电针足阳明经（穴）对大鼠胃黏膜细胞EGFR及其ERK信号转导机制的影响

发布时间：2017-09-23 14:23

  本文关键词：电针足阳明经（穴）对大鼠胃黏膜细胞EGFR及其ERK信号转导机制的影响

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【摘要】：目的：以中医经络学说中经脉-脏腑相关理论为指导,观察电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜损伤的修复效应、大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和c-myc表达的影响,从器官、细胞、分子水平多层次系统地探讨“足阳明经与胃相关”的物质基础以及电针足阳明经(穴)参与胃黏膜损伤修复的信号转导途径。 方法：采用水浸束缚应激法(WRS)制作应激性大鼠胃黏膜损伤模型,以电针足阳明经“足三里”、“梁门”、“四白”穴为施治因素,按Guth等标准记录大鼠胃黏膜损伤指数,光镜下观察胃黏膜组织形态学变化；采用免疫组化和逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测胃黏膜细胞EGFR蛋白和基因的表达；免疫组化和免疫印迹法(Western blot)检测胃黏膜细胞ERK磷酸化水平；RT-PCR法检测胃黏膜细胞c-myc基因的表达。 结果：①经造模后,模型组大鼠胃黏膜损伤指数最高,正常组大鼠胃黏膜损伤指数最低,两组间差异有非常显著性意义(p0.01),说明造模是成功的；电针胃经组和电针胆经组大鼠胃黏膜损伤指数均明显降低,与模型组比较有非常显著性差异(P＜0.01),其中电针胃经组大鼠胃黏膜损伤指数降低最为明显,与电针胆经组比较有非常显著性差异(P＜0.01)； ②在电针足阳明经(穴)后提取的不同稀释度血清对大鼠胃黏膜细胞EGFR表达差异影响中,1／10胃经血清组大鼠胃黏膜细胞EGFR表达与1／2、1／5和1／20胃经血清组比较均有非常显著性差异(P0.01),大鼠胃黏膜细胞EGFR表达强弱依次为：1／10胃经血清组1／20胃经血清组1／5胃经血清组1／2胃经血清组； ③在与电针足阳明经(穴)或足少阳经(穴)提取的血清孵育后,胃经组和胆经组大鼠胃黏膜细胞EGFR及其基因的表达均明显增强,与正常组、模型组比较均有非常显著性差异(P0.01)；其中胃经组大鼠胃黏膜细胞EGFR及其基因的表达又最为明显,与胆经组比较有显著性差异(P0.05)； ④在与电针足阳明经(穴)或电针足少阳经(穴)提取的血清孵育后,胃经组和胆经组大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化、c-myc基因表达均明显升高,与正常组、模型组比较均有非常显著性差异(P0.01)；胃经组大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化、c-myc基因表达升高最为明显,与胆经组比较均有非常显著性差异(P0.01)；当用PD153035阻断EGFR后,胃经+PD153035组大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化、c-myc基因表达均明显降低,与胃经组比较均有非常显著性差异(P0.01)。 结论：①电针足阳明经(穴)可促进大鼠胃黏膜损伤的修复,足阳明经与胃具有相对的特异性联系； ②电针足阳明经(穴)后提取的不同稀释度血清皆能使大鼠胃黏膜细胞EGFR蛋白的表达增强,但存在一定的浓度效应相关性,1／10稀释度血清的效应最为明显； ③电针足阳明经(穴)后提取的血清可提高大鼠胃黏膜细胞EGFR及其基因的表达,EGFR是足阳明经与胃相关的重要物质基础； ④电针足阳明经(穴)后提取的血清可提高大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化和c-myc基因表达水平,并且上述效应可随EGFR被阻断而减弱,EGFR是电针足阳明经(穴)对胃黏膜损伤修复的调节位点,ERK和c-myc是足阳明经与胃相关的重要物质基础； ⑤电针足阳明经(穴)对胃黏膜损伤修复的细胞信号转导可能是通过激活EGFR及其ERK信号转导途径而实现的； ⑥利用针刺穴位后所提取的血清与离体器官、组织、细胞相互作用,以探讨针刺效应及其作用机制,值得做进一步更深入的研究。
【关键词】：足阳明经 电针 胃黏膜细胞 血清 表皮生长因子受体 细胞外调节蛋白激酶 c-myc 细胞信号转导
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R245.399
【目录】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 英文缩略语14-15
• 引言15-17
• 第一部分 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜损伤修复的组织形态学影响17-25
• 1.材料与方法17-21
• 1.1 动物来源、分组与造模方法17-18
• 1.2 穴位定位与电针方法18-19
• 1.3 主要仪器19
• 1.4 实验试剂19-20
• 1.5 胃黏膜损伤指数计分20
• 1.6 光镜标本制作程序20
• 1.7 统计学方法20-21
• 2.结果与分析21-25
• 2.1 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜损伤修复的肉眼观察结果21-22
• 2.2 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜损伤指数的影响22-23
• 2.3 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜损伤修复的光镜观察结果23-25
• 第二部分 电针足阳明经(穴)血清对大鼠胃黏膜细胞EGFR表达的浓度效应相关性研究25-34
• 1.材料与方法25-30
• 1.1 动物来源、分组与造模方法25-26
• 1.2 穴位定位与电针方法26
• 1.3 主要仪器26-27
• 1.4 实验试剂27
• 1.5 正常大鼠胃黏膜细胞的分离方法27-29
• 1.6 大鼠血清的提取及与正常大鼠胃黏膜细胞的作用方法29
• 1.7 大鼠胃黏膜细胞EGFR表达检测方法29-30
• 1.8 统计学方法30
• 2.结果与分析30-34
• 2.1 正常大鼠胃黏膜细胞的分离结果30-31
• 2.2 电针足阳明经(穴)血清对大鼠胃黏膜细胞EGFR表达的浓度效应相关性结果31-34
• 第三部分 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞EGFR及其基因表达的影响34-42
• 1.材料与方法34-37
• 1.1 动物来源、分组与造模方法34-35
• 1.2 穴位定位与电针方法35
• 1.3 主要仪器35
• 1.4 实验试剂35-36
• 1.5 正常大鼠胃黏膜细胞的分离方法36
• 1.6 大鼠血清的提取及与正常大鼠胃黏膜细胞的作用方法36
• 1.7 大鼠胃黏膜细胞EGFR表达的检测方法36
• 1.8 大鼠胃黏膜细胞EGFR基因表达的检测方法36-37
• 1.9 统计学方法37
• 2.结果与分析37-42
• 2.1 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞EGFR表达的影响38-40
• 2.2 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞EGFR基因表达的影响40-42
• 第四部分 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞EGFR阻断前后ERK和c-myc基因的影响42-58
• 1.材料与方法42-48
• 1.1 动物来源、分组与造模方法42-43
• 1.2 穴位定位与电针方法43-44
• 1.3 主要仪器44
• 1.4 实验试剂44
• 1.5 正常大鼠胃黏膜细胞的分离方法44
• 1.6 大鼠血清的提取、胃黏膜细胞EGFR阻断途径及与血清的作用方法44-45
• 1.7 大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化的检测方法45-46
• 1.8 大鼠胃黏膜细胞c-myc基因表达的检测方法46-48
• 1.9 统计学方法48
• 2.结果与分析48-58
• 2.1 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞ERK的影响48-51
• 2.2 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞EGFR阻断前后ERK的影响51-54
• 2.3 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞c-myc基因的影响54-55
• 2.4 电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞EGFR阻断前后c-myc基因的影响55-58
• 讨论58-81
• 一、祖国医学对足阳明经与胃相关规律的认识58-61
• 二、现代医学对胃黏膜损伤修复机制的认识61-64
• 三、电针足阳明经(穴)对胃黏膜损伤的修复效应64-67
• 四、电针足阳明经(穴)对胃黏膜损伤修复影响与EGFR的关系67-71
• 五、电针足阳明经(穴)对胃黏膜损伤修复影响与ERK、c-myc的关系71-74
• 六、电针足阳明经(穴)调节胃黏膜损伤修复的信号转导机制探讨74-77
• 七、电针足阳明经(穴)与电针足少阳经(穴)效应差异分析77
• 八、针灸血清学方法的探讨77-80
• 九、问题与展望80-81
• 结论81-82
• 致谢82-83
• 参考文献83-90
• 附录90-110
• 1.综述90-108
• 2.攻读博士学位期间发表的论文、科研、交流学习及获奖情况108-110

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：905741