益气化瘀方联合干细胞移植促进脊髓损伤修复的实验研究

发布时间：2025-02-11 19:12

　　 目的:观察益气化瘀方联合过表达Mash-1修饰的胚胎干细胞对小鼠脊髓损伤的修复作用。方法:采用钳夹法建立小鼠急性脊髓损伤模型,于造模后第3天将Mash-1修饰的胚胎干细胞移植到脊髓损伤部位,并给予益气化瘀方干预。通过观察小鼠的后肢功能评分、脊髓的剩余面积以及神经营养因子、炎症因子和凋亡相关基因的表达改变;并采用免疫荧光检测OCT3/4、nestin、β-tubulin Ⅲ、GFAP的阳性细胞数目,分析移植细胞在体内的存活和分化情况。结果:与模型组比较,益气化瘀方可减少炎症因子TNF-α和凋亡基因caspase-3的表达,轻微提高小鼠运动功能。与单纯干细胞移植组比较,益气化瘀方联合Mash-1修饰胚胎干细胞移植能减少炎症因子TNF-α的基因表达水平,提高移植细胞的存活数量,进而改善小鼠的后肢运动评分。结论:益气化瘀方能减轻脊髓损伤的炎症反应,增加移植细胞在脊髓损伤部位的存活数量,促进脊髓损伤的修复。

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【部分图文】：

图5 造模后14 d和28d各组神经营养因子、炎症因子和凋亡相关基因的表达情况图

益气化瘀方能轻微改善小鼠脊髓损伤后的神经功能，可能通过减少炎症因子IL-1、TNF-α和凋亡相关基因caspase-3的表达，促进神经营养因子BDNF、NT-3的表达，进而减轻脊髓的继发性损伤。文献报道，益气化瘀方可以减轻慢性脊髓损伤和椎间盘退变引起的炎症反应[7,12]。在之前....

图1 术后第28天各组小鼠的后肢运动功能照片

术后第1天，假手术组的小鼠后肢的运动功能均为正常，评分值为9分；造模后各造模组的小鼠后肢出现明显运动功能障碍，评分均为0。术后第7天，即细胞注射和给药后第4天，干细胞组和联合组的小鼠后肢运动功能有部分恢复，与模型组和中药组比较均具有统计学差异（P<0.05）。在造模后的第14、2....

图2 造模后14d和28d时各组脊髓横切面HE染色图

从脊髓横切面HE染色可见，在造模后的14天和28天时，模型组和中药组小鼠的脊髓横切面剩余面积明显减少，与假手术组比较存在统计学差异（P<0.01）。干细胞组和联合组的小鼠脊髓剩余面积均有明显的恢复，与模型组和中药组比较具有统计学差异（P<0.01）。假手术组、干细胞组和联合组三组....

图3 术后第14d和28d，脊髓组织免疫荧光染色图

由于CE3胚胎干细胞带有GFP，因此可在荧光显微镜下通过绿色荧光跟踪移植细胞在体内的存活数量和所在位置，进一步通过带红色荧光的二抗与不同的一抗结合可观察到移植的细胞在体内的存活和分化情况。免疫荧光染色结果显示，干细胞组与联合组的OCT3/4、nestin、β-tubulinII....

本文编号：4033729