编号：4023520