针刺对MCAO大鼠星形胶质细胞调节神经—血管功能的影响及机制研究

发布时间：2017-09-25 21:20

  本文关键词：针刺对MCAO大鼠星形胶质细胞调节神经—血管功能的影响及机制研究

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【摘要】：目的：研究针刺内关穴、曲池穴对MCAO大鼠神经功能损伤恢复、星形胶质细胞激活、脑微循环血流量及脑组织葡萄糖代谢的影响，探讨针刺对MCAO大鼠星形胶质细胞调节脑微循环血流量及葡萄糖代谢的作用机制，为阐释针刺治疗缺血性脑中风的机制提供实验研究依据。 方法：采用线栓法建立大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠模型，连续针刺内关穴、曲池穴7天，通过神经行为学、组织形态学、免疫组织化学、实时定量PCR、WesternBlot等方法，观察针刺对MCAO大鼠神经功能恢复、脑微循环血流量、脑组织谷氨酸含量、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、代谢性谷氨酸受体（mGluR5）mRNA、花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶（CYP2C11）mRNA表达的影响，探讨针刺内关穴、曲池穴对星形胶质细胞活化及其调节脑微循环血流量的影响及作用机制；通过观察针刺对MCAO大鼠乳酸及丙酮酸含量、脑组织GFAP蛋白的表达、微血管内皮细胞葡萄糖转运蛋白GLUT1和单羧酸转运体MCT1、神经元葡萄糖转运蛋白GLUT3、单羧酸转运体MCT2的表达的影响，探讨针刺内关穴、曲池穴治疗对MCAO大鼠星形胶质细胞调节脑组织糖代谢的影响及作用机制。 结果： 1.连续针刺曲池穴、内关穴7天能够显著改善MCAO大鼠神经功能损伤，促进其运动功能的恢复，针刺曲池穴与针刺内关穴的效应无显著性差异。 2.针刺内关穴、曲池穴能够促进MCAO大鼠星形胶质细胞活化，表现为星形胶质细胞的增多及GFAP mRNA、GFAP蛋白表达的增强。 3.针刺显著提高MCAO大鼠脑微循环血流量以及MCAO大鼠脑组织中mGluR5mRNA、CYP2C11mRNA的表达，内关穴在提高mGluR5mRNA的表达方面明显优于曲池穴。针刺内关穴、曲池穴可以有效减少MCAO大鼠脑组织中过量的谷氨酸，且内关穴效果优于曲池穴。 4.针刺内关穴、曲池穴能够显著提高MCAO大鼠脑组织中丙酮酸含量，以及葡萄糖转运蛋白GLUT1、GLUT3，单羧酸转运体MCT1的表达，同时显著降低MCAO大鼠脑组织中乳酸的含量。 结论：针刺内关穴、曲池穴，能够激活星形胶质细胞，一方面通过促进mGluR5mRNA及CYP2C11mRNA的表达，使微血管平滑肌舒张，增加MCAO大鼠脑微循环血流量；另一方面通过星形胶质细胞的激活，，单羧酸转运功能增强，可以促进无氧糖酵解产物乳酸的转运及利用，以满足神经元在脑缺血时的能量需求。这可能是针刺治疗缺血性脑中风的重要机制之一。 此外，针刺内关穴、曲池穴，能够减少缺血脑组织中过度堆积的谷氨酸，减轻其神经毒性作用；并显著增强葡萄糖转运蛋白在微血管内皮细胞及神经元中的表达，增强葡萄糖的转运及利用，有利于缺血脑组织神经功能的恢复。
【关键词】：针刺 星形胶质细胞 神经-血管功能 MCAO 大鼠
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R245
【目录】：

• 提要4-6
• Abstract6-12
• 引言12-14
• 一 连续针刺七天对 MCAO 大鼠脑功能恢复及组织形态学改变的影响14-25
• 1 实验材料14-15
• 1.1 实验动物14
• 1.2 主要试剂14
• 1.3 主要实验仪器14-15
• 2 实验方法15-17
• 2.1 模型复制及动物分组15
• 2.2 针刺穴位及方法15-16
• 2.3 指标检测16-17
• 2.4 统计学方法17
• 3 实验结果17-24
• 3.1 MCAO 大鼠一般状态17
• 3.2 针刺对 MCAO 大鼠神经体征评分的影响17-18
• 3.3 针刺对 MCAO 大鼠 BWT 评分的影响18-20
• 3.4 针刺对 MCAO 大鼠脑组织形态结构的影响20-24
• 4 小结24-25
• 二 针刺对 MCAO 大鼠星形胶质细胞活化的影响25-45
• 1 实验材料25-27
• 1.1 实验动物25
• 1.2 主要试剂25-27
• 1.3 主要实验仪器27
• 2 实验方法27-38
• 2.1 动物模型复制及分组27-28
• 2.2 针刺方法28
• 2.3 缺血侧脑组织切片的制作28
• 2.4 免疫组织化学法检测缺血脑组织中 GFAP 的表达28-29
• 2.5 实时定量 PCR 检测缺血脑组织中 GFAP mRNA 的表达29-32
• 2.6 Western Blot 检测缺血脑组织中 GFAP 的表达32-38
• 3 实验结果38-44
• 3.1 针刺对星形胶质细胞表达 GFAP 的影响38-41
• 3.2 针刺对缺血脑组织中 GFAP mRNA 表达的影响41-43
• 3.3 针刺对 MCAO 大鼠缺血脑组织中 GFAP 表达的影响43-44
• 4 小结44-45
• 三 针刺对软脑膜微循环血流量的影响及其调节机制研究45-55
• 1 实验材料45
• 1.1 实验动物45
• 1.2 主要试剂45
• 1.3 主要实验仪器45
• 2 实验方法45-47
• 2.1 模型复制及动物分组45-46
• 2.2 针刺方法46
• 2.3 软脑膜微循环血流量检测46
• 2.4 酶化学法检测缺血脑组织中谷氨酸的含量46-47
• 2.5 实时定量 PCR 检测缺血脑组织中 mGluR5 mRNA 及 CYP2C11 mRNA 的表达47
• 3 实验结果47-54
• 3.1 针刺对软脑膜微循环血流量的影响47-50
• 3.2 针刺对缺血脑组织谷氨酸含量的影响50-51
• 3.3 针刺对缺血脑组织中 mGluR5 mRNA 表达的影响51-52
• 3.4 针刺对缺血脑组织中 CYP2C11 mRNA 表达的影响52-54
• 4 小结54-55
• 四 针刺对 MCAO 大鼠脑组织葡萄糖代谢的影响及相关机制研究55-68
• 1 实验材料55-56
• 1.1 实验动物55
• 1.2 主要试剂55
• 1.3 主要实验仪器55-56
• 2 实验方法56-58
• 2.1 模型复制及动物分组56
• 2.2 针刺方法56
• 2.3 酶化学法检测缺血脑组织中乳酸的含量56
• 2.4 酶化学法检测缺血脑组织中丙酮酸的含量56-57
• 2.5 免疫组化检测缺血脑组织中 GLUT1 蛋白的表达57
• 2.6 Western Blot 检测缺血脑组织中 GLUT1、GLUT3、MCT1、MCT2 的表达57
• 2.7 统计学方法57-58
• 3 实验结果58-67
• 3.1 针刺对 MCAO 大鼠缺血脑组织乳酸的影响58-59
• 3.2 针刺对 MCAO 大鼠缺血脑组织丙酮酸的影响59-60
• 3.3 针刺对缺血脑组织中内皮细胞表达 GLUT1 蛋白的影响60-63
• 3.4 针刺对 MCAO 大鼠缺血脑组织中 GLUT3 表达的影响63-64
• 3.5 针刺对 MCAO 大鼠缺血脑组织中 MCT1 表达的影响64-66
• 3.6 针刺对 MCAO 大鼠缺血脑组织中 MCT2 表达的影响66-67
• 4 小结67-68
• 讨论68-84
• 1.中医对缺血性脑中风的认识68-70
• 1.1 中风病因病机的历史沿革68
• 1.2 中风的辨证要点68-69
• 1.3 中风的治疗原则69
• 1.4 中风的治疗方法69-70
• 2. 脑缺血动物模型的复制方法70-71
• 2.1 常用脑缺血动物模型复制方法70-71
• 2.2 本实验的模型复制情况71
• 3. 脑缺血动物模型神经功能的评价方法71-74
• 3.1 常用脑缺血动物模型神经功能评价标准71-74
• 3.2 本实验的神经功能评价情况74
• 4. 针刺治疗缺血性脑中风的选穴及针法研究74-77
• 4.1 “醒脑开窍”针法74-75
• 4.2 “保肝护脑”针法75
• 4.3 “调神通络”针法75-76
• 4.4 “子午流注纳甲”针法76
• 4.5 本实验的选穴及针法76-77
• 5. 实验结果及分析77-81
• 5.1 针刺对神经功能恢复及脑组织形态改变的影响77
• 5.2 针刺对星形胶质细胞激活的调节作用77-79
• 5.3 针刺对脑微循环血流量的改善作用79-80
• 5.4 针刺对脑组织葡萄糖代谢的影响80-81
• 6. 针刺与星形胶质细胞的活化及神经-血管功能81-84
• 结语84-86
• 参考文献86-92
• 综述92-99
• 参考文献96-99
• 附录99-100
• 致谢100-101
• 查新报告101-109
• 发表论文109-117
• 详细摘要117-127

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：919648