针刺促AD模型小鼠SAMP8海马神经元兴奋性突触传递效应机制研究

发布时间：2017-09-11 18:06

  本文关键词：针刺促AD模型小鼠SAMP8海马神经元兴奋性突触传递效应机制研究

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【摘要】：目的： 研究针刺对阿尔茨海默病模型(快速老化小鼠)SAMP8的海马长时程增强(LTP)的影响,肯定针刺对AD模型海马学习记忆能力影响的电生理效应,同时观察海马神经元超微结构和钙调蛋白酶的变化,揭示针刺介导AD神经康复的相关机制。 方法： 1.确定不同品系小鼠LTP实验定位特点； 2.建立了针刺实验条件下正常Balb/c小鼠模型,Balb/c小鼠体重20-30g。针刺“百会”、“涌泉”穴,每闩一次,7天一疗程,疗程间间隔2天。根据疗程将动物随机分为空白2周组、对照2周组、针刺2周组以及空白4周组、对照4周组、针刺4周组。治疗结束后,即刻将实验动物麻醉,观察针刺对正常Balb/c小鼠的LTP影响； 3.选择9月龄SAMP8小鼠为AD动物模型,随机分为模型对照P8组和针刺P8组。雄性同源同月龄SAMR1小鼠为正常对照R1组。同样的针刺方法结束后,对小鼠海马进行在体LTP测试。以透射电镜观察动物海马CA1区神经元突触界面超微结构突触后致密带(post synaptic density,PSD)厚度、突触间隙宽度、突触界面曲率变化。以免疫组织化学的方法检测海马p-CaMK Ⅱ表达。 结果： 1.确定了不同品系小鼠LTP的电极定位调整方法和不同品系小鼠LTP实验的电极定位坐标特点； 2.正常Balb/c小鼠不同疗程组的LTP结果：LTP引发率以对照4周组最低；空白2周组、对照2周组、针刺2周组三组之间的LTP的群峰电位(PS)和潜伏期幅度变化没有显著性差异：空白4周组、对照4周组与针刺4周组组间比较PS增幅有显著性差异(p0.05),潜伏期没有差异；空白4周组和对照4周组的陌增幅比较有显著性差异(p0.05),潜伏期降幅没有差异；窄自4周组和针刺4周组的Ps增幅和潜伏期没有显著性差异；对照4周组和针刺4周组的PS增幅变化有娃著性謦肄(p0.05)： 3. SAMP8与SAMR1的LTP结果：LTP引发率比较对照P8组和针刺P8组尢差异,正常Rl组较低；正常对照Rl组、模型对照p8组与针刺P8组组间比较PS增幅与潜伏期降幅有显著性差异(p0.05);正常对照Rl针刺P8组比较,PS增幅和潜伏期降幅均有显著性差异(p0.05)：模型对照P8组与针刺P8组比较,潜伏期降幅均有显著差异(P0.05)；正常对照的Rl与模型对照P8组比较,PS增幅与潜伏期变化均无显著性差异； 4.4疗程后,与正常对照Rl组比较,模型对照P8组小鼠海马CAl区神经元PSD变薄(p0.05)；突触间隙增宽(p0.05)：突触界面曲率下降(p0.05)。与模型对照P8组比较,针刺P8组PSD增厚(p0.05)；突触间隙宽度下降(p0.05)：突触界面曲率增大(p0.05); 5.4疗程后,正常对照Rl组、模型对照P8组、针刺P8组的海马p-CaMK Ⅱ总量及亚区含量上匀未见差异(p0.05); 结论： 1.4周的针刺束缚实验条件可能对正常小鼠的学习记忆能力产生非良性作用,针刺可以拮抗由不良刺激造成的学习记忆能力损伤； 2.针刺可以提高SAMP8小鼠的LTP,提示增强突触可塑性刺改善SAMP8小鼠的学习记忆能力的机制之一; 3.通过改善海马神经元的结构参数,进而提高神经元突触兴奋性传递功能,最终提高学习记忆能力,是针刺实现AD神经康复的机制之一。
【关键词】：针刺疗法 陈尔兹海默病 海马长时程增强 快速老化小鼠 突触结构
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R245
【目录】：

• 中文摘要2-4
• ABSTRACT4-7
• 缩略词7-9
• 目录9-12
• 引言12-16
• 第一部分 不同品系小鼠LTP实验定位特点及针刺实验条件对正常Balb/c小鼠的LTP影响16-42
• 1. 不同品系小鼠LTP实验定位特点16-24
• 1.1 材料和方法16-20
• 1.1.1 实验动物16
• 1.1.2 主要试剂16
• 1.1.3 小鼠在体LTP实验方法16-20
• 1.2 实验结果20-24
• 1.2.1 小鼠颅骨固定的调节方法20-21
• 1.2.2 不同品系小鼠LTP的电极定位调整方法21
• 1.2.3 电极深度全范围调节方法21-22
• 1.2.4 不同品系小鼠LTP实验的电极定位坐标22-24
• 2. 针刺实验条件对正常Balb/c小鼠的LTP影响24-42
• 2.1 材料和方法24-26
• 2.1.1 实验动物及分组24
• 2.1.2 实验材料24
• 2.1.3 动物处理24-25
• 2.1.4 小鼠在体LTP检测25
• 2.1.5 技术路线25-26
• 2.2 实验结果26-42
• 2.2.1 Balb/c不同疗程LTP引发率26-27
• 2.2.2 不同疗程组小鼠体重分阶段比较27-29
• 2.2.3 各组LTP的PS增幅和潜伏期降幅比较29-42
• 第二部分 针刺促SAMP8海马神经元兴奋性突触传递效应研究42-52
• 1. 材料与方法42-44
• 1.1 实验材料42
• 1.1.1 实验动物42
• 1.1.2 主要试剂42
• 1.1.3 主要仪器42
• 1.2 动物分组42
• 1.3 动物处理42-43
• 1.4 小鼠在体LTP检测43
• 1.5 数据统计学处理43
• 1.6 研究路线图43-44
• 2. 实验结果44-52
• 2.1 LTP引发率44
• 2.2 各组小鼠体重随时间变化比较44-45
• 2.3 各组LTP的PS增幅和LA降幅比较45-52
• 第三部分 针刺影响SAMP8小鼠海马长时程增强(LTP)机制研究52-63
• 1. 材料与方法52-59
• 1.1 材料和方法52-54
• 1.1.1 实验动物52
• 1.1.2 主要试剂52-53
• 1.1.3 主要仪器53-54
• 1.2 实验方法54-58
• 1.2.1 实验动物分组54
• 1.2.2 免疫组化检测54-55
• 1.2.3 图像采集和分析55-58
• 1.3 统计学处理58
• 1.4 研究路线58-59
• 2. 实验结果59-63
• 2.1 针刺对海马CA1区突触结构的影响59-61
• 2.2 针刺对海马亚区p-CaMKⅡ含量的影响61-63
• 讨论63-81
• 1 LTP是理想的学习记忆评价电生理模型63
• 2 小鼠在体LTP技术研究概况63-64
• 3 针刺实验条件对正常小鼠LTP的影响64-68
• 3.1 针刺实验可能存在的应激因素64-66
• 3.2 针刺实验条件对小鼠体重的影响66-67
• 3.3 针刺对正常小鼠LTP的影响67-68
• 4 针灸对AD模型SAMP8小鼠LTP的影响68-73
• 4.1 针灸治疗老年痴呆的依据68-70
• 4.2 本实验中AD模型SAMP8的应用情况和选择依据70
• 4.3 针刺能够改善SAMP8的LTP70-73
• 5 针刺改变神经突触结构是影响LTP的重要形态学机制73-77
• 5.1 针刺对突触结构的影响73-74
• 5.2 海马学习记忆与突触结构变化的相关性74-76
• 5.3 针刺影响海马突触形态进而促进学习记忆功能改善76-77
• 6 针刺影响LTP依赖CaMKⅡ的变化77-81
• 6.1 CaMKⅡ是产生LTP的重要细胞因子78
• 6.2 CaMKⅡ在LTP维持阶段的作用78-79
• 6.3 针刺对正常小鼠LTP的影响79
• 6.4 针刺通过影响CaMK Ⅱ的变化改变老年大鼠学习记忆能力79-81
• 全文结论81-82
• 问题与展望82-84
• 参考文献84-91
• 致谢91-92
• 附件1：综述92-102
• 附件2：博士在读期间公开发表的学术论文102-103

【参考文献】

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本文编号：832245