电针对便秘及腹泻型肠易激综合征模型大鼠的影响及机制研究
发布时间：2017-08-16 08:24
本文关键词：电针对便秘及腹泻型肠易激综合征模型大鼠的影响及机制研究
【摘要】：肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）是临床上最常见的慢性功能性疾病之一，其发病率呈逐年上升的趋势，严重危害着患者的心身健康。目前对IBS的治疗主要是以对症治疗为主,但效果并不理想，针灸治疗临床报道很多，，其疗效为广大患者认可。但是其作用的机制目前尚未阐明，故探讨针刺治疗IBS的作用机制对IBS的治疗和预防具有十分重要的意义。 目的：观察电针对C-IBS和D-IBS大鼠模型内脏高敏感性的影响和电针对C-IBS和D-IBS大鼠血浆CGRP和SP含量的影响，探讨CGRP和SP参与电针治疗IBS的作用和机制；检测TRPV1、PAR4、CGRP、SP蛋白和mRNA在结肠组织的表达，从基因水平和蛋白水平上探讨电针对TRPV1、PAR4、CGRP、SP表达的影响。以探讨电针对IBS的作用机制。 方法：(1)采用冰水灌胃法制备C-IBS模型，乙酸灌肠加束缚应激法复制D-IBS大鼠模型。(2)用粪便性状分级和粪便含水量评价便秘和腹泻的症状，以结直肠扩张的疼痛阈值代表内脏高敏感性，评价IBS模型的建立。(3)以大鼠结直肠扩张时大鼠腹部回缩反射的压力阈值为疼痛阈值，以疼痛阈值评估电针治疗对大鼠内脏敏感性的影响。(4)采用酶联免疫吸附法测定大鼠血浆CGRP和SP水平。(5)采用实时荧光定量PCR方法检测大鼠结肠TRPV1、PAR4、CGRP、SP mRNA基因表达水平。(6)采用western blot和免疫组织化学的方法检测大鼠结肠TRPV1、PAR4、CGRP、SP蛋白表达水平。 结果：(1)造模结束后，C-IBS和D-IBS模型大鼠粪便性状分级和粪便含水量的改变符合IBS的粪便改变特征，与正常对照组有显著性差异。C-IBS和D-IBS大鼠疼痛阈值明显降低；各组大鼠结肠病理组织HE染色均未见明显异常改变。(2)电针治疗7天后，C-IBS和D-IBS大鼠便秘或腹泻症状得到明显改善。电针治疗后各组大鼠直肠扩张时的疼痛阈值存在统计学差异。与正常组大鼠相比，C-IBS和D-IBS模型组大鼠疼痛阈值明显降低；与模型组相比，电针上巨虚组和电针大肠俞组大鼠疼痛阈值明显升高。(3)电针结束后各组大鼠血浆CGRP和SP水平存在统计学差异。与C-N组大鼠相比C-M组大鼠血浆CGRP和SP水平升高(P0.01，P 0.01)。与C-M组相比C-DD组和C-DS组大鼠CGRP和SP水平水平显著下降(P0.05，P0.01)。与D-N组大鼠相比D-M组大鼠血浆CGRP和SP水平升高(P0.01，P0.01)。与D-M组相比D-DD组和D-DS组大鼠CGRP和SP水平水平显著下降(P0.05，P0.01)。(4)电针结束后各组大鼠组织中TRPV1、PAR4、CGRP、SP mRNA水平存在统计学差异。C-IBS和D-IBS模型组各基因表达水平存在上升的趋势，电针治疗后各基因表达水平表现出不同程度的下降。(5)电针结束后各组大鼠结肠组织中TRPV1、PAR4、CGRP、SP蛋白含量存在统计学差异。C-IBS和D-IBS模型组结肠组织中各蛋白含量存在上升的趋势，电针治疗后各蛋白含量表现出不同程度的下降。 结论：(1)冰水灌胃法和乙酸灌肠加束缚应激法制备的模型，能很好的模拟临床C-IBS和D-IBS的特征。(2)电针可以有效提高IBS内脏高敏感大鼠对直结肠扩张的感觉阈值，可改善C-IBS和D-IBS的腹痛或腹部不适症状。(3)电针治疗可下调血浆CGRP和SP水平，电针可能通过降低血浆中CGRP和SP含量，降低内脏敏感性，改善胃肠功能。(4)TRPV1、PAR4、CGRP、SP和IBS内脏高敏感性密切相关，电针治疗可下调结肠组织中TRPV1、PAR4、CGRP、SP蛋白和mRNA的表达。电针可以有效调节胃肠功能，降低内脏敏感性，并具有良好的镇痛作用，从而改善便秘型和腹泻型IBS的临床症状。TRPV1、PAR4、CGRP、SP变化可能是电针治疗IBS作用的机制之一。
【关键词】：电针 肠易激综合征 TRPV1 PAR4
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R245
【目录】：
- 提要3-5
- Abstract5-13
- 引言13-15
- 一 便秘及腹泻型肠易激综合征大鼠模型的制备与评价15-24
- 1 实验材料15-16
- 1.1 实验动物15
- 1.2 主要实验仪器15
- 1.3 主要试剂15
- 1.4 主要溶液配制15-16
- 2 实验方法16-19
- 2.1 动物分组16
- 2.2 模型的制备16
- 2.3 大鼠粪便观察及性状评分16-17
- 2.4 粪便含水量17
- 2.5 非伤害性结直肠球囊扩张反射(CRD)容量阈值测定17-18
- 2.6 小肠推进率测定18
- 2.7 结肠组织 HE 染色18-19
- 2.8 统计学处理19
- 3 实验结果19-23
- 3.1 大鼠粪便观察及性状评分19
- 3.2 粪便含水量19-20
- 3.3 腹部回缩反射的最小容量阈值20-21
- 3.4 小肠推进率21-22
- 3.5 结肠组织 HE 染色22-23
- 4 小结23-24
- 二 电针对便秘及腹泻型肠易激综合征大鼠胃肠功能的调节作用24-29
- 1 实验材料24
- 1.1 实验动物24
- 1.2 主要实验仪器24
- 1.3 主要试剂24
- 2 实验方法24-25
- 2.1 动物分组24
- 2.2 模型的制备24
- 2.3 取穴及针刺方法24-25
- 2.4 粪便性状观察及粪便含水量检测25
- 2.5 非伤害性结直肠球囊扩张反射(CRD)阈值测定25
- 2.6 统计处理25
- 3 实验结果25-28
- 3.1 电针对 IBS 大鼠粪便性状和粪便含水量的影响25-27
- 3.2 电针对 IBS 大鼠腹部回缩反射容量阈值的影响27-28
- 4 小结28-29
- 三 电针对便秘及腹泻型肠易激综合征大鼠血浆 CGRP 和 SP 含量的影响29-34
- 1 材料与方法29
- 1.1 实验动物29
- 1.2 主要仪器和器材29
- 1.3 主要试剂29
- 1.4 主要溶液配制29
- 2 实验方法29-31
- 2.1 动物分组29
- 2.2 模型制备29
- 2.3 取穴及针刺方法29-30
- 2.4 ELISA 检测血浆 SP、CGRP 的表达30
- 2.5 统计学处理30-31
- 3 实验结果31-33
- 3.1 电针对 C-IBS 大鼠血浆 CGRP、SP 含量的影响31-32
- 3.2 电针对 D-IBS 模型大鼠血浆 CGRP、SP 的含量的影响32-33
- 4 小结33-34
- 四 电针对便秘及腹泻型肠易激综合征大鼠结肠粘膜 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 表达的影响34-45
- 1 实验材料34-35
- 1.1 实验动物34
- 1.2 实验仪器34
- 1.3 实验试剂34-35
- 2 实验方法35-36
- 2.1 实验分组35
- 2.2 模型制备35
- 2.3 取穴及针刺方法35
- 2.4 免疫组化检测35-36
- 2.5 统计学处理36
- 3 结果36-44
- 3.1 电针对 C-IBS 结肠粘膜 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 表达的影响36-40
- 3.2 电针对 D-IBS 结肠粘膜 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 表达的影响40-44
- 4 小结44-45
- 五 电针对便秘及腹泻型肠易激综合征大鼠结肠组织 TRPV1、PAR4、CGRP、SP mRNA 表达的影响45-58
- 1 实验材料45-46
- 1.1 实验动物45
- 1.2 实验仪器45
- 1.3 实验试剂45-46
- 1.4 主要溶液配制46
- 2 实验方法46-49
- 2.1 实验分组46
- 2.2 模型制备46
- 2.3 取穴及针刺方法46
- 2.4 标本采集46
- 2.5 实时荧光定量 RT-PCR 检测 TRPV1、PAR4、CGRP、SP mRNA 表达46-49
- 2.6 实时定量荧光 PCR 数据处理49
- 2.7 统计学处理49
- 3 结果49-57
- 3.1 基因扩增曲线49-51
- 3.2 基因熔解曲线51-52
- 3.3 数据分析结果52-57
- 4 小结57-58
- 六 电针对便秘及腹泻型肠易激综合征结肠组织 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 蛋白表达的影响58-68
- 1 材料与方法58-60
- 1.1 动物58
- 1.2 主要实验仪器58
- 1.3 主要试剂58-59
- 1.4 主要溶液配制59-60
- 2 实验方法60-63
- 2.1 动物分组60
- 2.2 模型制备60
- 2.3 取穴及针刺方法60
- 2.4 标本采集60
- 2.5 Western 印迹法检测蛋白质60-63
- 2.6 数据处理63
- 3 实验结果63-67
- 3.1 电针对 C-IBS 结肠组织 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 蛋白表达的影响63-65
- 3.2 电针对 D-IBS 结肠组织 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 蛋白表达的影响65-67
- 4 小结67-68
- 讨论68-90
- 1.肠易激综合征的研究现状68-71
- 1.1 肠易激综合征的诊断标准与临床分型68
- 1.2 肠易激综合征的病因和发病机制68-70
- 1.3 肠易激综合征的治疗方法70-71
- 2.针灸治疗与 IBS71-72
- 3. IBS 动物模型研究进展72-75
- 3.1 现有的 IBS 实验动物模型73-74
- 3.2 IBS 实验动物模型的选择74-75
- 4.内脏敏感性与 IBS75-77
- 5. TRPV1 与 IBS77-80
- 5.1 TRPV1 的分子学特征和分布77-78
- 5.2 TRPV1 的生理学作用78
- 5.3 TRPV1 在消化系统中的作用78-79
- 5.4 TRPV1 在 IBS 中的作用79-80
- 6. 蛋白酶激活受体 4 与 IBS80-82
- 6.1 蛋白酶激活受体家族80
- 6.2 PAR4 的结构和分布80-81
- 6.3 PAR4 的功能81-82
- 7. CGRP 与 IBS82-85
- 7.1 CGRP 的分子生物学特征和分布82-83
- 7.2 CGRP 在消化系统中的作用83-84
- 7.3 CGRP 在 IBS 中的作用84-85
- 8. SP 与 IBS85-87
- 8.1 SP 的分子生物学特征和分布85
- 8.2 SP 在消化系统中的作用85-86
- 8.3 SP 在 IBS 中的作用86-87
- 9. 针刺通过 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 调节 IBS 的机制87-90
- 结语90-91
- 参考文献91-104
- 附录104-105
- 查新报告105-114
- 详细摘要114-119
【参考文献】
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本文编号：682249
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