双硫仑增强垂体瘤细胞替莫唑胺化疗敏感性的研究

发布时间：2017-10-11 01:23

  本文关键词：双硫仑增强垂体瘤细胞替莫唑胺化疗敏感性的研究

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【摘要】：背景与目的:侵袭性垂体腺瘤的治疗是目前神经外科领域的一个难题,其高复发率和低治愈率一直是影响临床疗效的重要原因。替莫唑胺作为目前治疗后放疗和常规药物治疗(溴隐亭等)不敏感的垂体瘤的最后一线药物,提高肿瘤对替莫唑胺的敏感性具有重要的意义。最近研究表明双硫仑(DSF)能提高胶质瘤对替莫唑胺(TMZ)的敏感性,双硫仑(DSF)能否也在垂体瘤中提高肿瘤组织对替莫唑胺的敏感性目前尚未见报道。本课题针对双硫仑(DSF)联合替莫唑胺(TMZ)能否增强垂体瘤细胞对替莫唑胺化疗敏感性进行相关研究。方法:收集对术后放疗和常规药物治疗(溴隐亭等)不敏感的垂体瘤组织6例,其中对替莫唑胺敏感的3例,对替莫唑胺不敏感的3例。应用Western blot的方法检测MGMT在垂体腺瘤组织内的蛋白表达水平的变化。体外实验分别应用TMZ,DSF和TMZ联合DSF刺激垂体瘤细胞MMQ,CCK8法检测细胞增殖。Western blot的方法检测在垂体腺瘤细胞内MGMT蛋白表达水平的变化。将MMQ垂体细胞皮下注射裸鼠,形成垂体瘤细胞裸鼠皮下移植瘤,应用TMZ,DSF和TMZ联合DSF刺激裸鼠,Brud和TUNEL染色法检测细胞增殖和细胞凋亡。结果:Western blot结果显示在术后放疗和常规药物治疗(溴隐亭等)不敏感的垂体瘤组织中,对替莫唑胺敏感的肿瘤组织MGMT蛋白水平低,对替莫唑胺不敏感的肿瘤组织MGMT蛋白水平高。相对于单独应用TMZ或DSF,TMZ联合DSF对垂体瘤MMQ细胞的细胞增殖均有抑制作用;Western blot结果表明TMZ联合DSF使用明显抑制MGMT蛋白的表达;相对于单纯TMZ,DSF组,TMZ联合DSF能更加明显的抑制移植瘤的生长;Brud和TUNEL染色法显示TMZ联合DSF能促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。结论:双硫仑DSF联合替莫唑胺TMZ使用可能抑制垂体瘤细胞增殖,并能够抑制MGMT蛋白的表达;双硫仑DSF联合替莫唑胺TMZ使用能够通过促进细胞凋亡,抑制细胞增殖途径抑制体内移植瘤的生长。
【关键词】：侵袭性垂体瘤 双硫仑 替莫唑胺 MGMT
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R736.4
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-6
• 符号表6-10
• 第1章 绪论10-22
• 1.1 研究背景10-20
• 1.1.1 替莫唑胺的临床应用12-20
• 1.2 研究目的20-21
• 1.3 研究意义21-22
• 第2章 材料与方法22-36
• 2.1 实验分组22-23
• 2.2 主要试剂材料23
• 2.3 主要试验设备23-24
• 2.4 主要试剂配制方法24-27
• 2.5 免疫组化方法27-28
• 2.5.1 实验步骤27-28
• 2.5.2 免疫组化结果判读方法28
• 2.6 Western blot分析28-31
• 2.6.1 样品的制备28-29
• 2.6.2 蛋白定量29
• 2.6.3 Western blot制胶29
• 2.6.4 蛋白上样29-30
• 2.6.5 蛋白电泳30
• 2.6.6 转膜30
• 2.6.7 封闭非特异性抗原30
• 2.6.8 加一抗30
• 2.6.9 加二抗30-31
• 2.6.10增强化学发光法（ECL)显色31
• 2.7 TUNEL染色检测细胞凋亡31-33
• 2.7.1 试剂配制31
• 2.7.2 实验步骤31-33
• 2.8 细胞培养33
• 2.9 CCK8方法33-34
• 2.9.1 细胞增值检测34
• 2.9.2 细胞毒性检测34
• 2.10 裸鼠皮下MMQ垂体瘤细胞移植瘤模型的建立34-35
• 2.10.1 裸鼠培养34-35
• 2.10.2 细胞准备35
• 2.10.3 裸鼠移植瘤注射35
• 2.10.4 肿瘤大小测量35
• 2.10.5 移植瘤处理35
• 2.11 统计分析35-36
• 第3章 结果36-40
• 3.1 Western blot分析MGMT在替莫唑胺敏感垂体腺瘤组织和替莫唑胺耐药垂体瘤组织中的表达36
• 3.2 CCK-8 检测和Western blot检测TMZ，DSF及TMZ与DSF联合使用对MMQ垂体腺瘤细胞的增殖抑制作用和MGMT水平的变化36-37
• 3.3 TUNEL及BRDU检测显示TMZ，，DSF及TMZ与DSF联合使用对MMQ垂体腺瘤细胞的促凋亡及抑制增殖作用37-40
• 第4章 讨论40-46
• 第5章 结论46-47
• 参考文献47-55
• 缩略语词汇表55-56
• 致谢56-57
• 攻读学位期间的研究成果57

【共引文献】

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6 李晓鹏;垂体瘤出血坏死临床特征分析[D];华中科技大学;2014年

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7 张烁;慢性心力衰竭患者血清胱抑素C水平与心室重塑的相关性研究[D];皖南医学院;2014年

本文编号：1009714