二氢杨梅素对人白血病Jurkat细胞增殖与凋亡的影响及机制
本文关键词：二氢杨梅素对人白血病Jurkat细胞增殖与凋亡的影响及机制
更多相关文章： 二氢杨梅素 急性T细胞白血病 增殖 凋亡 自噬 自噬相关蛋白 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
【摘要】：目的:探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响,并从mTOR/自噬途径的角度探讨其可能的作用机制。方法:体外培养人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞,用含不同浓度(20、40、60、80和100 mg/L)的DMY和5%胎牛血清的RPMI1640完全培养液培养Jurkat细胞12、24和48小时。用60 mg/L的DMY和10 mmol/L细胞自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)共同处理Jurkat细24小时。四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法用来检测细胞活力并计算细胞增殖抑制率,流式细胞术用来检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,采用透射电镜观察Jurkat细胞自噬体形成等超微结构。采用Western Blot检测Jurkat细胞中自噬相关基因Beclin 1、LC3和p62的表达。采用实时定量PCR和Western Blot检测Jurkat细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)mRNA的表达。结果:1.DMY显著抑制了Jurkat细胞的增殖(P㩳0.05),呈现剂量和时间依赖性,在12、24和48小时时间点的药物半数抑制浓度(50%inhibition concentration,IC50)逐渐降低,IC50分别为217、155和92 mg/L,最佳作用浓度和时间是60mg/L处理24小时。2.DMY能以剂量和时间依赖的方式诱导Jurkat细胞的凋亡(P㩳0.05),最佳作用浓度和时间是60 mg/L处理24小时。3.对照组Jurkat细胞的细胞形态正常,呈不规则形,细胞核呈圆形或椭圆形,核膜和核仁清晰可见,核染色质均匀分布,细胞质中可发现大量的线粒体、内质网和核糖体等细胞器,可见少量自噬泡或自噬体。DMY(60 mg/L)处理24小时组Jurkat细胞多呈不规则形,细胞核稀疏成网状,细胞核内可发现部分染色质固缩,部分线粒体出现空泡化,其他细胞器部分肿胀,少部分细胞膜出现破裂,细胞肿胀明显,细胞质中可发现双层膜结构的自噬小体和单层膜的自噬溶酶体,其中包含有处在不同降解阶段的胞浆成分或细胞器;与对照组比较,DMY(60 mg/L)处理24小时组细胞中双层膜结构的自噬小体和单层膜的自噬溶酶体的数量及自噬泡占胞质总面积的百分率显著性增加(P㩳0.05)。4.与对照组比较,DMY(60 mg/L)处理24小时组Jurkat细胞中自噬相关基因Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达显著上调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值显著增加,而p62的表达显著降低(P㩳0.05)。5.与对照组比较,DMY(60 mg/L)处理24小时组Jurkat细胞中mTOR mRNA和蛋白的表达均显著降低(P㩳0.05)。6.自噬抑制剂3-MA部分取消了DMY抑制Jurkat细胞增殖和诱导Jurkat细胞凋亡的作用(P㩳0.05)。结论:二氢杨梅素可抑制Jurkat细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与DMY下调mTOR的表达,诱导细胞自噬有关。
【关键词】：二氢杨梅素 急性T细胞白血病 增殖 凋亡 自噬 自噬相关蛋白 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.7
【目录】：
- 摘要4-6
- Abstract6-12
- 中英文缩略词12-14
- 第1章 绪论14-18
- 第2章 材料与方法18-26
- 2.1 试剂和仪器18-19
- 2.1.1 主要药品及试剂18-19
- 2.1.2 主要仪器19
- 2.2 实验中主要溶液的配制19-20
- 2.2.1 磷酸盐缓冲液的配制19
- 2.2.2 上样缓冲液(6×)的配制19
- 2.2.3 TBST缓冲液的配制19-20
- 2.2.4 MBST细胞裂解液的配制20
- 2.2.5 TBE缓冲液(10×)的配制20
- 2.3 实验方法20-26
- 2.3.1 细胞复苏和培养20
- 2.3.2 实验分组20-21
- 2.3.3 MTT比色法检测细胞增殖21
- 2.3.4 流式细胞术检测细胞凋亡21
- 2.3.5 透射电镜检测21-22
- 2.3.6 Real-time PCR分析22-23
- 2.3.7 BCA法测定蛋白浓度23
- 2.3.8 Western Blot分析23-25
- 2.3.9 统计学方法25-26
- 第3章 结果26-34
- 3.1 二氢杨梅素抑制急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖26-27
- 3.2 二氢杨梅素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的影响27-28
- 3.3 二氢杨梅素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞超微结构的影响28-29
- 3.4 二氢杨梅素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞Beclin 1 表达的影响29-30
- 3.5 二氢杨梅素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞LC3表达的影响30-31
- 3.6 二氢杨梅素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞p62表达的影响31
- 3.7 二氢杨梅素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞中mTOR表达的影响31-32
- 3.8 自噬抑制剂 3-MA对二氢杨梅素抑制Jurkat细胞增殖的影响32
- 3.9 自噬抑制剂 3-MA对二氢杨梅素诱导Jurkat细胞调亡的影响32-34
- 第4章 讨论34-38
- 第5章 结论38-40
- 参考文献40-46
- 综述46-56
- 参考文献50-56
- 硕士期间发表的论文56-58
- 致谢58
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，本文编号：1002061
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