电针预处理对脑缺血大鼠血脑屏障保护效应及AQP-4、Claudin-5的影响

发布时间：2017-10-13 04:09

  本文关键词：电针预处理对脑缺血大鼠血脑屏障保护效应及AQP-4、Claudin-5的影响

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【摘要】：目的观察百会、水沟穴不同时程电针预处理(electroacupuncture preconditioning, EAP)对大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occulusion, MCAO)缺血大鼠脑含水量的影响,同时观察电针预处理对脑缺血大鼠血脑屏障超微结构的影响,并从电针预处理对AQP-4与Claudin-5的影响角度,进一步探讨电针预处理对继发脑缺血大鼠血脑屏障保护效应的可能机制。 方法实验一：将32只清洁级健康雄性SD大鼠随机分成4组(n=8)：假手术组、模型组、电针预处理7天组(EAP7天组)及电针预处理15天组(EAP15天组),各预处理组大鼠进行相应时程的电针预处理后,各预处理组与模型组大鼠建立右侧MCAO模型,假手术组除不结扎及插线栓外,全过程同模型组,并对缺血再灌注大鼠模型进行质量控制,造模术前后监测大脑中动脉血流,缺血再灌注麻醉清醒后进行神经功能评分。造模术后24h取材进行脑含水量测定。另选取小批量SD大鼠16只随机分成模型组及电针预处理15天组,实验处理与同名组别的大鼠相同,采用透射电镜观察血脑屏障的超微结构变化。实验二：将64只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为4组(n=16)：假手术组、模型对照组、EAP7天组及EAP15天组,每组16只,喂养及处理同实验一,取材时各组再随机分成2个亚组(n=8),一组用免疫组化法检测AQP-4与Claudin5免疫阳性细胞表达,另一组用荧光定量PCR法检测AQP-4与Claudin-5mRNA表达水平。 结果大鼠MCAO模型质量控制情况良好,EAP组及模型组大鼠MCAO术后脑血流均下降为基础值的45±10%,MCAO缺血再灌注大鼠麻醉清醒后,模型组、EAP7天组及EAP15天组大鼠神经功能评分明显高于假手术组(P0.01),EAP7天组的神经功能评分明显低于模型组(P0.05),EAP15天组的神经功能评分较模型组明显降低(P0.01),且明显低于EAP7天组(P0.05)；模型组及EAP组大鼠大脑缺血侧血脑屏障AQP-4表达较假手术组明显上调,EAP7天组与EAP15天组AQP-4表达较模型组明显下调(P0.01),EAP15天组AQP-4表达较EAP7天组也明显下调(P0.05)；EAP组及模型组Claudin-5表达较假手术组明显下调,与模型组比较,EAP7天组与EAP15天组Claudin-5表达明显上调(P0.01),且EAP15天组Claudin-5表达较EAP7天组明显上调(P0.01)。 结论1.电针预处理可减轻脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损、脑水肿及血脑屏障超微结构损害；2.电针预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障AQP-4的表达有抑制作用,而对Claudin-5的表达有促进作用；3.电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的保护作用可能是通过调节AQP-4及Claudin-5表达来实现的；4.长时程积累的电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障具有更明显的保护作用。
【关键词】：电针 预处理 脑缺血 血脑屏障 AQP-4 Claudin-5
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R245
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-11
• 实验研究11-38
• 一、实验一 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障保护效应的研究11-19
• (一) 实验材料11-12
• 1. 实验动物11
• 2. 实验试剂11
• 3. 实验仪器与设备11
• 4. 试剂配制及用具制作11-12
• (二) 实验方法12-15
• 1. 动物分组12
• 2. 电针预处理方法12
• 3. 脑缺血再灌注大鼠模型的建立及质量控制12-14
• 4. 脑含水量的测定14
• 5. 血脑屏障超微结构的观察14
• 6. 统计方法14-15
• (三) 结果15-17
• 1. 脑缺血再灌注大鼠模型质量控制结果15-16
• 2. 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠脑含水量的影响16
• 3. 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障超微结构的影响16-17
• (四) 小结17-19
• 二、实验二 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障AQP-4、Claudin-5的影响19-28
• (一) 实验材料19-22
• 1. 实验动物19
• 2. 实验试剂19-20
• 3. 实验仪器与设备20-21
• 4. 试剂配制及用具制作21-22
• (二) 实验方法22-25
• 1. 动物分组22
• 2. 电针预处理方法22
• 3. 脑缺血再灌注大鼠模型的建立及质量控制22
• 4. 血脑屏障AQP-4与Claudin-5阳性细胞的检测22-23
• 5. 血脑屏障AQP-4与Claudin-5 mRNA的检测23-25
• 6. 统计方法25
• (三) 结果25-26
• 1. 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障AQP-4、Claudin-5阳性细胞表达的影响25-26
• 2. 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障AQP-4、Claudin-5 mRNA表达的影响26
• (四) 小结26-28
• 三、分析与讨论28-38
• (一) 脑缺血耐受与针灸预处理28-32
• 1. 脑缺血耐受的概念28
• 2. 诱导脑缺血耐受的预处理方式28-30
• 3. 针灸预处理诱导脑缺血耐受的机制研究概况30-32
• (二) 血脑屏障及AQP-4、Claudin-5在血脑屏障中的作用32-33
• 1. 血脑屏障的生理病理特点32
• 2. AQP-4在血脑屏障中的作用32-33
• 3. Claudin-5在血脑屏障中的作用33
• (三) 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障功能及形态保护效应33-34
• (四) 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障AQP-4、Claudin-5的影响34-35
• 1. 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障AQP-4的影响34-35
• 2. 电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障Claudin-5的影响35
• (五) 血流监测下的MCAO大鼠模型造模方法35-36
• (六) 选穴依据与电针参数依据36-38
• 结论38-39
• 参考文献39-46
• 附图46-50
• 常用英文缩略词50-51
• 致谢51-52
• 文献综述52-59
• 参考文献56-59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1022718